目的1通过比较胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠关节炎临床积分、组织病理学、骨微结构、血清学指标变化,评估麝香乌龙丸治疗CIA小鼠的疗效。2通过比较麝香乌龙丸对CIA小鼠膝关节滑膜微血管数量及血管内皮钙黏蛋白(VEcadherin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达的影响,探析麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制。方法1将45只DBA/1小鼠随机分为对照组15只和造模组30只。造模组小鼠尾根部皮内注射0.1ml CII乳剂(牛II型胶原乙酸溶液与弗氏完全佐剂等量混合)进行首次免疫和第21天再次免疫,构建CIA模型,并将出现继发关节炎症状的小鼠视为造模成功小鼠。2加强免疫后,将造模成功的30只小鼠随机分为模型组和治疗组各15只。治疗组第22天起给予麝香乌龙丸水溶剂灌胃,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。连续治疗21天,于第43天取材。3疗效评价:从第1天起,每7天称量并记录小鼠体重;第21天起,每3天进行一次关节炎临床积分评定;采用HE、番红O-固绿及缺氧探针免疫组化染色评估膝关节组织病理学变化;采用微型电脑断层扫描系统(micro-CT)评估膝关节骨微结构变化;采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(Elisa)测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及干扰素-γ(IFN-γ)的浓度,以评估小鼠炎症水平。4微血管数量及细胞连接评价:免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹试验(Western Blot)测定小鼠膝关节滑膜组织CD34的表达水平;免疫组织化学染色观测小鼠膝关节滑膜组织VEcadherin和ZO-1两种细胞连接的表达水平。结果1与对照组相比,CIA模型组小鼠体重明显降低,而治疗组小鼠体重显著高于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05)。2自第21天起,CIA模型组关节炎临床积分高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);第33天起,CIA模型组关节炎临床积分持续升高,而治疗组开始下降,治疗组关节炎临床积分显著低于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05)。3 HE染色结果显示,与对照组比较,CIA模型组小鼠滑膜细胞过度增生,形态异常,排列紊乱,有大量炎性细胞浸润,形成血管翳;麝香乌龙丸治疗后滑膜增生及炎症明显改善。4番红O-固绿染色结果显示,与对照组比较,CIA模型小鼠软骨层较薄,表面粗糙,软骨细胞计数减少,基质重度失染,潮线被破坏,软骨结构破坏严重,Mankin评分显著升高,差异有统计学意义(P0.05);经麝香乌龙丸治疗后,与CIA模型组相比,软骨损伤程度明显减轻,Mankin评分显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。5与对照组相比,CIA模型组小鼠缺氧面积大,阳性染色深,缺氧区域平均光密度值显著高于对照组(P0.05);经麝香乌龙丸治疗后,CIA小鼠膝关节滑膜缺氧面积明显减少,阳性染色变浅,缺氧区域平均光密度值显著降低(P0.05);6 MicroCT结果显示对照组膝关节结构完整,骨表面光滑,而关节炎小鼠骨严重侵蚀,有骨质疏松的迹象,麝香乌龙丸治疗显著降低了关节损伤程度。与对照组相比,CIA模型组小鼠骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、数目(Tb.N)、骨密度(BMD)明显降低,骨小梁分离度(Tb.Sp)和结构模式指数(SMI)显著增加,差异有统计学意义(P0.05);麝香乌龙丸治疗后,这些参数显著改善(P0.05)。7与对照组相比,CIA模型组小鼠血清中TNF-α、IL-6及IFN-γ的浓度明显升高,差异有统计学意义(P0.05);治疗组小鼠血清中TNF-α、IL-6及IFN-γ的浓度与CIA模型组相比显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。