目的:根据复发性流产发展过程,采用基因组学的研究方法,检测复发性流产大鼠模型子宫蜕膜中AQP1及AQP2基因表达的情况,探讨母胎界面液体转运的调节通路,从液体转运及“肾主水”的角度阐明寿胎丸防治复发性流产可能的作用机制及物质基础,为中药治疗复发性流产提供理论依据。方法:经检疫1周的健康性成熟且未经交配生育的,60只8周龄、体质量(210.32±10.19)g的SPF级SD雌性大鼠;30只10周龄、体质量(252.83±5.67)g的SPF级SD雄性大鼠。适应性喂养1周后,按雌鼠:雄鼠2:1的比例进行合笼交配,雌性大鼠于次日早晨观察到其阴道口有阴道栓脱落(即阴道口乳白色固体),且其阴道涂片可见大量精子作为妊娠第1天。将60只孕鼠按照随机列表法分为6个组,分别为寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组,寿胎丸低剂量组、西药对照组(地屈孕酮)、模型组、正常对照组,每组10只,6组按顺序标记为A-F组。妊娠的第1~9天的每日上午,寿胎丸组孕鼠予以寿胎丸中药药液灌胃2mL/d,且每组剂量分别为高剂量组(2.0g/Kg)、中剂量组(1.0g/Kg)、低剂量组(0.5g/Kg);地屈孕酮组孕鼠予地屈孕酮水溶液灌胃(3.02mg/Kg),2mL/d;模型组和正常妊娠组孕鼠每日上午予生理盐水灌胃2ml/d。妊娠的第1~9天的每日下午,正常妊娠组孕鼠予以生理盐水灌胃2ml/d,其余各组孕鼠均予以羟基脲片水溶液灌胃(450mg/Kg),2ml/d,妊娠的第10天早上A-E组孕鼠予米非司酮片水溶液灌胃(4.0mg/kg),2ml/d。且灌胃期间分别于第1、4、9日测量孕鼠的饮食和饮水量、体质量。所有孕鼠于第11日断颈处死,开腹分离妊娠子宫,计算各组孕鼠流产率,并分离着床部位的子宫蜕膜组织,用预冷的PBS缓冲液冲洗干净后,用滤纸吸净液体,装于冻存管内,迅速置于液氮灌中保存备用,后冻存在-80℃冰箱中等待检测,最后用RT-PCR法进行检测。结果:1.胚胎发育情况所有孕鼠于第11日(末次给药24h后)断颈处死,开腹解剖分离孕鼠妊娠子宫。正常组:可观察到淡红色的子宫,胚胎组织大小一致,无竹节样改变,且宫腔内无明显的瘀血及瘀血点,着床点无明显缩小,胚胎组织均正常未被机化。模型组:可观察到暗红色或暗黑色的子宫,胚胎组织大小不一,呈现出竹节样的改变,宫腔内可发现黑色瘀血,或为着床处可见瘀血点,或着床点明显缩小,或胚胎组织已被机化。地屈孕酮组:可观察到淡红色或暗红色的子宫,胚胎组织大小基本一致,偶为不均一,无竹节样改变,宫腔内偶有瘀血点,但着床点无明显缩小,胚胎组织均正常未被机化。寿胎丸高剂量组、中剂量组、低剂量组:三组孕鼠可观察到淡红色或暗红色的子宫,大部分胚胎组织大小一致,小部分为不均一,无竹节样改变,宫腔内偶有瘀血点,但着床点无明显缩小,胚胎组织均正常未被机化。2.各组孕鼠胚胎流产率的比较与正常妊娠组的孕鼠相比,寿胎丸低剂量组、中剂量组、高剂量组,地屈孕酮组以及模型组的孕鼠的流产率均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);使用不同药物进行干预后,与模型组孕鼠进行比较,寿胎丸低剂量组、中剂量组、高剂量组,以及地屈孕酮组孕鼠的流产率均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与地屈孕酮组孕鼠进行比较,寿胎丸高剂量组孕鼠的流产率,无明显差异(P0.05)。