杜仲鲜叶中车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸提取及富集工艺研究

发布时间：2020-10-28 08:32

　　 杜仲是名贵的中药材,而且杜仲叶资源丰富。近年来,国内外将杜仲叶大多开发成营养保健品、饲料添加剂等,杜仲叶在2005年正式被收载于《中国药典》以后,它的应用及研究越来越受关注。本文以杜仲叶为物质基础,围绕国家林业经济和社会发展重大需求,以杜仲叶中的车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸成分为研究目标,采用螺旋挤压预处理-超声辅助的方法进行提取,通过响应面设计优化提取工艺,利用大孔树脂对提取液中的车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸进行富集研究。其主要内容如下:1.建立高效液相色谱法同时检测车叶草苷、京尼平昔酸和绿原酸的方法,采用Agilent 5 TC-C18(5m,4.6mm×250mm)色谱柱,检测波长237nm,进样量10μL,流速1mL/min,25℃柱温条件下进行检测。流动相组成及比例:0.5%磷酸水溶液(A):甲醇(B);洗脱梯度:0-40 min,5%-32%(B);40-41 min,32%-60%(B);41-51min,60%(B);51-52min,60%-5%(B);52-60min,5%(B)。2.通过响应面优化提取因素,确定了最佳提取车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的工艺。最佳提取条件:液料比20 mL/g,乙醇体积分数70%,超声频率80 kHz,超声时间40min,超声功率200W,超声温度50℃。车叶草苷的得率为266.78±13.34μg/g,京尼平苷酸的得率为892.37±46.96μg/g,绿原酸的得率为2418.05±53.68 μg/g。车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的纯度分别为1.66%、1.74%和7.79%。3.通过对比 8 种大孔树脂:HPD-600、AB-8、X-5、HPD-400、ADS-17、HPD-80、HPD-450A和D-4020对车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的吸附和解析能力,筛选出HPD-600是车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸富集研究最理想的树脂。大孔树脂HPD-600的最佳吸附参数:吸附温度25 ℃,上样时车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的浓度分别为 16.2 μg/mL、47.9 μg/mL 和 151.4 μg/mL,上样量为 50.4 mL,上样流速为 2 BV/h,上样pH为4,加入氯化钠的质量浓度为2%。树脂对车叶草苷最大吸附量为0.55 mg/g,京尼平苷酸的最大吸附量为1.18mg/g,绿原酸饱和吸附量为4.40mg/g。HPD-600大孔树脂的最佳解析参数:50%的乙醇以2 BV/h进行洗脱。车叶草苷的解析率为81.01%,京尼平苷酸的解析率为90.16%,绿原酸的解析率为95.72%。通过大孔树脂富集车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的纯度分别达到为7.34%、8.01%和39.31%。利用螺旋挤压预处理完全打破植物细胞壁,使目标产物从细胞内出,进行超声提取,随后利用大孔树脂对车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸进行富集以提高其纯度。我们得出结论螺旋挤压预处理-超声辅助提取法是一种新型的、快速、绿色环保、有效并且成本低的方法。
【学位单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R284.2
【部分图文】：

?ｏ—ｃ—ＣＨ＝ＣＨ??ＯＨ??图１－２绿原酸的结构式??１．３．１对透明质酸酶及葡萄糖－６－播酸酶的抑制作用??透明质酸具有润滑关节、治愈创伤和抗菌消炎的作用。Ｌａｒａｎｊｉｎｈａ等研究证明绿原??酸具有消炎作用，因为它能阻止透明质酸的酶催化分解［４４］。Ｓｃｈｉｎｄｌｅ等研究发现，绿原??酸是葡萄糖－６－磷酸位移酶的天然特异性抑制剂，能防止非胰岛素依赖性糖尿病的肝糖分??泌过快［４５］。??１．３．２对皮肤的保护作用??绿原酸有比维生素Ｅ和维生素Ｃ还要强的ＤＰＰＨ自由基清除作用，因为它对亚油??酸过氧化产生的共轭二稀的抑制比露糖醇强，起到过氧化基清除剂的作用［４６４８］。??１．３．３与蛋白质作用??王静研究表明，绿原酸能使血清蛋白的ｃｔ－螺旋的含量增加，发生静电作用，使得血??清蛋白质结构间的异种电荷互相吸引，更有利于维护其构象的稳定性［４９］。??１．３．４抗诱变作用与抗癌变作用??Ａｂｒａｈａｍ等研究发现绿原酸有抗诱变功效日本学者研究证实了杜仲叶饮料具有??抗癌作用，并且这种功效与杜仲饮料中的活性成分绿原酸有关［５１］。??１．４蠼旋挤压破壁技术??在天然药物的研究中

按照建立的ＨＰＬＣ检测方法，对不同浓度的车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的标准??品溶液进行检测，重复三次，取吸收峰面积的平均值，进行线性回归分析。车叶草苷、??京尼平苷酸和绿原酸的标准曲线如图２－２。获得车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的线性??回归方程总结如表２－３。从表２－３可知，车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的标准品溶液??浓度与峰面积在测定范围内线性关系良好。??表２－３车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的标准曲线的回归分析??分析物?回归方程?相关系数??车叶草苷?Ｙ＝?１３６３７?Ｘ?＋８６．６４?０．９９９９?＿??京尼平苷酸?Ｙ?＝?２１７７３Ｘ?＋１４．２４?０．９９９８??绿原酸?Ｙ?＝?１９９８４?Ｘ?－?５３．７２?０．９９９９??．?ｒ：峰面积，Ｘ：分析物浓度ｍｇ／ｍＬ??－１１－??

