清燥救肺汤对肺癌磷酸戊糖与三羧酸循环代谢限速酶及中间产物的影响

发布时间：2020-10-31 22:12

　　 目的:从清燥救肺汤对肺癌磷酸戊糖、三羧酸循环能量代谢途径限速酶及中间代谢产物影响的角度,探索清燥救肺汤对肺癌增殖的影响及作用机理。方法:取C57BL6J雄性小鼠50只,随机分为五组:包括模型组,化疗组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。于小鼠右腋下注射荷Lewis肺癌小鼠癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组分别以11、5.5、2.75g·kg~(-1)·d~(-1)剂量造模前2周开始灌胃给药,化疗组以50mg·kg~(-1)·2d~(-1)剂量腹腔注射给药,模型组则灌以相同体积的生理盐水,造模成功后再给药2周,后处死所有小鼠,将所得瘤组织称重并计算抑瘤率;酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测小鼠6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)活性、活性氧(ROS)含量、胆固醇(CHO)含量、游离脂肪酸(FFA)含量;蛋白免疫印记(Western-blot)法检测顺乌头酸酶1(ACO-1)蛋白表达;Realtime-PCR法检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶gp91phox催化亚基单位和p22phox转移电子酶亚基单位mRNA、ATP柠檬酸裂解酶(ACL)mRNA的表达。结果:1.清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠瘤质量的影响与模型组比较,化疗组、清燥救肺汤高、中、低剂量组瘤质量显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组瘤质量显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组比较,中、低剂量组瘤质量显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组比较,低剂量组瘤质量明显升高,差异显著(P0.05)。化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组抑瘤率分别为94.7%、80.3%、57.2%、47.9%,高、中、低剂量及化疗药具有较高的抑瘤作用,其中高、中、低剂量具有量效关系。2.酶联免疫吸附测定法相关指标检测结果2.1清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠G6PD活性的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组G6PD活性显著降低,差异显著(P0.01或P0.05);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组G6PD活性显著升高,差异显著(P0.01或P0.05);与高剂量组比较,中、低剂量组G6PD活性明显升高,差异显著(P0.01或P0.05);与中剂量组比较,低剂量组G6PD活性明显升高,差异显著(P0.05)。2.2清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠ROS含量的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组ROS含量显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组ROS含量显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组比较,中、低剂量组ROS含量显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组比较,低剂量组ROS含量显著升高,差异显著(P0.01)。2.3清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠CHO含量的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组CHO含量显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组CHO含量显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组比较,中、低剂量组CHO含量显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组比较,低剂量组CHO含量显著升高,差异显著(P0.01)。2.4清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠FFA含量的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组FFA含量显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组FFA含量显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组比较,中、低剂量组FFA含量显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组比较,低剂量组FFA含量显著升高,差异显著(P0.01)。3.Realtime-PCR法相关指标检测结果3.1清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠癌细胞NADPH氧化酶gp91phox催化亚基单位mRNA表达的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞gp91phox mRNA表达显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞gp91phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组相比,中、低剂量组肺癌细胞gp91phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组相比,低剂量组肺癌细胞gp91phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01)。3.2清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠癌细胞NADPH氧化酶p22phox转移电子酶亚基单位mRNA表达的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞p22phox mRNA表达显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞p22phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组相比,中、低剂量组肺癌细胞p22phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组相比,低剂量组肺癌细胞p22phox mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01)。3.3清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠癌细胞ACL mRNA表达的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞ACL mRNA表达显著降低,差异显著(P0.01);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞ACL mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组相比,中、低剂量组肺癌细胞ACL mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01);与中剂量组相比,低剂量组肺癌细胞ACL mRNA表达显著升高,差异显著(P0.01)。4.Western-blot法相关指标检测结果:清燥救肺汤对荷Lewis肺癌小鼠ACO-1蛋白表达的影响与模型组比较,化疗组及清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞ACO-1蛋白表达显著降低,差异显著(P0.01或P0.05);与化疗组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组肺癌细胞ACO-1蛋白表达显著升高,差异显著(P0.01);与清燥救肺汤高剂量组相比,中、低剂量组肺癌细胞ACO-1蛋白表达显著升高,差异显著(P0.01或P0.05);与中剂量组相比,低剂量组肺癌细胞ACO-1蛋白表达显著升高,差异显著(P0.05)。结论:1.清燥救肺汤能够抑制荷Lewis肺癌小鼠荷瘤生长。2.清燥救肺汤可能通过抑制NADPH氧化酶表达,减少ROS含量,抑制G6PD的表达,减少磷酸戊糖代谢途径提供的肺癌细胞DNA合成原料,发挥抑制肺癌细胞能量代谢的功效。3.清燥救肺汤可能通过抑制ACO-1及ACL的表达,减少三羧酸循环提供的细胞合成材料FFA及CHO,发挥抑制肺癌细胞能量代谢的功效。
【学位单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

内参基因扩增曲线

清燥救肺汤对肺癌磷酸戊糖与三羧酸循环代谢限速酶及中间产物的影响图 1 内参基因扩增曲线Fig1 Amplification curves of Internal reference gene

图 1 内参基因扩增曲线Fig1 Amplification curves of Internal reference gene图 2 内参基因溶解曲线Fig2 Solubility curves of Internal reference gene
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本文编号：2864574