归芎祛瘀乳膏的质量标准及药效学研究

发布时间：2020-10-30 21:19

　　 痤疮是由多种因素引起的毛囊皮脂腺慢性炎症性疾病,与皮脂分泌过多、雄激素水平升高、毛囊皮脂腺导管的异常角化、细菌感染、炎症反应和免疫反应等诸多因素密切相关。化学药物治疗存在诸多问题,而植物挥发油或中草药提取物表现出了许多优异特质,可针对痤疮发病的多因素同时发挥作用。中药复方成分复杂、效应成分不明和生物利用度低是导致中药起效慢、用药时间长的主要原因,解决该问题的根本是合理中医药理论基础上的中药制剂技术的突破。归芎祛瘀乳膏含有当归、川芎、丁香和桂枝四味中药,脂溶性和挥发性成分具有去腐生肌、镇痛、抗菌、抑制血小板聚集和免疫调节等作用,用于痤疮的临床治疗。把传统汤剂改为乳膏剂有利于更好发挥疗效,便于临床应用。第一部分:归芎祛瘀乳膏的中药材提取工艺研究目的:考察处方中各组分的提取方法,优化萃取工艺。方法:比较各组分的水蒸气蒸馏法、石油醚渗漉法和CO2超临界萃取法的挥发油得率,以选择适宜的萃取方法。采用正交实验法,以挥发油得率和主要成分含量为指标,对CO2超临界萃取法的萃取压力、温度和时间进行考察。结果与结论:藁本内酯、桂皮醛和丁香酚为归芎祛瘀乳膏主要成分,分别建立HPLC检测方法。色谱条件:色谱柱:Iinertsil ODS-3色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相:甲醇-水(70∶30),流速:1.0 mL?min-1,检测波长:280 nm,柱温:室温,进样量:20μL。结果表明藁本内酯、丁香酚、桂皮醛分别在5.202~208.1μg?m L-1、3.797~759.4μg?mL-1、8.781~439.0μg?mL-1范围内线性关系良好,精密度良好,在12h内稳定,HPLC法可以用于测定样品中藁本内酯、桂皮醛及丁香酚的含量。使用三种方法当归挥发油得率分别为0.5%、1.5%、5.2%;川芎挥发油得率为0.7%、6.7%、10.2%;丁香挥发油得率为1.8%、4.2%、2.3%;桂枝挥发油得率为0.8%、1.2%、3.8%。综合考虑,选用CO2超临界萃取法。分别以萃取挥发油得率和藁本内酯、丁香酚、桂皮醛含量为指标,使用正交试验对对当归、川芎、丁香和桂枝的CO2超临界萃取法进行优化对萃取压力、萃取温度、萃取时间进行优化,结果确定当归的最佳萃取工艺为萃取压力为35 MPa,温度为45℃,萃取时间3 h。提取物得率为5.04%,藁本内酯含量(100g药材)689.9mg。川芎最佳工艺萃取压力为35 MPa,温度为50℃,萃取时间2.5 h。提取物得率为10.24%,藁本内酯含量(100g药材)4607.0mg。丁香最佳工艺为萃取压力为25 MPa,温度为40℃,萃取时间2.5 h。桂枝最佳工艺为萃取压力为20 MPa,温度为40℃,萃取时间2 h。验证试验证明正交试验结果稳定可靠。第二部分:归芎祛瘀乳膏制备工艺研究目的:研究归芎祛瘀乳膏的制备工艺。方法:通过物理性质考察乳膏剂中乳化剂的用量,使用正交实验考察乳化条件。结果与结论:研究发现以Labrasol和TEFOSE63作为乳化剂,结果比例为2:1时制备的乳膏稠度适中。以加入主药时基质温度、乳化剂用量、搅拌速度及乳化时间作为可变因素,每因素各列三水平(四因素三水平正交表)进行实验,以藁本内酯和桂皮醛的含量为考察指标,结果确定乳化条件为温度65℃,乳化剂用量10%,搅拌速度300r/min,乳化时间30min。中试结果表明制备工艺重复性好,方法可行。第三部分:归芎祛瘀乳膏的质量标准研究目的:拟定川芎祛瘀乳膏质量标准草案。方法与结果:乳膏样品与丁香酚和桂皮醛对照品使用HPLC检测显示相同位置的色谱峰,可以用于定性检测。粒度、装量、微生物限量均符合《中华人民共和国药典》2015年版要求。藁本内酯(C21H25NO4)为君药当归、川芎主要活性成分,用HPLC法测定其在乳膏中的含量方法可靠,重现性好,根据实验结果确定为每克乳膏中含量大于0.130mg。加速稳定性实验在恒温恒湿培养箱(温度40℃±2℃,相对湿度75%±5%)中进行实验,时间为6个月,分别在第0、1、2、3、6个月末取样,结果显示,归芎祛瘀乳膏采用聚乙烯塑料瓶包装,在加速稳定性实验中各项指标均符合“归芎祛瘀乳膏质量标准草案”规定。对三批次归芎祛瘀乳膏样品进行为期24个月的质量考察,结果表明,归芎祛瘀乳膏质量比较稳定,各项指标未见发生明显变化,均符合质量标准的各项规定,因此暂定归芎祛瘀乳膏的有效期为24个月。第四部分:归芎祛瘀乳膏的皮肤渗透动力学研究目的:考察归芎祛瘀乳膏的皮肤透皮吸收情况。方法:将离体巴马小香猪皮放置于Franz扩散池中间,以30%乙醇-生理盐水溶液作为接收液,37℃恒温水浴,恒速搅拌。分别取1%、2.5%、5%的归芎祛瘀乳膏0.5g均匀涂于供药池皮肤上,分别于1h、3h、5h、7h、9h、12h各精密吸取1m L接收液为测定样品,HPLC法分别测定接收液中藁本内酯、桂皮醛、丁香酚的含量,分别计算Higuchi方程,得透皮速率常数(Jss)。结果与结论:1%、2.5%、5%归芎祛瘀乳膏的藁本内酯Higuchi方程r值分别为0.9538、0.8805、0.9193,Jss值分别为0.7995μg·cm-2·h-1、1.094μg·cm-2·h-1、2.313μg·cm-2·h-1;桂皮醛Higuchi方程r值分别为0.9762、0.9221、0.9527,Jss值分别为27.85μg·cm-2·h-1、47.16μg·cm-2·h-1、110.2μg·cm-2·h-1;丁香酚Higuchi方程r值分别为0.9513、0.9014、0.9500,Jss分别为1.239μg·cm-2·h-1、1.804μg·cm-2·h-1、3.355μg·cm-2·h-1。结果表明药物含量越大,藁本内酯、桂皮醛与丁香酚的透皮吸收越快,累积渗透量(Qn)与时间t呈良好线性关系。第五部分:归芎祛瘀乳膏的药效学研究目的:研究归芎祛瘀乳膏对金黄地鼠皮脂腺斑的治疗效果。方法:雄性金黄地鼠按照体重随机分为6组:异维A酸组、冰黄软膏组、1%归芎祛瘀乳膏组、2.5%归芎祛瘀乳膏组、5%归芎祛瘀乳膏组和空白基质组。剃去4cm×6cm露出皮脂腺斑,分别涂以相应药物。结果与结论:空白基质组皮肤无明显变化,具有明显的皮脂腺斑。冰黄软膏组金黄地鼠给药后第6天开始涂药皮肤区域有大量皮屑脱落、皮肤表面粗糙,皮脂腺斑颜色变浅,数量减少,触摸感觉皮肤厚硬;异维A酸组平均6出现涂药区域不同程度皮肤损伤,平均10天结痂,平均16天掉痂,平均20天出现用药区域第二次损伤,平均23天第二次结痂,平均30天第二次退痂。使用不同浓度的归芎祛瘀乳膏后,皮肤皮脂腺斑均有不同程度改善,皮肤变光滑,皮脂腺斑数量减少、颜色变浅,5%浓度作用优于2.5%浓度,优于1%浓度。组织切片结果显示异维A酸凝胶引起金黄地鼠背部皮肤组织大量炎细胞浸润,坏死,水肿;冰黄软膏对金黄地鼠皮脂腺增生无治疗作用;基质组与空白组皮肤组织无明显异常,真皮浅、中、深层有少量炎细胞浸润;与空白组相比,归芎祛瘀乳膏组皮肤有明显改善的作用。
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R286.0;R285.5
【部分图文】：

