固相萃取—定量核磁共振波谱法测定中药板蓝根饮片中表告依春、乳增宁胶囊中

发布时间：2020-11-06 06:30

　　 中药成分复杂,将有效成分富集并测定其含量是研究开发中药的重要环节。qNMR方法无需被测物的高纯标准品,只需常用的几种内标和氘代试剂就可完成定量分析,但存在检测灵敏度和干扰问题。SPE作为一种方便有效的样品前处理技术,具有浓缩(富集)和样品净化功能,操作简便、回收率高。本文将SPE与qNMR结合,利用SPE的富集作用显著拓展了 qNMR用于低含量复杂样品的定量分析范围。本文以板蓝根饮片、乳增宁胶囊和双黄连胶囊为样品,分别建立了 SPE-qNMR测定三种中药中有效成分含量的方法,对所建立的方法进行了验证,并在无需待测物高纯标准品的情况下分别测定了板蓝根饮片中表告依春、乳增宁胶囊中淫羊藿苷和双黄连胶囊中绿原酸的含量。1.建立了 SPE-qNMR测定板蓝根饮片中的有效成分表告依春含量的方法。样品用水两次60℃超声提取,以Poly-Sery MCX(混合型强阳离子交换)型SPE柱对提取液富集浓缩后,用qNMR测定表告依春的含量。考察了超声时间、SPE样品前处理条件的选择以及定量核磁共振技术的实验条件对定量结果的影响。选择氘代二甲基亚砜为氘代溶剂,2,3,5-三碘苯甲酸作为内标,并且用基准试剂邻苯二甲酸氢钾对其进行标定。选择脉冲宽度P1=14.1μs,延迟时间d1=5s,扫描次数NS=256为qNMR定量表告依春的实验条件。表告依春的定量峰为δ5.365～5.399 (H-7b, d,1H)。结果显示,所建方法的日内精密度的RSD为0.47%,日间精密度RSD为0.80%,表告依春与三碘苯甲酸峰面积比与质量比的零截距标准曲线线性相关系数为0.9991,且斜率与理论值相符。该法测定表告依春的LOD为0.05 mg/g; LOQ为0.19mg/g。包括样品预处理过程的表告依春的回收率为97.4%～101.7%。实际测定板蓝根饮片样品中的表告依春的含量为0.19 ～1.26 mg/g。2.建立了 SPE-qNMR测定乳增宁胶囊中有效成分淫羊藿苷含量的方法。样品用10%乙醇室温超声提取,以HC-C18型SPE柱对提取液进行浓缩除杂后,用qNMR测定淫羊藿苷的含量。考察了超声时间、SPE样品前处理条件以及定量核磁共振实验条件对定量结果的影响。选择氘代二甲基亚砜为氘代溶剂,2,3,5-三碘苯甲酸作为内标,并且用基准试剂邻苯二甲酸氢钾对其进行标定。选择脉冲宽度P1=14.1μs,延迟时间d1=1s,扫描次数NS=256为qNMR定量淫羊藿苷的实验条件。淫羊藿苷的定量峰为δ7.890～7.909(2',6'-H,d,2H)。结果显示,所建方法的日内精密度的RSD为0.43%,日间精密度RSD为0.75%,淫羊藿苷与三碘苯甲酸峰面积比与质量比的零截距标准曲线线性相关系数为0.9999,且斜率与理论值相符。该法测定淫羊藿苷的LOD为0.122mg/g; LOQ为0.368mg/g。包括样品预处理过程的淫羊藿苷的回收率为99.9%～102.9%。实际测定乳增宁胶囊中的淫羊藿苷的含量为3.947～4.392mg/g。3.建立了 SPE-qNMR测定双黄连胶囊中有效成分绿原酸含量的方法。样品用纯水室温超声提取,以HC-C18型SPE柱对提取液进行浓缩除杂后,用qNMR测定绿原酸的含量。考察了超声时间、SPE样品前处理条件以及定量核磁共振实验条件对定量结果的影响。选择氘代二甲基亚砜为氘代溶剂,对苯二甲醛作为内标,并且用基准试剂邻苯二甲酸氢钾对其进行标定。选择脉冲宽度P1=14.1μs,延迟时间d1=1s,扫描次数NS=512为qNMR定量绿原酸的实验条件。绿原酸的定量峰为δ6.149-6.182(H-8',d,1H)。结果显示,所建方法的日内精密度的RSD为1.2%,日间精密度RSD为1.5 %,绿原酸与对苯二甲醛峰面积比与质量比的零截距标准曲线线性相关系数为0.9999,且斜率与理论值相符。该法测定绿原酸的LOD为0.0017mg/g; LOQ为0.0791mg/g。包括样品经SPE预处理过程的绿原酸的回收率为101.3%～104.4%。实际测定双黄连胶囊中的绿原酸的含量为9.68～10.35 mg/g。
【学位单位】：上海应用技术大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R286.0;O657.2
【部分图文】：