3.各组孕鼠蜕膜组织中AQP1基因表达差异与正常妊娠组对比,模型组P0.01,差异具有显著统计学意义,提示模型组孕鼠子宫蜕膜组织中AQP1基因表达水平明显降低;进行药物干预后,与模型组比较,寿胎丸高剂量组、中剂量组、低剂量组及地屈孕酮组,P值均0.01,差异具有显著统计学意义,提示药物干预后的,孕鼠蜕膜组织中AQP1基因表达水平显著升高;与寿胎丸高剂量组对比,寿胎丸中剂量组、低剂量组P值均0.05,差异有统计学意义,提示高剂量组AQP1基因表达显著升高;与地屈孕酮组相比,中剂量组P0.05,差异无统计学意义,提示寿胎丸中剂量与地屈孕酮的疗效相当。与地屈孕酮组相比,寿胎丸高剂量组P值0.05,差异有统计学意义,提示寿胎丸高剂量组疗效优于地屈孕酮组。4.各组孕鼠蜕膜组织中AQP2基因表达差异与正常妊娠组比较,模型组P0.01,差异具有显著统计学意义,提示模型组孕鼠子宫蜕膜组织中AQP2基因表达水平明显降低;进行药物干预后,与模型组对比,寿胎丸高剂量组、中剂量组及地屈孕酮组,P值均0.01,差异具有显著统计学意义,提示药物干预后的,孕鼠蜕膜组织中AQP2基因表达水平明显升高;与寿胎丸高剂量组对比,寿胎丸中剂量组、低剂量组、地屈孕酮组P值均0.01,差异有显著统计学意义,提示高剂量组AQP2基因表达显著升高;与地屈孕酮组对比,寿胎丸中剂量组P0.05,差异有统计学意义,提示寿胎丸中剂量干预时,比地屈孕酮组疗效较差;与地屈孕酮组相比,寿胎丸高剂量组P0.01,差异有显著统计学意义,提示寿胎丸高剂量组疗效优于地屈孕酮组。结论:1.寿胎丸能够促进复发性流产大鼠模型子宫蜕膜组织的血液循环,防止胚胎着床点的缩小,有利于胚胎的着床发育,扭转子宫竹节样改变,降低复发性流产大鼠模型的流产率,保胎疗效显著。2.寿胎丸可能是通过上调复发性流产大鼠模型子宫蜕膜组织中AQP1、AQP2的基因表达,达到种子安胎的目的。3.复发性流产大鼠模型子宫蜕膜组织中AQP1、AQP2的基因表达上调水平随寿胎丸的剂量增大而增大,但寿胎丸的安胎效果与其剂量的关系仍需再进一步研究。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
将loading buffer premix和提取的3μL RNA根据5:1的比例进行充分混匀，在140V恒定电压下进行电泳，当观察到溴酚蓝的前沿处迁移到凝胶总长度的三分之二处时，停止电泳；将凝胶取出并观察结果。具体如下图3所示：条带由下至上依次为5s，18s，28s
胎丸低剂量组 10 39 69 36.11△ ▲屈孕酮组 10 36 74 32.73△ ▲型组 10 53 29 64.63△常组 10 9 98 8.41注：△表示与正常妊娠比较，P＜0.05；▲表示与模型组比较，P＜0.05；◆表示屈孕酮组比较，P＞0.05；AQP1、AQP2、及内参actin的扩增曲线及溶解曲线如下图所示：所有的扩增曲线图形均为S形，并且上升过程中都趋于稳定了平台期，提示均扩增良好，所得数值均可靠，并能用于实验分析。以下溶线图形，全部有单一峰，提示无引物二聚体和非特异性扩增，同时进行扩增获得单一片段产物，同时特异性良好。
AQP2-1扩增曲线
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 王建文;;寿胎丸在中医妇科中的临床应用[J];健康之路;2016年12期