c d图 1-1 含量测定色谱图（a 藁本内酯标准品，b 当归提取物，c 川芎提取物，d 空白试剂）2.1.1.4 线性关系精密吸取上述对照品溶液适量，加甲醇配制成浓度梯度为 0.5202、1.040、5.202、20.81、41.61、62.42、104.0、208.1μg mL-1的溶液，吸取 20μL，注入高效液相色谱仪，测定色谱峰的面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 y = 47.84x + 42.31（R2= 0.9997）。结果显示藁本内酯进样浓度在 0.5202~ 208.1μg mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，见图 1-2。

c d图 1-1 含量测定色谱图（a 藁本内酯标准品，b 当归提取物，c 川芎提取物，d 空白试剂）.1.1.4 线性关系密吸取上述对照品溶液适量，加甲醇配制成浓度梯度为 0.5202、1.04041.61、62.42、104.0、208.1μg mL-1的溶液，吸取 20μL，注入高效液定色谱峰的面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准方程 y = 47.84x + 42.31（R2= 0.9997）。结果显示藁本内酯进样浓度在1μg mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，见图 1-2。

c图 1-3 丁香酚含量测定色谱图酚对照品色谱图，b 丁香提取物色谱图，c 空白试剂系：品溶液，用甲醇稀释成梯度浓度为 3.797、7.599.4μg mL-1的溶液。分别取 20μL 注入高效液相色面积积分值分别为横坐标和纵坐标，绘制标准曲= 23.60x - 34.35（R2 = 0.9999），表明丁香酚进内线性关系良好。
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本文编号：2863010