２．３．３单因素实验??２．３．３．１溶剂浓度??由图２－３可以看出，在相同条件下，车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸的得率都随着??乙醇体积分数的增加而逐渐增加，但当乙醇体积分数高于７０％时，车叶草苷、京尼平苷??酸和绿原酸的得率都有下降的趋势，产生这种现象的原因可能是水对物料起溶胀作用。??综合考虑，当乙醇体积分数为７０％时为最优提取浓度。??１６００?－，???Ｈ?Ａｓｐｅｒｕｌｏｓｉｄｅ?＾??１４００?＇?ＣＳＧｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃａｄｄ?ｔ?ｉ?｜?ｒ??１２００?－?？?Ｃｈｉｏｒｏｇｅｎｉｃ?ａｄｄ?Ｘ?ｎ?９?ｍ?ｕ?ｇ??ｆｉ〇〇〇－?ｘ?｜?｜?｜?ａ?｜?３?Ｓ??３?ｘ?ｉ?５?：?：?＠?Ｆ?３?＠??！８。。－?｜?｜?Ｓ?｜?｜?目?目?｜??＾?６００?－?８?Ｉ?５?｜?Ｉ?１?｜?Ｊ?｜?ｉ??４。。－丨?｜?丨?｜?ｊ?Ｊ?＿?＿?＿?纟??２。：?￣?Ｊ．?ｄ?Ｍ?Ｊ?Ｊｓ?Ｊ?Ｊ?Ｊ?Ｊ?ｉ??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０?９０??Ｅｔｈａｎｏｌ?ｖｏｌｕｍｅ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?（％）??图２－３不同乙醇体积分数对车叶草苷、京尼平苷酸和绿原酸得率的影响??２＿３．３．２液料比??－１３－??
【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 张忠立;左月明;李于益;陈兰英;刘荣华;;杜仲叶苯丙素类化学成分研究[J];中药材;2014年03期

2 彭红梅;李小姝;;杜仲的药理研究现状及应用展望[J];中医学报;2013年01期

3 周芳;刘韶;邓梦如;彭应枝;;GC-MS/SIM法测定不同产地杜仲叶中的氨基酸[J];中南药学;2012年04期

4 谢键泓;曾彦雯;梁华正;陈贺;唐伯辰;;碱水解栀子苷大孔树脂分离纯化京尼平苷酸[J];食品科技;2011年11期

5 龚志华;任国谱;舒青孝;肖文军;;大孔吸附树脂分离纯化金银花绿原酸研究[J];分析测试学报;2011年01期

6 高丹;赵呈呈;李海燕;金牮;金向群;;白花蛇舌草中车叶草苷的提取分离及含量测定的研究[J];药物分析杂志;2010年09期

7 王慧;;黄酮类化合物生物活性的研究进展[J];食品与药品;2010年09期

8 杜冰;黄继红;程燕锋;夏雨;杨公明;;双螺杆挤压膨化破碎啤酒酵母细胞壁的研究[J];中国酿造;2009年12期

9 余鸽;龙凤来;黄时伟;;环烯醚萜药理作用研究进展[J];陕西林业科技;2009年02期

10 齐惠丽;赵广荣;李东;;杜仲叶中绿原酸的超声提取工艺研究[J];西北药学杂志;2007年06期

相关硕士学位论文 前9条

1 相辉;汉中杜仲叶功能成分提取技术及提取物功能研究[D];陕西理工学院;2016年

2 张前程;杜仲叶中活性成分的积累规律及其提取物的制备[D];河南大学;2015年

3 黄威;京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC-364细胞的影响及作用机制的研究[D];河北医科大学;2015年

4 许兰波;杜仲新产品的研发及杜仲叶中绿原酸的纯化工艺研究[D];河南大学;2014年

5 吕强;杜仲总木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的提取纯化研究[D];吉首大学;2013年

6 王静;绿原酸与三种生物大分子相互作用的研究[D];扬州大学;2012年

7 宫本红;杜仲叶多糖的提取分离及生物活性研究[D];贵州大学;2008年

8 曹慧;杜仲中降压活性成分的分离和表征研究[D];中南大学;2005年

9 李进飞;杜仲叶中绿原酸的提取及动力学研究[D];中南大学;2004年

本文编号：2859847