芒果苷对BCBL-1细胞增殖、凋亡、分泌IL-4及KSHV裂解复制的影响

发布时间：2020-11-06 06:06

　　 目的:本研究旨在探索芒果苷(mangiferin)于体外对BCBL-1细胞株增殖、凋亡、分泌IL-4和胞内KSHV的影响,以及可能的作用机制。方法:1.采用CCK-8细胞活性实验分别检测不同芒果苷浓度对体外培养的BCBL-1细胞的生长抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);2.用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)来检测800μmol/L的芒果苷作用不同时间段(12h,24h,48h)对BCBL-1细胞株分泌IL-4的影响;3.用Annexin V/PI-FITC标记400,800和1600μmol/L浓度的芒果苷作用24h后的BCBL-1细胞,并用流式细胞仪分析,计算Annexin V/PI-细胞比率,了解BCBL-1细胞凋亡情况;4.将400、800和1600μmol/L芒果苷作用于BCBL-1细胞24h、48h、72h后,利用荧光定量PCR法检测病毒复制周期相关的基因(LANA、ORF50和PAN)表达量,观察芒果苷对KSHV复制周期的影响;5.800μmol/L芒果苷干预BCBL-1细胞12h后,利用RT2 Profiler PCR ArraysHuman Apoptosis基因芯片筛选与细胞凋亡相关信号通路中异常表达的基因。结果:1.芒果苷具有抑制BCBL-1细胞生长的作用,具有剂量依赖性(P0.05),计算出芒果苷对BCBL-1细胞的IC50分别为979.89μmol/L(24h)、739.19μmol/L(48h);2.芒果苷浓度在800μmol/L时IL-4分泌水平有上升的趋势,差异有统计学意义(P0.01);3.Annexin V/PI-FITC标记的细胞凋亡实验证明:与对照组相比,芒果苷组中的晚期死亡细胞(Annexin V+/PIFITC+)数量增加(P0.05),早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-FITC-)的数量变化并没有差异(P0.05);4.芒果苷处理细胞后病毒潜伏期基因LANA表达量变化不明显,病毒裂解期基因ORF50和PAN表达量有上升的趋势(P0.01);5.RT2 Profiler PCR Arrays基因芯片筛选出:细胞凋亡相关的基因CASP5(-2.32,P=0.049)、FASLG(-2.69,P=0.040)表达量下调。结论:1.芒果苷对BCBL-1细胞具有抑制生长增殖的作用,其机制可能与芒果苷促进IL-4因子分泌有关;2.芒果苷可以诱导BCBL-1细胞死亡坏死,但芒果苷诱导细胞凋亡作用较弱,其机制可能是病毒干扰作用使细胞凋亡相关的基因CASP5和FASLG转录水平下调有关;3.芒果苷可以促进BCBL-1细胞内KSHV病毒部分进入裂解期。
【学位单位】：右江民族医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：

- 23 -图 2-2 芒果苷处理 24h 后 Annexin V+/PI-FITC–和 Annexin V+/PI-FITC+细胞百分比Fig 2-2 The percentage of Annexin V+/PI-FITC–and Annexin V+/PI-FITC+cells treated withmangiferin after 24h

- 24 -图 2-3 芒果苷处理 48h后 Annexin V+/PI-FITC–和 Annexin V+/PI-FITC+细胞百分比Fig 2-3 The percentage of Annexin V+/PI-FITC–and Annexin V+/PI-FITC+cells treated withmangiferin after 48h

- 26 -图 2-4 LANA（内参为 human cyclophilin）的标准曲线、溶解曲线和扩增曲线Fig 2-4 The standard curve and melting curve and amplification curve for the gene of LANA
【参考文献】

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本文编号：2872750