宽叶独行菜药效组分的分离制备及初步作用机制研究
发布时间：2020-10-27 08:02
宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)为十字花科独行菜属多年生草本植物。前期的研究表明,该植物中乙酸乙酯部位具有较好地促胃肠动力作用,为了进一步研究其药效物质及其作用机制,本文采用硅胶柱层析等技术对宽叶独行菜乙酸乙酯部位进行分离,并以分离得到的不同组分作为受试药物,进行药理活性筛选,同时通过细胞生物学和分子生物学技术对其活性物质的作用机制进行初步研究,得到以下主要结果:(1)宽叶独行菜乙酸乙酯部位按照不同极性分离,得到5个组分(分别为组分Ⅰ、组分Ⅱ、组分Ⅲ、组分Ⅳ、组分Ⅴ),进而运用MCI中压色谱柱和PHPLC将组分Ⅳ进行分离纯化得到四个化合物。(2)体外细胞增值实验表明,大鼠结肠平滑肌细胞与DMSO对照组比较,组分Ⅲ、Ⅳ分别在给药剂量为50μg/mL、1.172μg/mL时对细胞增殖有极显著的效果(P0.01);大鼠小肠平滑肌细胞与DMSO对照组比较,组分Ⅲ、Ⅳ在给药剂量分别为为50μg/mL、37.5μg/mL时对细胞增殖有极显著的效果(P0.01)。(3)大鼠结肠平滑肌细胞显微测距结果表明,组分Ⅲ、Ⅳ与DMSO对照组比较均有显著差异(P0.05),且组分Ⅳ比组分Ⅲ效果更佳(P0.01);大鼠小肠平滑肌细胞显微测距结果表明,组分Ⅳ与DMSO对照组比较差异极显著(P0.01),组分Ⅲ与DMSO对照组比较差异显著(P0.05)。(4)ELISA测定结果表明,大鼠结肠、小肠平滑肌细胞各给药组与DMSO对照组比较,其NO、IP_3、Ca~(2+)水平差异均不显著(P0.05)。(5)电压依赖性Na~+通道β_2亚基通道基因的荧光定量PCR结果显示,大鼠结肠平滑肌细胞中,组分Ⅲ、Ⅳ的表达量显著大于DMSO对照组(P0.01),大鼠小肠平滑肌细胞中,组分Ⅳ低、中剂量组的表达量显著大于DMSO对照组(P0.01),且组分Ⅳ的表达量显著大于组分Ⅲ(P0.01);大鼠离体结肠组织中,水提物组和组分Ⅳ的表达量明显大于空白组(P0.01),大鼠离体小肠组织中,水提物组的表达量明显大于空白组(P0.01);大鼠灌胃给药后的结肠组织中,水提物组的表达量明显大于空白组(P0.01)大鼠灌胃给药后的小肠组织中,水提物组与空白组的表达量差异不显著(P0.05)。结论:组分Ⅳ是宽叶独行菜促胃肠动力的主要药效成分,电压依赖性Na~+通道β_2亚基基因的表达是其产生药效作用的机制之一,其作用位点主要在结肠部位。
【学位单位】：青海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：
图 3-1 大鼠结肠细胞 图 3-2 大鼠小肠细胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法测定平滑肌细胞的增殖作用3.1.2.1 材料由实验 3.1.1.4 所培养的大鼠小肠、结肠平滑肌细胞。3.1.2.2 试剂盒MTT 细胞毒性检测试剂盒（购自武汉博士德生物科技有限公司，货号：AR1156）。
图 3-1 大鼠结肠细胞 图 3-2 大鼠小肠细胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法测定平滑肌细胞的增殖作用3.1.2.1 材料由实验 3.1.1.4 所培养的大鼠小肠、结肠平滑肌细胞。3.1.2.2 试剂盒MTT 细胞毒性检测试剂盒（购自武汉博士德生物科技有限公司，货号：AR1156）。
图 3-3 组分Ⅲ对大鼠结肠平滑肌细胞的量效曲线Figure 3-3 Colon smooth muscle cells to give group Ⅲ dose-response curv由图 3-4 可知，组分Ⅳ在给药浓度为 1.172 μg/mL 时，促进大鼠结肠平的增殖效果最佳，因此，在后续实验中以 1.172 μg/mL 作为组分Ⅳ的中度，分别以 0.586 μg/mL、2.344 μg/mL 作为组分Ⅳ的低、高剂量组浓度续实验。
【相似文献】
本文编号：2858278
【学位单位】：青海师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：
图 3-1 大鼠结肠细胞 图 3-2 大鼠小肠细胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法测定平滑肌细胞的增殖作用3.1.2.1 材料由实验 3.1.1.4 所培养的大鼠小肠、结肠平滑肌细胞。3.1.2.2 试剂盒MTT 细胞毒性检测试剂盒（购自武汉博士德生物科技有限公司，货号：AR1156）。
图 3-1 大鼠结肠细胞 图 3-2 大鼠小肠细胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法测定平滑肌细胞的增殖作用3.1.2.1 材料由实验 3.1.1.4 所培养的大鼠小肠、结肠平滑肌细胞。3.1.2.2 试剂盒MTT 细胞毒性检测试剂盒（购自武汉博士德生物科技有限公司，货号：AR1156）。
图 3-3 组分Ⅲ对大鼠结肠平滑肌细胞的量效曲线Figure 3-3 Colon smooth muscle cells to give group Ⅲ dose-response curv由图 3-4 可知，组分Ⅳ在给药浓度为 1.172 μg/mL 时，促进大鼠结肠平的增殖效果最佳，因此，在后续实验中以 1.172 μg/mL 作为组分Ⅳ的中度，分别以 0.586 μg/mL、2.344 μg/mL 作为组分Ⅳ的低、高剂量组浓度续实验。
【相似文献】
相关期刊论文 前2条
1 于瑞涛;张兴旺;梅丽娟;邵赟;陶燕铎;;宽叶独行菜石油醚部分非极性馏分GC-MS分析[J];分析试验室;2010年S1期
2 于瑞涛;赵晓辉;梅丽娟;邵赟;陶燕铎;;宽叶独行菜中脂肪酸的GC-MS分析[J];天然产物研究与开发;2012年01期
相关硕士学位论文 前6条
1 祁得胜;宽叶独行菜药效组分的分离制备及初步作用机制研究[D];青海师范大学;2017年
2 孙士浩;宽叶独行菜提取物不同极性组分的分离制备及其药效学研究[D];青海师范大学;2016年
3 葛爽;宽叶独行菜绿原酸提取优化及其与甘蓝型油菜原生质体融合[D];华北理工大学;2016年
4 曹宇;宽叶独行菜的耐逆性研究和遗传转化[D];山东师范大学;2010年
5 朱建玲;宽叶独行菜不同极性部位促胃肠动力作用的研究[D];青海师范大学;2015年
6 姚远;黄芪—莪术抗肝癌活性组分筛选及其机制研究[D];山西医科大学;2017年
本文编号：2858278
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2858278.html
