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丹防胶囊对免疫性肝纤维化大鼠肝组织Wnt1、β-Catenin、DKK1表达的影响

发布时间:2020-11-06 08:56
   目的:探讨丹防胶囊对大鼠免疫性肝纤维化肝组织Wnt1、β-catenin、DKK1表达的影响。方法:60只清洁级雄性SD大鼠按随机数字法平均分为6组:模型组、丹低组、丹中组、丹高组、阳性对照组、正常组,每组10只。正常组腹腔注射等量生理盐水,除正常组外各组腹腔注射0.5 mL/只猪血清制备大鼠免疫性肝纤维化模型,每周2次,共12周。造模同时,丹低组、丹中组、丹高组分别予丹防胶囊(0.054 g/100g、0.216 g/100g、0.432 g/100g)灌胃,阳性对照组予0.054 g/100g复方鳖甲软肝片灌胃,模型组与正常组予等量生理盐水灌胃,1次/d,共12周。第12周麻醉处死大鼠,行HE染色观察肝组织病理学改变,碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组织化学法、Western Blot、Q-PCR检测肝组织Wnt1、β-catenin、DKK1表达水平。结果:1.动物一般情况:整个实验过程中各组大鼠一般状态良好,毛发光泽。实验第1周,因灌胃操作失误,丹低组和丹中组各死亡一只;实验第5周,模型组一只大鼠因肺部有出血灶死亡,剩余组别未出现大鼠死亡现象。2.肝组织病理学改变:模型组大鼠肝纤维化最严重,出现肝组织实质广泛被破坏,肝细胞排列紊乱形成条索状向肝小叶延伸,分割并破坏肝小叶结构,甚至出现假小叶,提示造模成功。与正常组相比,模型组、丹低组及丹中组肝纤维化程度严重(F=53.55、42.95、39.45,均P0.05);与模型组相比,丹中组、丹高组肝纤维化减轻(F=39.45、18.80,均P0.05);丹低组与丹中组纤维化程度重于阳性对照组(F=42.95、39.45,均P0.05),而丹高组与阳性对照组相类似,差异无统计学意义(P0.05);丹防胶囊各剂量组比较,丹低组、丹中组及丹高组肝纤维化程度依次减轻,组间比较差异有统计学意义(均P0.05)。3.肝组织HYP含量:与正常组相比,模型组及丹低组HYP含量增多(t=-144.565、-28.806,均P0.05);与模型组相比,丹中组、丹高组HYP含量降低(t=92.253、165.217,均P0.05);与阳性对照组相比,丹低组及丹中组HYP含量上升(t=8.621、-6.874,P0.05),丹高组与其差异无统计学意义(P0.05);低组、丹中组及丹高组HYP含量依次减轻,组间比较差异有统计学意义(均P0.05)。4.肝组织免疫组化、western blot及Q-PCR结果:与正常组比较,模型组、丹低组及丹中组Wnt1、β-catenin表达增加(P0.05),DKK1表达下降(P0.05);与模型组比较,丹中组、丹高组Wnt1、β-catenin表达降低(P0.05),DKK1表达增高(P0.05);与阳性对照组相比,丹低组及丹中组Wnt1、β-catenin表达增多(P0.05),DKK1表达减少(P0.05),丹高组与阳性对照组间Wnt1、β-catenin、DKK1表达无统计学差异(P0.05);低组、丹中组及丹高组Wnt1、β-catenin基因及蛋白表达依次下降,DKK1基因及蛋白表达依次增高,组间比较差异有统计学意义(均P0.05)。结论:1.中、高剂量丹防胶囊对大鼠免疫性肝纤维化有干预作用,不同剂量丹防胶囊间存在量效关系,以高剂量组效果更佳;2.丹防胶囊可能通过上调肝组织DKK1表达,减少Wnt1、β-catenin表达,抑制Wnt/β-catenin通路的激活,从而发挥对大鼠免疫性肝纤维化的干预作用。
【学位单位】:贵州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2019
【中图分类】:R285.5
【部分图文】:

肝细胞,大鼠,齐性,计量资料


GAPDHF:TTCCAGTATGACTCTACCCAC128R:TCACCCCATTTGATGTTAGCG1.2.8 统计学处理 实验数据采用 SPSS 22.0 统计软件处理,计量资料采用mean± X 表示,连续型变量服从正态分布。比较多组结果采用单因素方差分析齐性方差时,两组间采用 LSD 检验;非齐性方差采用 Tamhane T2 分析;各组间肝纤维化分期结果比较采用 K-W 检验;P <0.05 为差异有统计学意义。2 结 果2.1 各组大鼠一般情况 实验过程中,各组大鼠一般状态良好,正常饮食,毛发光泽。实验第 1 周因灌胃操作失误,丹低组与丹中组各死亡 1 只;第 5 周模型组因肺部出现出血灶致 1 只大鼠死亡,剩余各组大鼠未出现死亡情况。2.2 肝组织病理学改变 正常组肝组织结构完整清晰,以中央静脉为中心,肝细胞呈放射状排列且相互间连接形成肝细胞条索,肝小叶及汇管区未见胶原纤维增生。与正常组相比,模型组可见广泛肝组织破坏,肝细胞排列紊乱,汇管区可见

蛋白表达,肝组织,免疫组化


免疫组化检测 Wnt1 定位于细胞质,肝组织正常时有少量表达甚至不表常组相比,模型组、丹低组和丹中组 Wnt1 表达增加(t= -35.967、-11.91,均 P<0.05);与模型组相比,丹低组 Wnt1 蛋白表达无统计学差异.05),丹中组及丹高组 Wnt1 表达下降(t=30.465、43.950,均 P<0.05性对照组相比,丹低组和丹中组 Wnt1 表达升高(t=-3.190、-0.641,均5),丹高组与阳性对照组无统计学差异(P>0.05);丹低组、丹中组 Wnt1 蛋白表达依次下降,组间比较差异有统计学意义(均 P<0.05)2-4-1。 免疫组化法检测各组大鼠肝组织 Wnt1、β-catenin、DKK1 蛋白的表达

蛋白表达,肝组织,免疫组化


图 2-4-2 肝组织β-catenin 蛋白表达(免疫组化,×400)Fig.2-4-2 Expression of β-catenin protein (immunohistochemistry, ×40免疫组化检测 DKK1 定位于细胞核,正常肝组织中大量表达。比正常组模型组、丹低组和丹中组 DKK1 表达下降(t=5.037、3.956、3.047,均5);与模型组相比,丹低组 DKK1 蛋白表达无统计学差异(P>0.05),及丹高组 DKK1 表达增高(t= -2.896、-5.333,均 P<0.05);与阳性对,丹低组和丹中组 DKK1 蛋白表达下降(t=3.503、1.894,均 P<0.05)组与阳性对照组无统计学差异(P>0.05);丹低组、丹中组及丹高组 D表达依次增高,组间比较差异有统计学意义(均 P<0.05),如图 2-4-3 Wnt1、β-catenin、DKK1 蛋白相对表达量如图 2-4-4。
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