娑罗子指纹图谱及有效成分七叶皂苷提取纯化工艺研究

发布时间：2020-11-05 15:55

　　 目的:娑罗子为七叶树科植物七叶树、浙江七叶树或天师栗的干燥成熟种子,有和胃止痛,理气、疏肝的功效;临床常用于治疗肝胃气滞,胃脘疼痛,胸腹胀满等病症。七叶皂苷是娑罗子提取物的主要活性成分,其抗炎消肿、抗氧化、降低神经损伤、抗肿瘤作用等药理作用明显,七叶皂苷多以钠盐的形式应用于临床,主要用于治疗术后水肿、慢性静脉功能不全、脑溢血、颅脑损伤等疾病。娑罗子中化学成分复杂,为了更好控制其质量,本实验对产自于陕西、河南、浙江、湖北、广西等地区10批娑罗子药材进行研究,建立了指纹图谱并进行了 LC-MS分析,以期为娑罗子药材质量控制提供思路参考和依据。此外,目前文献报道对于娑罗子中七叶皂苷提取分离工艺大都采用有机试剂方法,处于实验室探索阶段,本文通过大孔树脂工艺对主要有效成分七叶皂苷部位(β-七叶皂苷,即七叶皂苷A、七叶皂苷B)进行了富集纯化,以获得高含量(50%以上)的皂苷部位中间体,更好的为生活生产服务。方法:1本实验采用HPLC-PDA技术对娑罗子70%浓度乙醇的提取物进行指纹图谱研究,首先通过对柱温、流动相、波长、提取溶剂浓度因素等进行了单因素考察,在此基础上确定指纹图谱实验条件,建立娑罗子指纹图谱。依据国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》软件进行分析,生成娑罗子的标准指纹图谱,确定共有峰,以七叶皂苷A作为参照峰,进行相对保留时间和相对峰面积的计算。2在指纹图谱色谱条件下采用HPLC-MS技术对娑罗子药材乙醇提取液进行检测和分析,通过分析探讨质谱裂解规律及与相关文献比对,推测可能化学成分,研究娑罗子药材化学物质基础。3以娑罗子七叶皂苷提取率为指标,同时兼顾出膏率因素影响,在对提取时间(c1h、c2h、c3h、c4h、c5h)、乙醇浓度(ai%、a2%、a3%、a4%、a5%)、提取次数(d1次、d2次、d3次、d4次、d5次)、料液比(b1倍、b2倍、b3倍、b4倍、b5倍)等单因素考察基础上,再选择合适因素水平进行L9(34)正交试验,参照考察指标确立最佳提取工艺并验证。4首先以吸附率和解吸附率为指标优选合适的娑罗子七叶皂苷纯化富集工艺大孔吸附树脂,再以七叶皂苷A、七叶皂苷B含量及其转移率为考察指标,采用单因素考察的方法对大孔树脂纯化工艺上样浓度(e1g/mL、e2g/mL、e3g/mL、e4g/mL、e5g/mL生药量)、上样流速(f1BV/h、f2BV/h、f3BV/h、f4BV/h 和 f5BV/h)、醇洗浓度(a1%、a2%、a3%、a4%、a5%)、醇洗流速(f1 BV/h、f2BV/h、f3BV/h、f4BV/h 和 f5BV/h)、径高比(g1、g2、g3)水平进行优化,进行下一步的L9(34)正交纯化工艺试验,获得稳定的纯化富集工艺。5运用优选出的最佳提取纯化工艺制备方法考察10批中间体小样(不同产地的10批药材)七叶皂苷A、七叶皂苷B含量,初步确定由本工艺制得的中间体方法合理性。结果:110批娑罗子药材含有13个共有色谱峰,通过标准品指认了七叶皂苷A、七叶皂苷B、七叶皂苷C、七叶皂苷D色谱峰,不同批次娑罗子药材共有峰相对保留时间RSD较小,而相对峰面积的RSD较大,在10批娑罗子药材中大部分相似度在0.9以上,有三批产地药材相似度差异较大,小于0.9。不同产地间娑罗子药材化学成分大体相同,但含量存在差别。2通过HPLC-MS分析技术,探讨质谱裂解规律及与相关文献比对,推测鉴定了娑罗子中15个化学成分。3娑罗子中七叶皂苷最佳提取工艺为:取适量娑罗子药材,加入b2倍量a4%乙醇浸泡1h后,加热回流提取,提取d2次,提取时间为每次c1h,过滤,合并2次提取液,即得。4娑罗子中七叶皂苷最佳富集工艺为:采用C型大孔树脂纯化富集七叶皂苷部位,上样浓度为e5g/mL,上样流速为f1BV/h,乙醇洗脱浓度为a3%浓度乙醇,乙醇洗脱流速为f2BV/h,树脂柱径高比为g2,主要收集从第3/4个柱体积到第3个柱体积的前3/4部分的a3%乙醇洗脱液。5不同产地的10批药材均可以获得七叶皂苷A、七叶皂苷B含量为50%以上的中间体,初步确定由本工艺制得的中间体方法合理性。结论:该指纹图谱研究方法精密度、稳定性及重复性良好,不同产地娑罗子相似性程度不同,来自陕西汉中的5批药材与河南产地娑罗子相似度较高,相似度在0.9以上,而来自浙江、湖北、广西产地娑罗子药材与其相似度较低,说明娑罗子化学成分含量与产地来源有较大的关联性。结合LC-MS分析,可以为娑罗子质量控制研究提供理论参考依据。七叶皂苷提取纯化富集工艺简便易行,其含量、转移率较高,重复性、稳定性良好,适合于工业化生产需要。
【学位单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R284.2
【部分图文】：

