辣木籽醇提物对缺血性脑卒中的神经保护作用及其机制研究
发布时间：2020-11-03 17:38
研究背景:脑卒中是一种神经功能缺损的常见脑血管疾病,患者常伴有认知功能障碍等脑缺血慢性损伤,若不加以控制容易发展为老年痴呆。目前临床上,对于脑缺血慢性损伤尚无有效的治疗药物,因此,研究和寻找改善脑缺血认知功能障碍的药物具有十分重要的意义。辣木是一种新型药食两用植物,具有包括神经保护作用在内的多种药理作用。本实验室在前期实验研究中,已经有结果证实辣木籽醇提物(MSE)可以改善东莨菪碱诱导的小鼠学习记忆能力降低症状。但是辣木籽对脑卒中的神经保护作用并不明确,因此本论文对此展开了研究。研究目的:探究MSE对大鼠脑卒中后的神经保护作用及认知功能障碍的改善作用。研究方法:应用大脑中动脉栓(middle cerebral artery occlusion,MCAO),构建脑卒中模型。在急性期实验中:先分别给予缺血后小鼠不同剂量MSE(125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg)预保护3天,探究其预保护作用。而后在再灌注后不同时间点(Oh、2h、4h)给予术后小鼠一次500 mg/kg MSE,探究其治疗时间窗;在慢性期实验中:术后大鼠腹腔注射给予BrdU(50mg/kg)7天,并同时灌胃给药MSE400mg/kg。脑缺血模型后第21天,通过为期7天的水迷宫实验来评价其学习记忆能力、缺血后第28天取材。利用免疫荧光双标技术于缺血后28天检测BrdU+/NeuN+以及 BrdU+/GFAP+细胞。运用 Western Blot,RT-PCR 技术检测缺血后 28 天 GAP-43/SYP、NGF/NT3/BDNF、SOD、CHAT、IL-6/IL-10、Bax/Bcl-2的蛋白表达和基因水平。同时检测缺血后海马组织中ACh/AchE活性。实验结果:1.MSE对急性脑卒中具有预保护和治疗作用,最有效剂量为500mg/kg,最佳治疗时间点为再灌注后2h。2.MSE通过促进突触可塑性(GAP-43、SYP)以及神经营养因子(BDNF、NGF以及NT3)的产生,进而促进缺血侧海马DG区的神经元新生,发挥促神经发生的作用,进一步改善认知功能障碍。3.MSE可能通过调节胆碱能系统来提高学习记忆能力4.MSE可能通过抑制缺血性脑卒中诱导的氧化应激,炎症反应和细胞凋亡从而进一步产生神经保护作用。实验结论:MSE具有神经保护作用,体现在对急性脑卒中产生预保护和治疗双重作用;以及通过促进神经发生和调节胆碱能系统来改善脑卒中慢性期认知功能障碍。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
。??神经发生是指神经干细胞，在各种外界因素刺激下生成新的神经元，并且进??一步构建神经元之间突触联系，从而达到促进神经新生的目的，同时发挥修复??中枢神经损伤的功能。在中枢神经系统发育过程中，祌经发生会经过３个阶段：??①增殖：即产生新的细胞；②向目标区域迁移；③最终分化为特定表型。一般情况??下，成年哺乳动物脑内神经干细胞处于静息状态，在一定因素诱导下（如脑组织??的机械损伤、脑缺血缺氧损伤、氧化应激损伤等），神经干细胞在脑内损伤部位??及多个场所的开始大量增殖［１８］。在成年啮齿类动物中，大脑组织中有两类重要??的神经干细胞群，分别位于侧脑室的视下区（ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｚｏｎｅ，ＳＶＺ），和海??马齿状回颗粒下区（ｓｕｂｇｒａｎｕｌａｒｚｏｎｅ，ＳＧＺ）。室下区中产生的祌经元会沿着头??端迁移渠道（ｒｏｓｔａｌ?ｍｉｇｒａｔｏｒｙ?ｓｔｒｅａｍ，ＲＭＳ）迁移至嗅球。而海马齿状回颗粒下??区中新生的神经元会直接汇入到海马中的神经环路，发挥学习和记忆功能。这??些研宄提示我们，增加海马中神经发生可以缓解脑卒中引起的空间认知缺陷。??
?第二章辣木好醇提物对缺血性脑卒中后的神经保护作用扎以固定线栓，注意动作轻缓不要拉扯到线栓。假手术组只进以及颈外动脉的分离操作，并将颈外动脉穿两条线，分别结扎，剪断颈外动脉。最后结缝合皮肤，消毒，将术后的大鼠保温放（７）拔栓：２个小时后将线栓头端轻轻拔出到近切口处，缺血及再灌注过程中保持室温２３－２５°Ｃ，常规分笼词养ｓ??
