短梗五加叶活性成分chiisanoside抗肝癌作用及其药动学研究

发布时间：2020-11-01 17:11

　　 短梗五加(Acanthopanax sessiliflorus)属于药食两用植物,我国该植物资源广阔,目前主要散布于吉林省长白山地区、黑龙江省、辽宁省等地,韩国、日本等地也有区域散布。Chiisanoside是短梗五加中分离出的一种三萜皂苷,现代药理学研究表明chiisanoside能够起到抗病毒、抗炎、抑制胰脂肪酶和抗糖尿病的作用。本文对短梗五加叶中有效成分chiisanoside的提取工艺进行优化、富集并制备chiisanoside这一成分,并对其抗肿瘤活性及药代动力学进行研究。采取效应面法优化短梗五加叶中活性化合物chiisanoside的提取工艺。在单因素实验探讨的基础上,通过Box-Behnken效应面法研究乙醇体积分数、超声时间、液固比对提取工艺的影响。提取最优条件为:乙醇体积分数72%、超声时间40min、固液比1:118。该条件下chiisanoside提取率为3.56%。大孔树脂纯化短梗五加叶中chiisanoside的工艺。通过静态吸附与解吸附实验筛选7种型号的大孔树脂,并对所选型号树脂工艺参数进行考察。实验结果显示D101型大孔树脂对chiisanoside的吸附与解吸附效果最佳,最优条件为以含生药0.2 g/mL、上样体积为柱体积的5倍、用50%乙醇溶液洗脱、7倍柱体积的洗脱液来进行最后洗脱。首次采取Box-Behnken效应面法提取和大孔树脂优化富集工艺的联用对目标性成分chiisanoside的提取进行优化。在工艺优化的基础上,对5 kg短梗五加叶进行提取、富集有效成分chiisanoside,纯化后过硅胶柱,得到9.58 g样品。纯化后的化合物应用于抗肿瘤药理活性实验中,结果显示chiisanoside能显著抑制H22荷瘤小鼠实体瘤生长,对免疫器官没有损害。给药后血清细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ均有所升高,而VEGF则受到抑制。此外,从HE、TUNEL染色和免疫组织化学分析中我们可以发现chiisanoside能够使肿瘤细胞凋亡,其机制或许与上调Bax、Caspase-3,下调Bcl-2、VEGF有关。进一步研究chiisanoside在大鼠体内药代动力学及组织分布,结果显示chiisanoside在体内吸收速度快。此外,chiisanoside在肝脏和小肠中含量最高,这表明chiisanoside对肝脏和小肠有良好的靶向性。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

1.2.1.1 色谱条件CXTH-3000 高效液相色谱仪，色谱柱为 Odyssll C18（200mm×4.6mm，5μm）相：乙腈-水（35:65，v/v）；流速：1mL·min-1；检测波长：205nm；柱温：40℃；20 μL。1.2.1.2 对照品的制备及标准曲线的绘制用甲醇精确配制 4mg/mL 的 chiisanoside 标准液，备用。吸取少量上述标准液进样 2、4、8、10、12 μL，按“1.2.1.1”项中的色谱条件进行分析，以各体积对照液的峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（x）来绘制标准曲线，回归Y=2555799.70x-2144924.50（r2=0.9991），结果表明当进样量在 8~28 μg 的范围内系良好。1.2.1.3 供试品溶液制备精密称取短梗五加叶粉末 1.0 g，置于具塞三角瓶中，根据不同的实验提取条梗五加叶进行提取，提取液先在 3000 r/min 的条件下离心 10 min，再将上清液过 0滤膜，滤液作为供试品溶液。采用高效液相色谱法对供试品溶液中 chiisanoside 的行分析，每次进样 10 μL，样品色谱图如图 1-1。

实验分别对乙醇的体积分数、超声提取的时间及液固比这 3 个因素采取考素对 chiisanoside 提取率的影响。实验具体设计如下，即将乙醇的体积分%、30%、50%、70%及 90% 5 组，超声时间分别为 5、15、30、60、90比为 1:20、1:40、1:80、1:100、1:120 和 1:150 这 6 组。实验中，固定 2 一因素进行单因素实验的考察并且每个实验重复三次提取。.5 响应曲面实验设计响应曲面实验的设计是在单因素实验的基础上，依据 Box-Behnken 这一方素三水平的 17 个试验的响应面分析并考察这 3 个因素对提取效果的影响n-Expert trial version 8.0.6 统计软件对结果采取分析。 Chiisanoside 单因素实验结果.1 乙醇体积分数对 chiisanoside 提取率的影响固定超声提取时间为 60min，固液比为 1:120，乙醇的体积分数依次设定为70%及 90%，进行 5 组实验，结果如图 1-2。

图 1-3 超声提取的时间对 chiisanoside 提取率的影响Fig.1-3 Effects of ultrasonic extraction time on extraction rate of chiisanoside 1-3 可知，在 5 ~ 30min，chiisanoside 的提取率随时间的延长而显著提 min 时，chiisanoside 含量达到峰值，30 min 以后 chiisanoside 含量随着超慢下降。由于 30 ~ 120 min 时 chiisanoside 的提取率变化不是很明显，超声提取的时间确定在 5 ~ 60 min 为宜。固液比对 chiisanoside 提取率的影响乙醇的体积分数为50%，超声提取的时间为60 min，固液比依次设定为:100、1:120 和 1:150，进行 6 组实验，结果如图 1-4 所示。
【参考文献】

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本文编号：2865840