超声时间?ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ?ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）??图２．１超声时间与响应值的关系??Ｆｉｇ．２．１?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ?ｔｉｍｅ?ａｎｄ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｖａｌｕｅ??，表告依春直接ＨＰＬＣ测定的峰面积较高，继续增加时间响间为４５ｍｉｎ。??，本实验最终选择的提取方法为：超声提取；提取２次第一

？／Ａｘ５６??ｓ，??图２．２表告依春结构式??Ｆｉｇ．?２．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ??Ａ」?ｊＬｉＬＩ?．?ｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??１０?５?０??５?ｌ?ｌ?ＪＵｌ?Ｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?｜?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?｜??１０?５?０??＇?１１?ｉ?ｉ?ｉｌｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??１０?５?０??Ｓ（ｐｐｍ）??图２．３表告依春和内标２３＾５？三碘苯甲酸的ＮＭＲ谱图（Ａ：表告依春；８：２３，５＊三碘苯甲酸；Ｃ：?Ａ和Ｂ??的混合物）??Ｆｉｇ．２．３?ＮＭＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ?ａｎｄ?ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｓｔａｎｄａｒｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｉｉｚｏａｔｅ?（Ａ：?Ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ；?Ｂ：??２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ；?Ｃ：?ｔｈｅ?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａ?ａｎｄ?Ｂ）??２３．４．２定量峰确认??取样品１，用２．２．２节的方法得到待测样品，测得核磁共振图谱（图２．４Ａ），与表告依春??和内标混合物图谱（图２．４Ｄ）比较。此时，内标峰的出峰位置出现了明显的变化，由原来的??５７．７４８？７．７４６?（ｄ，ｌＨ）和５８．３３３？８．３３５?（ｄ，ｌＨ）移至５７．３１３？７．３１４?（（ＵＨ）和５７．９９４?（ｄ，ｌＨ）。考虑到??洗脱液为碱性，我们在样品中加入氘代硫酸后再测试ＮＭＲ谱图进行比较，结果加入少量??氖代硫酸即可以恢复到原来的化学位移

?４??５（ｐｐｍ）??图２．４板蓝根提取样品与混合对照品的ＮＭＲ谱图（Ａ：样品；Ｂ：?Ａ的放大图；Ｃ：?Ａ中加入内标；Ｄ：??表告依春与内标物混合物）。??Ｆｉｇ．?２．４?ＮＭＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?Ｒａｄｉｘ?Ｉｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ?ａｎｄ?ｍｉｘｅｄ?ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ?（Ａ：?Ｒａｄｉｘ?Ｉｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ；?Ｂ：??Ｔｈｅ?ｅｎｌａｒｇｅ?ｐａｒｔ?ｏｆ?Ｆｉｇ．?Ａ；?Ｃ：?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｒａｄｉｘ?ｌｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ?ａｎｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ；?Ｄ：?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ??ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ?ａｎｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ）??２．３．５核磁实验参数的影响??分别考察了脉冲宽度ＰＩ、扫描次数ＮＳ和延迟时间ｄｌ对积分面积的影响。当ＰＩ彡??１４．１叫ｄｌ＝５ｓ，?ＮＳ彡２５６时，信噪比可以达到定量要求（Ｓ／Ｎ彡１５０），且Ａｒ与Ａｓ趋于稳定。??故选定核磁参数?Ｐｌ＝１４．１０ｊｘｓ，?ｄｌ＝５ｓ，?ＮＳ＝２５６。??２．３．６对２，３，５－三碘苯甲酸和表告依春纯品的含量校正??在２．２．２的实验条件下，以ＤＭＳＯ为溶剂，基准物质邻苯二甲酸氢钾的ＮＭＲ峰Ｈ４，??５?（５７．４９３３？７．５１１，ｄｄ，２Ｈ）与三碘苯甲酸ＮＭＲ定量峰互不干扰。所以选择邻苯二甲酸氢钾作??为校准２
【参考文献】

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本文编号：2872652