３．１．?ＭＳＥ对小鼠急性脑缺血的预保护作用??为了评估ＭＳＥ对急性脑缺血的预保护作用，在进行脑缺血模型之度分别为１２５ｍｇ?／?ｋｇ，２５０ｍｇ?／?ｋｇ，５００ｍｇ?／?ｋｇ的ＭＳＥ对小鼠进行灌天。缺血再灌注２４ｈ后，取材ＴＴＣ染色。结果显示，相比于ｖｅｈｉｃｌｅ?＋?ＭＭＳＥ给药组的小鼠的脑梗塞体积显著减少，尤其是给药浓度为５００ｍｇ果最佳（图．３．１Ａ，Ｃ，Ｐ＜０．００１）。行为学评分结果显示，２５０ｍｇ／ｋｇ或５００ｍｇ／高剂量组可明显减轻缺血引起的运动功能障碍，而低剂量给药组效（图．３．１Ｂ，Ｐ＜?０．０５?ａｎｄ?Ｐ＜?０．０１）。脑缺血可引起严重的脑水肿。与模型５００ｍｇ／ｋｇ?ＭＳＥ预处理后的小鼠的脑水肿体积减少了大约６０％（图．３．１?Ｄ由此推测ＭＳＥ的神经保护作用具有剂量依赖性，其中５００ｍｇ?／?ｋｇ的给保护作用是最为明显的。因此，我们后期均选择５００?ｍｇ／ｋｇ的浓度来的神经保护作用。??
【参考文献】
本文编号：2868886
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
。??神经发生是指神经干细胞，在各种外界因素刺激下生成新的神经元，并且进??一步构建神经元之间突触联系，从而达到促进神经新生的目的，同时发挥修复??中枢神经损伤的功能。在中枢神经系统发育过程中，祌经发生会经过３个阶段：??①增殖：即产生新的细胞；②向目标区域迁移；③最终分化为特定表型。一般情况??下，成年哺乳动物脑内神经干细胞处于静息状态，在一定因素诱导下（如脑组织??的机械损伤、脑缺血缺氧损伤、氧化应激损伤等），神经干细胞在脑内损伤部位??及多个场所的开始大量增殖［１８］。在成年啮齿类动物中，大脑组织中有两类重要??的神经干细胞群，分别位于侧脑室的视下区（ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｚｏｎｅ，ＳＶＺ），和海??马齿状回颗粒下区（ｓｕｂｇｒａｎｕｌａｒｚｏｎｅ，ＳＧＺ）。室下区中产生的祌经元会沿着头??端迁移渠道（ｒｏｓｔａｌ?ｍｉｇｒａｔｏｒｙ?ｓｔｒｅａｍ，ＲＭＳ）迁移至嗅球。而海马齿状回颗粒下??区中新生的神经元会直接汇入到海马中的神经环路，发挥学习和记忆功能。这??些研宄提示我们，增加海马中神经发生可以缓解脑卒中引起的空间认知缺陷。??
?第二章辣木好醇提物对缺血性脑卒中后的神经保护作用扎以固定线栓，注意动作轻缓不要拉扯到线栓。假手术组只进以及颈外动脉的分离操作，并将颈外动脉穿两条线，分别结扎，剪断颈外动脉。最后结缝合皮肤，消毒，将术后的大鼠保温放（７）拔栓：２个小时后将线栓头端轻轻拔出到近切口处，缺血及再灌注过程中保持室温２３－２５°Ｃ，常规分笼词养ｓ??
３．１．?ＭＳＥ对小鼠急性脑缺血的预保护作用??为了评估ＭＳＥ对急性脑缺血的预保护作用，在进行脑缺血模型之度分别为１２５ｍｇ?／?ｋｇ，２５０ｍｇ?／?ｋｇ，５００ｍｇ?／?ｋｇ的ＭＳＥ对小鼠进行灌天。缺血再灌注２４ｈ后，取材ＴＴＣ染色。结果显示，相比于ｖｅｈｉｃｌｅ?＋?ＭＭＳＥ给药组的小鼠的脑梗塞体积显著减少，尤其是给药浓度为５００ｍｇ果最佳（图．３．１Ａ，Ｃ，Ｐ＜０．００１）。行为学评分结果显示，２５０ｍｇ／ｋｇ或５００ｍｇ／高剂量组可明显减轻缺血引起的运动功能障碍，而低剂量给药组效（图．３．１Ｂ，Ｐ＜?０．０５?ａｎｄ?Ｐ＜?０．０１）。脑缺血可引起严重的脑水肿。与模型５００ｍｇ／ｋｇ?ＭＳＥ预处理后的小鼠的脑水肿体积减少了大约６０％（图．３．１?Ｄ由此推测ＭＳＥ的神经保护作用具有剂量依赖性，其中５００ｍｇ?／?ｋｇ的给保护作用是最为明显的。因此，我们后期均选择５００?ｍｇ／ｋｇ的浓度来的神经保护作用。??
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 王晓英,张均田;人参皂甙Rg_1对自由活动大鼠突触可塑性的影响及其作用机制<英文>[J];Acta Pharmacologica Sinica;2001年07期
本文编号：2868886
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