益气通阳方对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化的影响及其机制研究

发布时间：2020-11-07 13:59

　　 目的:肾间质纤维化是慢性肾脏病发展到终末期肾病的共同途径和主要病理基础,目前的治疗措施在一定程度上具有抗肾纤维化的药理作用,但总体治疗效果并不十分理想,无法阻止其进展为终末期肾病。本研究旨在探讨益气通阳方对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化的影响及其机制。方法:实验动物采用健康雄性SD大鼠,制备单侧输尿管梗阻(UUO)模型,本实验分为两个部分进行:第一部分益气通阳方对UUO模型大鼠肾功能及结构的影响将SD大鼠按随机数字法分为四组,即假手术(Sham)组、模型(UUO)组、中药(UUO+H)组和西药(UUO+Y)组,每组10只。除Sham组外,其余各组大鼠进行UUO模型制备。术后UUO+Y组给予依那普利0.18 mg/mL灌胃,UUO+H组以益气通阳方浓缩液1.188 g/mL灌胃,Sham组和UUO组给予等量生理盐水灌胃,每日1次。14 d后心肌采血检测各组大鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,处死大鼠,取其肾组织行HE和Masson染色观察肾脏形态学变化及间质纤维化程度。第二部分益气通阳方延缓UUO模型大鼠肾间质纤维化的机制将第一部分实验得到的肾组织分为三个部分,一部分采用IHC法检测肾组织TGF-β1和FN的表达;剩下两个部分采用Western blot法以及RT-PCR法分别检测肾组织Smad7蛋白及其mRNA的表达。结果:1.血生化指标显示:与Sham组比较,UUO组血清SCr、BUN明显升高(P0.05);与UUO组比较,UUO+H组和UUO+Y组血清SCr、BUN明显下降(P0.05);UUO+H组和UUO+Y组相比,差异无统计学意义。2.肉眼观察大鼠梗阻侧肾脏:Sham组大鼠梗阻侧肾脏外观正常,有光泽呈红褐色,形态规则,质地柔韧;造模各组大鼠梗阻侧肾脏体积不同程度增大,形态不规整,肾皮质变薄,有肾积水。3.HE和Masson染色结果表明:Sham组大鼠肾组织形态正常,肾小球和肾小管大小形态正常,肾小管排列整齐致密,未见肾小管扩张,肾间质可见少量蓝色的胶原纤维;UUO组肾脏呈现肾小管萎缩和管腔扩张,同时肾间质水肿且出现大量炎性细胞浸润,肾间质和肾小管则有大量蓝色的胶原纤维沉积。UUO+H组和UUO+Y组梗阻侧肾脏炎性细胞浸润、肾小管扩张程度和间质胶原纤维沉积程度均较UUO组减轻。TIS显示,UUO组大鼠TIS显著高于Sham组(P0.05)。但与UUO组相比,UUO+H组和UUO+Y组TIS明显降低(P0.05),而UUO+H组和UUO+Y组差异没有统计学意义。4.IHC结果显示:正常肾脏组织中TGF-β1主要表达在肾小管上皮细胞中,肾小球中基本没有表达,而FN的表达主要位于肾小球系膜区。Sham组TGF-β1、FN表达较弱,着色浅淡;UUO组TGF-β1、FN的表达较Sham组明显增强,呈棕褐色颗粒样沉积,着色较深,两组间的灰度值差异具有统计学意义(P0.05);UUO+H与UUO+Y组的TGF-β1、FN表达强度介于Sham组和UUO组之间,与UUO组相比,中西药治疗均能降低TGF-β1、FN的表达(P0.05);但UUO+H与UUO+Y组两组间TGF-β1、FN表达的差异无统计学意义。5.Western blot结果显示:与Sham组相比,造模各组大鼠Smad7蛋白表达降低(P0.05);与UUO组相比,UUO+H组与UUO+Y组Smad7蛋白表达升高(P0.05)。6.RT-PCR结果显示:与Sham组相比,造模各组大鼠Smad7 mRNA表达降低(P0.05);与UUO组相比,UUO+H组与UUO+Y组Smad7 mRNA表达升高(P0.05)。结论:1.益气通阳方能够改善UUO大鼠肾功能;2.益气通阳方可以减轻大鼠肾脏病理损伤,减轻肾间质纤维化程度;3.益气通阳方能够下调FN的表达,减轻细胞外基质的堆积;4.益气通阳方可能通过上调Smad7蛋白的表达,抑制UUO大鼠肾组织TGF-β1的高表达,进而延缓肾间质纤维化的进展。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

山西医科大学硕士学位论文UO+H 组和 UUO+Y 组均能减轻 UUO 模型的间质纤维化程度。TIS 显示，UU鼠 TIS 显著高于 Sham 组（P < 0.05）。但与 UUO 组相比，UUO+H 组和 UUO TIS 明显降低（P < 0.05），而 UUO+H 组和 UUO+Y 组差异没有统计学意义。 1-1，图 1-1，1-2）表 1-1 各组大鼠血清 SCr、BUN 以及肾小管间质损伤评分的结果( x s)分组 n/只 SCr/μmol·L-1BUN/mmol·L-1TIS/分Sham 组 10 20.86±2.15 5.34±0.65 0.66±0.18UUO 组 10 45.30±4.82* 16.94±1.93* 5.82±0.68*UUO+H 组 10 31.76±2.74*#11.53±1.43*#3.78±0.41*#UUO+Y 组 10 30.18±4.60*#10.33±1.34*#3.71±0.20*#注：与 Sham 组比较，*P < 0.05；与 UUO 组比较,#P < 0.05

UUO+H 组 UUO+Y 组图 1-2 各组大鼠肾组织病理图（Masson 染色，×200 倍）3 讨 论本部分实验制备 UUO 模型，观察益气通阳方延缓 RIF 的疗效，本实验模献报道的 UUO 模型病变特征是基本一致的[26]。由生化结果可知，术后第 1UO+H 组和 UUO+Y 组血清 SCr、BUN 明显下降，提示 UUO+H 组和 UUO+功能均有所改善。病理结果显示，UUO 组肾脏呈现肾小管萎缩和管腔扩张间质水肿且出现大量炎性细胞浸润，肾间质和肾小管则有大量蓝色的胶原纤。提示 UUO 模型造模成功；UUO+H 组和 UUO+Y 组梗阻侧肾脏炎性细胞浸小管扩张程度和间质胶原纤维沉积程度均较 UUO 组减轻，提示 UUO+H 组UO+Y 组均能减轻 UUO 模型的间质纤维化程度。TIS 显示，UUO 组大鼠 T于 Sham 组；但与 UUO 组相比：UUO+H 组和 UUO+Y 组 TIS 明显降低。提

UUO+H 组 UUO+Y 组图 2-1 各组大鼠肾组织 TGF-β1 表达（×200 倍）图 2-2 各组大鼠肾组织 TGF-β1 免疫组化表达的平均灰度值注：与 Sham 组比较，*P < 0.05；与 UUO 组比较，#P < 0.052.2 大鼠肾组织 FN 的表达
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本文编号：2874040