二氢杨梅素磷脂复合物的制备、评价及体内降糖活性研究

发布时间：2020-11-02 21:04

　　 二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)是藤茶中的主要活性成分,其含量高达30%以上,具有抗炎、降血糖、改善胰岛素抵抗、改善血脂代谢等多种药理活性,然而DMY溶解性差,体内吸收不佳,口服给药后生物利用度低,因而需通过制剂技术来改善其口服生物利用度。目前报道的DMY新剂型有包合物、脂质体、微乳、纳米胶束等,尽管在一定程度上改善DMY的溶解性,但缺乏相关的药动学研究,也尚未通过药效学实验证明DMY的生物利用度得到改善。因此,本课题将采用磷脂复合物技术制备DMY磷脂复合物,并从体外内进行表征,为DMY的新药开发和临床应用奠定基础。本课题的主要研究内容分为以下三个章节:第一章DMY磷脂复合物的制备及表征目的:制备DMY磷脂复合物,并对其进行体外表征。方法:首先,建立了定量检测磷脂复合物中DMY含量的高效液相色谱方法;其次,采用溶剂挥发法制备DMY磷脂复合物,并以DMY的结合率为指标对制备工艺进行优化;再次,通过粉末衍射、差示热扫描、扫描电镜、红外光谱法等方法对DMY磷脂复合物进行物相鉴别,最后,考察DMY磷脂复合物中DMY的载药量、溶解性及水溶液中的特征。结果:(1)在该方法下,不存在干扰DMY含量测定的其他信号峰,DMY在5.61~56.1μg/m L浓度范围内线性关系良好,DMY的检测限和定量限分别为0.0561μg/m L、0.1683μg/m L,精密度实验和重复性实验的RSD值分别为0.62%、1.09%(n=6),低中高不同浓度的加样回收率的RSD值分别为1.02%、1.23%和0.48%;(2)在磷脂复合物中,DMY以无定形态充分分散于磷脂中,同时,DMY的羟基与磷脂的极性基团之间存在一定相互作用力;(3)磷脂复合物中DMY的平均载药量为25.92%,与DMY相比,DMY磷脂复合物的水溶性提高了1.68倍。在水溶液中,磷脂复合物的粒径为231.8±7.65 nm,多分散性系数为0.206±0.024,ζ电位-60.78±5.86 mv。结论:(1)建立的高效液相色谱法专属性良好、线性关系良好、精密度和准确度高;(2)DMY磷脂复合物成功制备,磷脂复合物技术能够有效改善DMY的溶解性。第二章DMY磷脂复合物在正常大鼠及T2DM大鼠体内药动学研究目的:考察DMY磷脂复合物在正常大鼠和T2DM大鼠中的药代动力学特征,同时,考察在T2DM状态下,DMY及DMY磷脂复合物的药动学参数变化情况。方法:高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲霉素构建T2DM大鼠模型,采用LC-MS/MS检测正常大鼠及T2DM大鼠在灌胃给药后DMY的血药浓度。结果:(1)在正常大鼠中,与游离DMY组相比,DMY磷脂复合物组的最大血药浓度、药时曲线面积显著增大,体内清除率和表观分布容积显著降低。同样的变化规律也在T2DM大鼠中观察到;(2)与正常大鼠相比,T2DM状态下,游离DMY的最大血药浓度显著增高,药时曲线面积显著增大,体内清除率和表观分布容积显著降低。DMY磷脂复合物也具有同样的变化规律。结论:磷脂复合物技术能够提高DMY的口服生物利用度,有望开发成为一种的药物递送系统。此外,在T2DM状态下,DMY及DMY磷脂复合物的药代动力学参数发生显著变化,这其中的机制有待深入研究。第三章DMY磷脂复合物降糖活性研究目的:考察DMY磷脂复合物在T2DM小鼠体内的降糖活性。方法:通过高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲霉素构建T2DM小鼠模型。造模成功后,进行低高剂量的DMY、DMY磷脂复合物、DMY-磷脂混合物以及磷脂、二甲双胍灌胃给药,每周一次监测小鼠体重变化,每两周一次检测小鼠的空腹血糖变化情况。在此基础上,进行糖耐量实验,并检测小鼠的血清胰岛素和血脂水平。结果:正常组小鼠体重增长,空腹血糖无显著变化;T2DM小鼠的体重降低,长期药物干预后,二甲双胍、DMY及DMY磷脂复合物能够显著缓解糖尿病小鼠的体重下降,降低T2DM小鼠的空腹血糖。二甲双胍、DMY及DMY磷脂复合物能够显著改善T2DM诱导的葡萄糖耐量异常,改善T2DM小鼠的胰岛素抵抗和血脂代谢。结论:DMY及DMY磷脂复合物能够在一定程度上改善T2DM,有望开发成为治疗T2DM的新药。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R283.6;R285
【部分图文】：

图 1-1 不同样品在波长 290 nm 下的 HPLC 图（A：HSPC 溶液，B：DMY 对照品，C：DMY-HSPC 复合物）4.1.2 线性关系考察在该色谱条件下，DMY 对照品溶液的浓度 C 和峰面积 A 如表 1-1 所示，以 DMY峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归分析（见图 1-2），得 DMY 标准曲线线性回归方程 Y=33927X-4210.3，R2=0.9996，表明 DMY 在 5.61 μg/mL ~ 56.1 μg/mL 浓度范围内线性关系良好。表 1-1 二氢杨梅素对照品溶液浓度及峰面积浓度（μg/mL） 5.61 11.22 22.44 33.66 44.88 56.10峰面积 A 191811 375153 760416 1132789 1497997 1916765

图 1-2 二氢杨梅素浓度-峰面积的线性关系图4.1.3 定量限考察精密量取 5.61 μg/mL 的 DMY 对照品溶液 0.3 mL， 用流动相稀释至 10 mL 后，在该色谱条件下经 HPLC 检测，信噪比 S/N 约为 10，因此，DMY 在该色谱条件下的定量限（LOQ，limit of quantitation）为 0.1683 μg/mL。4.1.4 检测限考察当 5.61 μg/mL 的 DMY 对照品溶液用流动相稀释 100 倍后，在该色谱条件下经HPLC 检测，信噪比 S/N 约为 3，因此，DMY 在该色谱条件下的检测限（LOD，limitof detection）为 0.0561 μg/mL。4.1.5 仪器精密度考察同一份 DMY 对照品溶液（浓度为 5.61 μg/mL）连续进样 6 次，DMY 峰面积 A见表 1-2，平均峰面积为 192220，其 RSD 值为 0.62%，小于 2%，表明仪器精密度良

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文.09 1.3102 1.2114 2.5197 99.85.68 1.4620 1.2114 2.6734 99.99100.63 1.49 1.4131 1.2114 2.6494 102.05.49 1.4131 1.4133 2.8648 102.71.33 1.3719 1.4133 2.8104 101.78102.32 0.69 1.4646 1.4133 2.9130 102.48脂比对二氢杨梅素复合率的影响
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本文编号：2867568