清脑益元汤对大鼠胚胎NSCs增殖分化和相关因子表达的影响

发布时间：2020-10-28 02:55

　　 目的:研究清脑益元汤对大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响及其机制。方法:由广西医科大学动物实验中心购入健康清洁级SD大鼠共30只,其中雄性20只,雌性10只,大鼠鼠龄为10-12周,体重250±50g,其中随机取10只雄性SD大鼠分为两组:正常血清组和清脑益元汤血清组,每组5只,每天分别于上午9点及下午5点灌胃蒸馏水或清脑益元汤药剂两次,在第28d将大鼠行舌下静脉采血,分别制备正常血清与清脑益元汤血清,-20℃冻存备用。剩余雄性SD大鼠10只,体重250±50g,与10只雌性大鼠随机合笼让其交配,观察是否有白色精栓形成,若有则记为0.5d,至孕12d取胎鼠,脱臼处死,分离制备大鼠胚胎神经干细胞。建立神经干细胞低糖低氧的体外模型,并给予清脑益元汤治疗,通过免疫组化法检测各组中VEGF、BDNF及Western blot法检测各组中bFGF的表达量以及用免疫荧光双标法观察早期神经干细胞阳性细胞克隆的增殖分化情况,初步探明清脑益元汤对神经干细胞的增殖与分化的影响及可能的作用机制。结果:1、与空白组相比,缺氧模型组的神经干细胞增殖数目降低,差异有统计学意义(P﹤0.05),VEGF表达增多,BDNF以及bFGF表达升高,差异均有统计学意义(p﹤0.05)。2、与缺氧模型组相比,正常血清组神经干细胞增殖数目增多,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。VEGF表达增多,BDNF以及bFGF表达降低,差异均有统计学意义(p﹤0.05)。3、与正常血清组比较,清脑益元汤组神经干细胞数目明显增多,差异有统计学意义(P﹤0.05),VEGF表达增多,BDNF以及bFGF表达降低,差异均有统计学意义(p﹤0.05)。结论:清脑益元汤对低糖低氧环境下的大鼠胚胎神经干细胞的增殖分化具有促进作用,其作用机制可能是清脑益元汤对促进神经干细胞生长的相关因子具有保护性表达的影响。
【学位单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
中文摘要
abstract
引言
1.材料与方法
    1.1 实验动物选择
    1.2 动物饲养条件
    1.3 实验研究
    1.4 主要试剂及仪器
    1.5 实验动物分组及给药情况
2.实验方法
    2.1 NSCs的培养与传代
    2.2 低糖低氧损伤模型的建立
3 指标检测
    3.1 免疫组化法检测VEGF、BDNF
    3.2 免疫印迹法（western-blot）检测VEGF、bFGF
4 统计学处理
5、实验结果
    5.1 各组VEGF表达的水平
    5.2 免疫组化法检测各组BDNF的表达
    5.3 免疫印迹法检测各组bFGF的表达
    5.4 各组每代阳性细胞克隆球数比较
6 讨论
    6.1 脑中风的历史沿革与发展
    6.2 五脏与缺血性脑中风的关系概述
    6.3 治疗缺血性脑中风的思路方法
    6.4 现代医学对脑缺血损伤及神经干细胞增殖分化的研究
    6.5 中医药诱导缺血性神经干细胞增殖分化的机理研究
    6.6 应用神经干细胞治疗脑缺血损伤的临床研究策略
    6.7 清脑益元汤对缺血性脑中风的防治作用机制
    6.8 清脑益元汤诱导体外神经干细胞分化的作用机制探究
7 实验分析
    7.1 实验方法讨论
    7.2 相关因子对脑缺血后神经干细胞增殖分化的影响
8 不足及展望
结论
参考文献
附录
主要缩略词表
综述
    参考文献
致谢
个人简历及攻读硕士期间的科研、教学成果

【参考文献】

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本文编号：2859469