响应面法优化苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量

发布时间：2020-11-09 12:03

　　 对苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量进行方法学验证,采用单因素实验考察苯酚用量、硫酸用量、水浴温度、显色时间等对泡桐花多糖含量测定的影响,采用响应面法对苯酚-硫酸法的测定条件进行优化,并在最佳条件下对泡桐花多糖含量进行测定。结果表明,葡萄糖浓度在0.01～0.08 mg·mL~(-1)范围内与吸光度线性关系良好(R=0.9993),泡桐花多糖加标回收率在98.94%～101.93%之间,RSD在1.0%～1.4%之间。苯酚-硫酸法测定泡桐花多糖含量的最佳条件为:苯酚用量0.4 mL、硫酸用量5.0 mL、显色时间25 min,在此条件下,泡桐花多糖平均含量为2.65%,RSD为2.95%。该方法稳定可靠、精密度好、准确度高,可用于泡桐花多糖的含量测定。
【部分图文】：

分别量取供试溶液、0.04 mg·mL-1葡萄糖标准溶液和蒸馏水各2.0 mL,置于具塞试管中,按照苯酚-硫酸法显色条件显色,迅速冰浴冷却,用紫外可见分光光度计在400～600 nm波长范围内扫描,测定最大吸收波长,结果如图1所示。从图1可知,泡桐花多糖和葡萄糖标准品最大吸收波长均为490 nm。因此,选择490 nm作为检测波长。

精密量取1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL的0.1 mg·mL-1葡萄糖标准溶液,分别加蒸馏水稀释至10 mL,摇匀。精密量取2.0 mL供试溶液置于具塞试管中,按照苯酚-硫酸法显色条件显色,取出,迅速冰浴冷却;另取2.0 mL蒸馏水同法操作,空白调零,测定溶液在490 nm处吸光度,以葡萄糖浓度(x,mg·mL-1)为横坐标、吸光度(y)为纵坐标绘制标准曲线(图2),拟合得到线性方程y=11.202x+0.0145,R=0.9993。表明,葡萄糖浓度在0.01～0.08 mg·mL-1范围内与吸光度线性关系良好。2.2.2 重复性

2.3.1 苯酚用量对吸光度的影响(图3)从图3可知,苯酚用量在0.2～1.0 mL范围内时,吸光度先增大后减小,在苯酚用量为0.4 mL时,吸光度最大。故最佳苯酚用量为0.4 mL左右。
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本文编号：2876404