分离度较好，且主要色谱峰响应值高，基线平稳。因此选择２４０?ｎｍ作为检测波长，同??时此波长也符合娑罗子所含主要活性成分七叶皂苷类化合物的吸收波长。不同波长下的??色谱图如图１－３所示。??４３??

２．１．５对柱温的考察??本实验分别考察了?２５°Ｃ、３０°Ｃ、３５°Ｃ、４０°Ｃ柱温对分离效果的影响，最终选择３５°Ｃ??作为实验分析温度。不同温度考察结果色谱图如图１－５所示。??４７??

ＳＢ－Ａｑ（?４．?６?ｍｍ?ｘ?２５０?ｍｍ，５?｜ｉｍ）、Ｗａｔｅｒｓ?ＸＢｒｉｄｇｅ?Ｃ１８?（４．?６?ｍｍ?ｘ?２５０?ｍｍ，５?ｐｍ）等?３??种色谱柱进行了考察，最终确定选用分离度良好、峰数最多、色谱峰信息丰富的Ａｇｉｌｅｎｔ??ＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍｘ?２５０?ｍｍ，５卜ｉｍ）色谱柱，各色谱柱的色谱图如图１－６所示。??Ｍ??ＩＮ??ＩＭ??１．１２??Ｍ??０．？??１０＃?１￣￣—／ｗＡＩＩ?Ａ＿Ｊ?Ｕａ???ｉｌ＾－Ｎ??＿？??????■ｍ??＂°＇〇．００?１００?４．００?ｉＶｌ?ｉｎ?１０＾０?１１００?１４．００?１Ｕ０?Ｗ?？．００?２．００?２４Ｊ０?５ｉ？?３．００?３０．Ｕ?３１００?３４．Ｕ?３６．００?Ｍ?４０．００?ＣＭ?Ｕ．００?４６．００?４Ｓ．ＯＯ?５０ｊ）０??Ａｇｉｌｅｎｔ?Ｚｏｒｂａｘ?ＳＢ－Ｃ１８（?４．?６?ｍｍ?ｙ?２５０?ｍｍ
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本文编号：2871857