超高效液相色谱-串联质谱法检测大鼠血浆中表小檗碱及其药动学研究

发布时间：2020-11-08 19:13

　　 目的建立一种快速灵敏的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定方法检测大鼠血浆中表小檗碱,研究了静脉和口服给药后表小檗碱的药代动力学。方法色谱分离采用UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.4 ml/min。地西泮为内标,乙腈沉淀蛋白法处理大鼠血浆样本,ESI正离子检测,MRM模式,表小檗碱m/z 336.0→320.0和内标m/z 285.1→193.3,定量分析。SD大鼠18只,随机分为3组,第一组舌下静脉给药1.0 mg/kg,第二组舌下静脉给药4.0 mg/kg,最后一组口服给药10 mg/kg。结果浓度区间1 ng/ml～4 000 ng/ml,有良好线性(r 0.995),定量下限为1 ng/ml。准确度在97.5%～106.4%,精密度(RSD)15%,回收率≥91.8%,基质效应在88.3%～91.5%。结论建立的UPLC-MS/MS检测方法快速灵敏,可用于表小檗碱大鼠药代动力学研究,计算的口服绝对生物利用度为5.9%。
【部分图文】：

血浆中无内源性物质对表小檗碱检测有干扰。图1显示空白血浆添加表小檗碱及内标的典型UPLC-MS/MS谱图。表小檗碱的出峰时间为1.76 min，内标出峰时间为2.25 min，两者分离较好，但是保留时间也很接近，符合内标选择的原理。每个样品只需要采集4 min，大约1 d可以检测300个样品，可以比较高的通量去分析样品，比常规的HPLC或LC-MS效率要高很多。标准曲线(1 ng/ml～4 000 ng/ml)的方程式:y=0.034 9x+0.089 1,r=0.999 4，加权因子(1/x)。其中y为表小檗碱与内标物的峰面积比值，x为血浆中表小檗碱浓度。表小檗碱定量下限为1 ng/ml，检出限为0.3 ng/ml，而这个灵敏度可以满足表小檗碱药动学的给药剂量不是很高，口服(10 mg/kg)和静脉(1 mg/kg和4 mg/kg)的血药浓度检测要求，最终一个点24 h的口服浓度也只有3.4 ng/ml。比传统的HPLC高出较多，而且样品处理也方便，无需浓缩吹干等繁琐过程。

大鼠口服(10 mg/kg)和静脉(1 mg/kg和4 mg/kg)表小檗碱后所得药物浓度-时间曲线见图2。药代动力学参数非房室模型拟合，见表2。结果表明，表小檗碱代谢较快，绝对生物利用率为5.9%，说明表小檗碱在大鼠体内的生物利用不是很高，临床应用可以通过促进表小檗碱在水中的溶解度可以提高生物利用度，比如将生物碱加盐酸成盐。本研究中静脉给药的1 mg/kg与4 mg/kg，虽然给药剂量不一样，但其AUC(0-t)分别为(628.9±165.9)ng/(ml·h),(2 421.9±586.6)ng/(ml·h)，与剂量基本呈正比关系。大鼠的半衰期在(8.4±3.2)h与(10.3±2.2)h，代谢也不是很快，所以本实验最后一个采血点在24 h，从图2可以看出最后一个时间点浓度已经很低。3 结论
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本文编号：2875211