金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻大鼠氧化应激和自噬的影响

发布时间：2020-10-31 13:48

　　 目的探讨金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化中氧化应激和自噬的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金匮肾气汤组(1.8 g·kg~(-1))、依那普利组(10 mg·kg~(-1));左侧输尿管结扎术后第1天开始灌胃给药(10 mL·kg~(-1)),每日1次,第21天处死大鼠。取梗阻肾组织,采用Masson染色法观察肾组织病理改变;化学荧光法检测梗阻肾组织活性氧(ROS)含量;Western Blot法检测NOX4、p22~(phox)、p47~(phox)、LC3II/I、p62、p-mTOR/mTOR及p-AMPK/AMPK等蛋白在梗阻肾组织中的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾组织间质胶原沉积增多,ROS含量显著增高(P0.01),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表达显著上调(P0.01),LC3II/LC3I蛋白表达比例显著下调、p62蛋白表达显著上调(P0.01),AMPK磷酸化显著减少、mTOR磷酸化明显增加(P0.01)。与模型组比较,金匮肾气汤组大鼠梗阻肾组织间质胶原沉积减少,ROS含量显著降低(P 0.05),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表达显著下调(P 0.05),LC3II/LC3I蛋白表达比例上调、p62蛋白表达下调(P 0.05),AMPK磷酸化增加、mTOR磷酸化减少(P 0.05)。结论金匮肾气汤可能通过抑制NOX4激活,进而通过AMPK-mTOR途径促进梗阻肾组织自噬,从而改善UUO导致的肾间质纤维化。
【部分图文】：

结果见图1。与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾脏体积明显增大，切面见肾盂明显扩张积水、肾实质变薄，Masson染色显示肾小管明显扩张、间质内胶原纤维明显增加。与模型组比较，金匮肾气汤组和依那普利组大鼠梗阻肾脏体积明显缩小，肾盂扩张程度减轻，肾实质变厚，Masson染色显示肾小管扩张减轻、肾间质胶原纤维明显减少。金匮肾气汤组与依那普利组的差异不明显。结果表明，金匮肾气汤可改善UUO大鼠肾间质纤维化。2.2 金匮肾气汤对UUO大鼠梗阻肾组织氧化应激的影响

结果见图3。与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾组织中LC3II/LC3I蛋白表达比例显著下调，p62蛋白表达量显著增加（P<0.01）。与模型组比较，金匮肾气汤组和依那普利组大鼠梗阻肾组织中LC3II/LC3I蛋白表达比例显著上调，p62蛋白表达量显著下降（P<0.05）。结果表明，金匮肾气汤和依那普利均可增加UUO大鼠梗阻肾组织自噬活性，两者差异没有统计学意义（P>0.05）。2.4 金匮肾气汤对UUO大鼠梗阻肾组织AMPK-m TOR信号通路的影响

结果见图4。与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾组织中，AMPK磷酸化明显下调、m TOR磷酸化明显上调（P<0.01）。与模型组比较，金匮肾气汤组和依那普利组大鼠梗阻肾组织中，AMPK磷酸化明显上调、mTOR磷酸化明显下调（P<0.05）。结果表明，金匮肾气汤和依那普利均可能通过调节AMPK-mTOR信号通路促进自噬，从而保护肾组织损伤和抗纤维化，两者差异没有统计学意义(P>0.05）。图4 金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻大鼠梗阻肾组织p-mTOR/m TOR和p-AMPK/AMPK蛋白表达的影响（±s,n=3)
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