2 李冬花;;寿胎丸加味治疗肾虚型先兆流产34例临床观察[J];内蒙古中医药;2014年03期
3 李莹;朱颖;;加味寿胎丸治疗青春期功能失调性子宫出血32例[J];河南中医;2014年06期
4 ■燕萍;;寿胎丸加味治疗先兆流产50例[J];实用中医药杂志;2013年05期
5 李红瑜;姚青峰;;加味寿胎丸治疗先兆流产疗效观察[J];光明中医;2013年06期
6 郑岩;王琳琳;;加味寿胎丸治疗胎漏、胎动不安32例[J];河南中医;2013年09期
7 叶秋香;;寿胎丸加味联合黄体酮治疗先兆流产疗效观察[J];西部中医药;2012年08期
8 刘鸿雁;;寿胎丸加味治疗人流术后月经过少63例[J];中国实验方剂学杂志;2011年03期
9 杨冬梅;杨慧;;加味寿胎丸治疗早期先兆流产44例[J];山东中医杂志;2010年06期
10 姜晶;夏阳;;加味寿胎丸治疗先兆流产75例[J];广西中医药;2009年05期
相关博士学位论文 前10条
1 陈曰黄;加减寿胎丸治疗肾脾虚弱型先兆流产、习惯性流产的临床观察[D];广州中医药大学;2005年
2 唐丽丽;寿胎丸抗大鼠同种异体卵巢移植模型急性排斥反应的机理研究[D];广州中医药大学;2007年
3 刘秀明;减味寿胎丸提取工艺及其有效成分的药动学和血清药理学研究[D];广州中医药大学;2014年
4 周薇;寿胎丸治疗体外授精—胚胎移植肾虚证的临床疗效评价及作用机制研究[D];湖南中医药大学;2017年
5 苏昭丞;加味寿胎丸治疗肝血亏虚型经行头痛临床研究[D];广州中医药大学;2016年
6 秦明春;寿胎丸加味方治疗肾虚型先兆流产、习惯性流产的临床研究[D];湖南中医药大学;2010年
7 李亚迪;基于大鼠POI模型对减味寿胎丸雌激素样作用的研究[D];广州中医药大学;2016年
8 冯婷;减味寿胎丸补肾安胎有效部位对RU486诱导滋养细胞损伤模型的影响[D];广州中医药大学;2014年
9 郝晓丽;减味寿胎丸对SA病证结合模型小鼠安胎机理的研究[D];广州中医药大学;2016年
10 熊桀;育龄妇女特殊生理期常用方药遗传安全性评价体系构思与实践[D];湖南中医药大学;2011年
相关硕士学位论文 前10条
1 毛思思;寿胎丸对RSA大鼠子宫蜕膜AQP1、AQP2基因表达的研究[D];湖南中医药大学;2019年
2 张爽;寿胎丸对RSA大鼠蜕膜中AQP2及AQP5蛋白表达的影响[D];湖南中医药大学;2019年
3 贾书娜;加味寿胎丸联合地屈孕酮治疗早期不明原因复发性流产的临床及实验研究[D];河北中医学院;2019年
4 梁程程;寿胎丸对RSA大鼠子宫蜕膜组织AQP表达的影响及机制研究[D];湖南中医药大学;2018年
5 陈阳;寿胎丸对肾虚—黄体功能不全性流产大鼠kisspeptin-10的影响[D];重庆医科大学;2017年
6 邹小花;GC-MS法寿胎丸干预RSA大鼠尿液代谢组学的研究[D];湖南中医药大学;2017年
7 吴玉桢;寿胎丸加味治疗肾虚型胎动不安的临床观察[D];辽宁中医药大学;2015年
8 王文珍;加味寿胎丸结合孕激素治疗早期先兆流产的回顾性分析[D];黑龙江中医药大学;2016年
9 陈文俊;寿胎丸加味治疗早期肾虚型先兆流产的临床观察[D];山东中医药大学;2013年
10 曲梅;导师王翠霞运用寿胎丸加减治疗复发性流产经验总结[D];辽宁中医药大学;2012年
本文编号：
2857377
