榆耳子实体多糖的提取与纯化及抗肿瘤活性研究

发布时间：2020-11-01 00:16

　　 本文对榆耳子实体多糖(GI-A、GI-U、GI-T和GI-S)的多糖单糖组成进行了验证,对榆耳子实体多糖对H_(22)荷瘤小鼠的抗肿瘤作用进行探究,进而对榆耳尿素溶多糖的抗肿瘤机制进行研究,为榆耳的药理学研究及其新药开发提供参考。1.榆耳子实体多糖的提取与纯化分别用pH=2的盐酸溶液、6%的尿素溶液、3%的三氯醋酸溶液和0.5M的氢氧化钠溶液提取榆耳多糖,分别得到榆耳粗多糖:GI-A、GI-U、GI-T和GI-S;分别先用Sevage法去除榆耳各多糖中的蛋白,除蛋白后用活性炭法脱色;继而得到较纯的榆耳多糖:GI-A、GI-U、GI-T和GI-S。2.榆耳子实体多糖单糖组成检测方法的建立采用糖腈乙酸酯衍生化气相色谱法检测多糖单糖组成,实验结果表明榆耳各多糖均由木糖、甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为:1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2。3.榆耳子实体多糖的抗肿瘤活性分析通过建立H_(22)荷瘤小鼠肿瘤模型,从实体瘤重、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2),肿瘤组织和脾脏HE染色,免疫组化等方面指标来观察榆耳各多糖的体内抗癌活性。其结果表明:(1)灌胃给药榆耳各多糖,其抗肿瘤数据显示:榆耳多糖在一定层度上能够抑制H_(22)实体瘤的生长,其中GI-U高剂量组的抗肿瘤效果最好,达到60.69%仅仅低于阳性组的65.69%;中、低剂量组也显示出较好的抗肿瘤效果,抑瘤率分别为45.83%和39.04%,而GI-A也具有很好的抗肿瘤效果,其中,中、高剂量抑瘤率达到了53.24%和58.94%,抗肿瘤效果明显。GI-T和GI-S也具有一定的抗肿瘤做用,但效果并不明显,其中GI-T高剂量组的抑瘤率仅为44.57%,GI-S高剂量组的抑瘤率仅为49.79%;(2)经过对各个指标的考察与对比发现,GI-A、GI-U、GI-T和GI-S四种多糖中,GI-U的抗肿瘤效果最好,GI-A次之,GI-T和GI-S抗肿瘤效果不是很明显;继而对GI-A和GI-U组的肿瘤进行进行HE染色实验,结果表明,GI-A和GI-U可以通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制肿瘤生长的作用。(3)通过免疫组化及western对GI-U抗肿瘤活性进行分析,发现GI-U可以调控蛋白的表达,继而发挥抗肿瘤的作用。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

10图1.1 榆耳多糖的提取流程图Figure 1.1 The flow chart of Gloeostereum inearnatum polysaccharide extraction1.2.2 榆耳子实体粗多糖的化学组分分析1.2.2.1 多糖含量测定 采用苯酚-硫酸法[69]进行检测，以葡萄糖为标准。首先绘制标准曲线，分别向试管中加入0.0，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3

1.3.2 GI-A、GI-U、GI-T和GI-S糖含量的测定多糖含量及蛋白含量标准曲线如下：图1.1 葡萄糖及蛋白含量标准曲线(左：葡萄糖，右：蛋白)Fig.1.1 Standard curve of glucose and protein content(left:glucose,right:protein)表1-1 榆耳粗多糖糖含量测定结果与纯化后糖含量的对比Table 1-1 Comparison of determination results of crude sugar content and purified sugarcontent of Gloeostereum incamatum榆耳粗多糖：GI-A、GI-U、GI-T和GI-S的糖含量及蛋白含量见表1-1。1.3.3 榆耳粗多糖的初步纯化榆耳粗多糖：GI-A、GI-U、GI-T和GI-S，经Sevag法脱蛋白和活性炭脱色分别得到初步纯化后多糖GI-A、GI-U、GI-T和GI-S，GI-A、GI-U、GI-T和GI-S 的糖含量以及蛋白含量见表1-1 。1.3.4 榆耳多糖单组成分析经气相色谱分析后，GI-A、GI-U、GI-T和GI-S的单糖组成均为：木糖、甘露糖和葡萄糖，经计算，其摩尔比分别为：1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2，气相色谱结果如下图：GI-A GI-U GI-T GI-S纯化前 纯化后 纯化前 纯化后 纯化前 纯化后 纯化前 纯化后糖含量(%) 44.17 85

13图1.2 榆耳多糖单糖组成检测气相色谱图Fig.1.2 The gas chromatography of monosaccharide composition detection polysaccharidefrom Gloeostereum incamatum1.4 结论本部分采用pH=2盐酸、6%尿素、3%三氯醋酸和0.5M氢氧化钠对榆耳子实体多糖进行分级处理，然后进行除去其中的蛋白和色素实验，对其进行初步的纯化，将纯化后和纯化前的多糖糖含量以及蛋白含量进行检测和对比，其中，各多糖的蛋白含量本身就不是很高，而各多糖在纯化后都具有很高的糖含量，GI-U的糖含量无论在纯化前还是纯化后都是最好的。纯化后的多糖经糖腈乙酸酯衍生化气相色谱法检测后发现，各多糖单糖组成均为木糖、甘露糖和葡萄糖，其摩尔比分别为：1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2。
【参考文献】

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本文编号：2864726