炎性环境中小白菊内酯对肌腱干细胞成骨分化的影响

发布时间：2020-11-03 16:04

　　 [目的]观察炎性环境下小白菊内酯(PAR)对肌腱干细胞成骨分化的作用,探索其对骨肌腱接点损伤修复的作用及其信号通路。[方法]利用胶原酶法结合低密度接种法分离肌腱干细胞,体外验证分离细胞的成骨、成脂分化能力;TNF-α构建的炎性环境下,设置不同浓度组小白菊内酯(PAR)刺激人肌腱干细胞,用qRT-PCR检测炎症相关基因以及肌腱、成骨相关基因的表达,及Western Blot检测Run x2、β-catenin蛋白的表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人肌腱组织分离培养出干细胞。qRT-PCR检测显示,100 ng/ml TNF-α可引发炎症反应,PAR能抑制炎性相关基因COX-2、HIF-2α的表达,促进了成骨相关基因Run x2、OPN的表达,与TNF-α组对比差异有统计学意义(P0.05);而肌腱相关基因Col I、Scleraxis的表达较复杂,与TNF-α组相比,下调了Col 1α水平,却上调Scleraxis水平。Western Blot检测结果显示,与TNF-α组对比,PAR显著增加蛋白Run x2、β-catenin的表达(P0.05)。肌腱干细胞在体外可被诱导向成骨细胞和脂肪细胞分化。镜下观察茜素红S染色,PAR组均有红色钙盐沉积,相比之下对照组及TNF-α组基本无或出现少量钙盐沉积。[结论]炎性环境下小白菊内酯能控制TNF-α引起的炎性反应并可能通过β-catenin信号通路促进肌腱干细胞的成骨分化。
【部分图文】：

结晶紫染色显示约有1.3%分离出的细胞形成单细胞克隆，克隆内细胞形态较为均一；原代细胞呈梭形，扩增传代后，肌腱干细胞可呈特征性的旋涡状生长（图1）。2.2 qRT-PCR检测结果

培养7 d后，成骨相关基因mRNA的qRT-PCR检测结果见图4，与对照组相比较，TNF-α+PAR 5μmol/L组均能上调Runx2、OPN的m RNA转录水平，分别为对照组的（1.43±0.06）、（3.07±0.29）倍（P<0.05),TNF-α+PAR 10μmol/L组也能上调Runx2、OPN的mRNA转录水平，分别为对照组的（1.76±0.13）、（1.91±0.18）倍（P<0.05）。与TNF-α相比，TNF-α+PAR 5μmol/L组上调的Runx2、OPN的mRNA转录水平差异均有统计学意义（P<0.05），而TNF-α+PAR 10μmol/L组仅上调的Runx2的mRNA转录水平差异有统计学意义（P<0.05）。图3 肌腱相关基因mRNA的qRT-PCR检测结果

肌腱相关基因mRNA的qRT-PCR检测结果
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘小云;刘一舟;罗映红;刘佳;;中药骨碎补水煎液对间充质干细胞成骨分化的作用[J];人人健康;2017年08期

2 薛晶;俞艳;王利娟;于金华;张光东;;中药黄芩苷对牙髓干细胞增殖及成牙成骨分化能力的影响[J];口腔生物医学;2015年01期

3 李东晓;张磊;王岚;吴瑕;肖玉梅;邓文龙;;淫羊藿总黄酮对肌内植入组织工程化骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[J];中药药理与临床;2007年05期

4 张文贤;周红;刘涛;宋渊;;健骨益痹方含药血清对骨髓间充质干细胞体外增殖及成骨分化的影响[J];时珍国医国药;2019年07期

5 齐振熙;仲卫红;李树强;;?虫含药血清对骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化的影响[J];福建中医药大学学报;2012年01期

6 宋欧荻;秦书俭;於绍龙;屈惠莹;田原;;麦角甾苷对大鼠骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响研究[J];中国临床药理学杂志;2018年10期

7 刘建林;陈曦;王素文;范招纳;;柚皮苷促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化能力的研究[J];中国美容医学;2013年03期

8 潘慧欣;崔元璐;;中药诱导骨髓间充质干细胞成软骨及成骨分化的研究进展[J];天津中医药;2018年10期

9 李学东;陈斌;郑创义;刘钊勇;杜世新;;三七总皂甙对骨髓基质细胞成骨分化及成骨作用的调节[J];中国骨质疏松杂志;2009年05期

10 李文宝;李刚;;补肾中药诱导干预骨髓间充质干细胞成骨分化研究进展[J];实用中医药杂志;2013年04期

相关博士学位论文 前6条

1 彭宇飞;中药关节腔灌注对激素型股骨头坏死MSCs调控机制的研究[D];黑龙江中医药大学;2017年

2 王楠;姜黄素与人参果提取物对间充质干细胞成骨分化的影响与成骨不全模型的作用[D];郑州大学;2019年

3 侯秋科;龟板有效成分促间充质干细胞成骨分化的miRNA-VDR网络机制[D];广州中医药大学;2016年

4 杨建平;虫草素对人脂肪干细胞成骨分化作用的实验研究[D];南京医科大学;2017年

5 张文明;miR-141调控OP小鼠BMSCs成骨分化机制及健骨颗粒干预作用研究[D];福建中医药大学;2016年

6 仲卫红;土鳖虫含药血清对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化差异蛋白组学的影响[D];福建中医药大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 高歌;网络药理学方法探讨川续断皂苷Ⅵ诱导间充质干细胞成骨分化[D];吉林大学;2019年

2 李金诚;龙牙楤木皂苷Ⅳ对原代破骨、成骨细胞的影响及成骨分化机制的研究[D];中央民族大学;2019年

3 张磊;黄精多糖体内抗骨质疏松作用及体外促进骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究[D];广西医科大学;2018年

4 刘小钰;基于Wnt/β-catenin信号通路探讨固本增骨胶囊含药血清促进骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究[D];甘肃中医药大学;2018年

5 苏亮磊;基于Wnt/β-catenin信号通路探讨生骨再造丸调控激素性股骨头坏死BMSCs成骨分化的机制研究[D];甘肃中医药大学;2018年

6 蒋林博;结合BMPs信号通路探讨固本增骨胶囊含药血清对大鼠BMSCs增殖和成骨分化的影响[D];甘肃中医药大学;2018年

7 李钺;巴戟天寡糖对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的实验研究[D];广州中医药大学;2018年

8 范亚楠;淫羊藿次苷Ⅱ促进骨髓间充质干细胞成骨分化及相关基因表达的研究[D];河南中医药大学;2018年

9 杨志烈;淫羊藿苷与补骨脂素对环磷酰胺导致小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化障碍的拮抗作用研究[D];滨州医学院;2016年

10 黄舒啸;土鳖虫提取物在SD大鼠BMSCs成骨分化中的作用及其初步机制探讨[D];郑州大学;2018年

本文编号：2868794