苦参素增强多柔比星对人肝癌耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及相关机制研究

发布时间：2020-11-01 07:13

　　 目的:建立耐药株HepG2/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,用苦参素与多柔比星干预,探讨苦参素(oxymatrine,OM)能否增强多柔比星(doxorubicin,DOX)对人肝癌耐药裸鼠移植瘤的抑制作用,研究其可能机制。方法:HepG2/ADM对裸鼠腋部进行皮下注射后建模。按随机原则,将20只雌性裸鼠平均分为4组(每组5只):生理盐水(normal saline,NS)组(0.2 ml·d~(-1))、OM组(100mg·kg~(-1)·d~(-1))、DOX组(6 mg·kg~(-1)·d~(-1))、OM+DOX组(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)+6 mg·kg~(-1)·d~(-1)),均采用每只0.2 ml·d~(-1)尾静脉注射给药。14天后,取出移植瘤。(1)观测裸鼠全身状况,瘤体生长情况,得出抑瘤率。(2)HE染色法检测瘤体病理状况。(3)免疫组织化学法与ELISA法检测瘤组织中P-gp与Beclin 1的表达。(4)RT-PCR法观察ABCB1 mRNA表达。(5)飞行质谱法得出ABCB1启动子CpG岛之甲基化率。本实验已获得本校伦理委员会准许。结果:(1)接种HepG2/ADM 10天后,建模成功,成瘤率100%。OM可改善裸鼠生活质量与降低DOX对鼠体重影响。DOX组中,对移植瘤抑制效果差,该组与NS组之间对比不显著(P0.05);OM+DOX组对肿瘤的生长抑制作用最好(抑瘤率为74.5%),OM组抑制效果次之(抑瘤率为47.5%),两组抑制效果均好于DOX组(抑瘤率为0.2%)与NS组(P0.05)。(2)HE染色显示,OM有促HepG2/ADM坏死作用,与DOX合用后促坏死作用得到增强。(3)免疫组化与ELISA结果显示:P-gp蛋白在DOX组与NS组表达较高,OM组和OM+DOX组中P-gp蛋白表达出现降低(P0.05);DOX与NS两组Beclin 1蛋白水平较低,OM组和OM+DOX组中Beclin 1蛋白水平明显较高(P0.05)。(4)RT-PCR检测ABCB1结果:DOX组与NS组ABCB1 mRNA表达较高,在OM组和OM+DOX组中ABCB1 mRNA表达明显降低。(5)ABCB1启动子CpG岛甲基化检测显示:绝大部分位点中,与NS组相比,OM+DOX组与OM组甲基化率较高,而DOX组甲基化率较低(P0.05)。结论:1.OM可改善HepG2/ADM耐药移植瘤裸鼠生活质量,降低DOX副作用。2.OM可增强DOX对裸鼠HepG2/ADM耐药移植瘤的抑瘤作用;其作用的可能机制是:(1)OM可提高ABCB1启动子CpG岛甲基化率,从而降低ABCB1 mRNA及ABCB1编码的P-gp蛋白表达。(2)OM可提高Beclin1蛋白水平,促进HepG2/ADM自噬性死亡。
【学位单位】：右江民族医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 2-1 裸鼠体重-时间曲线Figure 2-1 Nude mice time-weigh curve2.3 OM 可增强 DOX 抑瘤作用2.3.1 裸鼠移植瘤体积变化因方差具有齐性，选用 LSD 法进行两两比较。干预 14d 后体积对比结果见表 2-1（Table 2-1）、图 2-2（Figure 2-2）、图 2-3（Figure 2-3）。可见与 NS 组（图 A）相比，单独使用 DOX 的 DOX 组（图 B）对耐多柔比星株移植瘤效果差，使用 OM 的 OM 组（图 C）与 OM+DOX 组（图 D）瘤体积缩小明显。与 NS 组相比，DOX 组与 NS 组之间无显著意义（P＞0.05）。其他组两两对比都有显著意义（P＜0.05）。OM 组与 NS组相比有显著意义（P＜0.05），单独使用 OM 的抑制肿瘤效果要好于 DOX 组，但不如OM+DOX 组效果。OM+DOX 组与 NS 组相比有显著意义（P＜0.05），联合使用 OM与 DOX 后，OM+DOX 组对肿瘤的生长抑制作用最好。可见 DOX 与 OM 二者可能具有

表 2-1 干预 14d 各组瘤体积比较ble 2-1 Comparisons of tumor volumes in four groups after 14 days’intervention用药剂量 瘤体积（ ±s,cm3）0.2（ml·d-1） 4.17±1.10cef6 （mg·kg-1·d-1）100 （mg·kg-1·d-1）4.18±1.40bcf2.09±0.29adfX 组 100+6（mg·kg-1·d-1） 0.70±0.08acd17.83＜0.05比，a:P＜0.05，b:P＞0.05；与 OM 组相比，c:＜0.05；与 DOX 组相比，d OM+DOX 组相比，f:P＜0.05

图 2-3 各组裸鼠瘤体生长曲线Figure 2-3 Growth curve of xenografts of nude mice in four groups各组裸鼠移植瘤质量对比及抑瘤率对比方差具备齐性，采用 LSD 法组间两两对比。干预 14d 后移植瘤质量比结果见表 2-2（Table 2-2）。可见使用 OM 的 OM 组与 OM+DOX 组而单独使用 DOX 的 DOX 组对耐多柔比星株移植瘤效果差。与 NS 组NS 组之间无显著意义（P＞0.05），抑瘤率仅为 0.2%。其他组两两对P＜0.05）。OM 组与 NS 组相比有显著意义（P＜0.05），单独使用果要好于 DOX 组，抑瘤率为 47.5%，但不如 OM+DOX 组效果好。O 组相比有显著意义（P＜0.05），联合使用 OM 与 DOX 后，OM+DO抑制作用最好，抑瘤率为 74.5%。可见 DOX 与 OM 二者合用可能具。
【参考文献】

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2 吴伟;王亚奇;杨耀辉;武波;庞志刚;;过表达Beclin1对小鼠肝癌化疗增敏的作用[J];中华实验外科杂志;2017年12期

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本文编号：2865195