8免疫组化和Western Blot结果显示,CIA模型组滑膜组织CD34蛋白相对表达量明显高于对照组,差异有显著意义(P0.05);经麝香乌龙丸治疗后,CIA小鼠滑膜组织CD34蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。9免疫组化结果显示,CIA模型组滑膜组织VE-cadherin和ZO-1的阳性表达和平均光密度值明显少于对照组(P0.05);经麝香乌龙丸治疗后,CIA小鼠滑膜组织VE-cadherin和ZO-1的阳性表达和平均光密度值显著增加(P0.05)。结论1麝香乌龙丸能够有效缓解CIA小鼠的关节肿胀度,降低关节炎指数,抑制滑膜组织增生,减轻炎性细胞浸润,缓解滑膜缺氧状态,延缓软骨及骨破坏。2麝香乌龙丸能够减少膝关节滑膜微血管数量,其抗血管新生的机制与上调血管内皮连接蛋白VE-cadherin和ZO-1的表达有关。图12幅;表2个;参139篇。
【学位单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
图 1 小鼠体重的变化Fig.1 Changes of body weight in mice节炎临床积分评定图 2）关节炎临床积分评价标准，由小鼠关节炎临床积分
a-0 分；b-1 分；c-2 分；d-3 分；e-4 分图 2 CIA 小鼠关节炎临床积分评价标准Fig.2 Evaluation criteria of CIA clinical arthritis scores
由小鼠关节炎临床积分变化可知（图3），从 d21 天观察起，CIA 模型组小鼠关节炎临床积分一直显著高于对照组，差异有显著意义（P＜0.05）。从 d21 至 d30 天，与 CIA 模型组相比，治疗组关节炎临床积分略低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。从 d33 至 d42 天，CIA 模型组小鼠关节炎临床积分持续升高，治疗组小鼠关节炎临床积分下降，与 CIA 模型组相比
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 张莉;高峰;滕凤猛;杨学文;;雷公藤多甙对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织微血管新生的影响[J];临床和实验医学杂志;2015年21期
2 郭丽红;刘长信;田贵花;任丽娜;张瑞;殷媛;马文珠;;电针对RA模型大鼠VEFG影响的实验研究[J];中医药学报;2015年05期
3 张国建;;从“络”辨治类风湿关节炎[J];北京中医药;2015年07期
4 翁金清;彭昊;周建林;方洪松;刘丰;邓爽;杨骁;;HIF-1α、VEGF及CD34在大鼠骨关节炎模型软骨中的表达及意义[J];生物医学工程与临床;2015年04期
5 郭丽红;刘长信;田贵花;任丽娜;张瑞;殷媛;周明亮;马文珠;;电针对类风湿性关节炎大鼠血清及膝关节白介素-17和白介素-23的影响[J];针刺研究;2015年02期
6 靖卫霞;朱跃兰;;从络治痹理论探讨[J];中华中医药学刊;2014年12期
7 吴青云;熊雪婷;许碧莲;陈文双;崔燎;吴铁;张新乐;;泼尼松对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠股骨微结构及生物力学的影响[J];中国药理学通报;2014年07期
8 张兰坤;过伟峰;肖婧;盛蕾;;从叶天士“络以通为用”学说谈通络药物的临床应用[J];中医杂志;2014年09期
9 夏坤伟;陈礼刚;;血管内皮细胞钙粘素研究进展[J];西南军医;2014年02期
10 刘瑞敏;王明丽;朱诗白;白慧玲;马远方;;DBA/1小鼠胶原诱发关节炎模型的特征[J];河南大学学报(医学版);2013年04期
相关博士学位论文 前3条
1 卢军;断藤益母汤及其组方药物对胶原诱导性关节炎大鼠骨代谢的影响及其机制研究[D];广州中医药大学;2016年
2 夏玉坤;RLX/RXFP1、MMP9/MMP13和RANKL/OPG在关节炎软骨和骨破坏及中药治疗中的作用[D];华中科技大学;2012年
3 侯丽萍;从临床研究探讨类风湿关节炎的病因病机[D];湖北中医学院;2006年
相关硕士学位论文 前2条
1 彭麒;艾灸“肾俞”、“足三里”对RA大鼠血清IL-6、VEGF影响的研究[D];成都中医药大学;2015年
2 吴翩;血管内皮细胞生长因子密度梯度对内皮细胞迁移行为的调控[D];重庆大学;2015年
本文编号：
2869948
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2869948.html
