真武汤对正常状态和慢性心力衰竭疾病状态大鼠细胞色素P450酶活性及mRNA表达的影响

发布时间：2020-11-09 13:19

　　 慢性心力衰竭是大多心脏性疾病终末期,临床上多以改善患者生活质量为治疗目的。目前临床上治疗慢性心力衰竭多以西药治疗为主,但是存在不良反应且只能改变生活质量不能根治。中药复方具有多成分、多靶点、多效应整合作用的特点,且副作用少。真武汤作为中药复方的代表,临床用药经验表明真武汤对慢性心力衰竭有显著疗效。中药对不同状态个体大多具有双向调节作用,中药对正常状态和疾病状态所发挥的作用和功能可能是不同的,因此对于P450酶的表达和活性的调控也可能完全不同。鉴于真武汤在临床治疗慢性心衰时常常需要联合用药,因此研究真武汤对正常大鼠和慢性心衰疾病状态的大鼠P450酶活性的影响具有重要的临床意义。目的:本研究探讨真武汤对正常状态和慢性心力衰竭(Chonic heart failure,CHF)疾病状态大鼠体内7种肝细胞色素P450(CYP450)亚型酶活性和m RNA表达的影响,为慢性心力衰竭患者临床合理用药提供一定的理论指导,并为真武汤的进一步开发提供参考。方法:(1)建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠体内7种CYP450酶(CYP1A2、CYP2B1、CYP2C6、CYP2C7、CYP2C11、CYP2D2、CYP3A1)对应探针底物(非那西丁、安非他酮、双氯芬酸、阿莫地喹、奥美拉唑、右美沙芬、咪达唑仑)的生物样品分析方法。(2)54只雄性SD大鼠分为正常状态大鼠(n=24)和慢性心力衰竭状态大鼠(n=30),正常状态大鼠均分为4组:生理盐水组、真武汤低、中、高剂量(2.1875,4.375,8.75g/kg)组;与此同时,通过结扎左冠状动脉左前降支复制CHF模型,并均分为5组:假手术组、模型组、真武汤低、中、高剂量(2.1875,4.375,8.75g/kg)组。所有大鼠均连续灌胃4周,并于最后一天灌胃后尾静脉注射7种探针药物混合物,在预设的时间点眼眦取血,经UPLC-MS/MS测定各组大鼠血浆中7种探针底物的浓度,通过DAS 2.0及SPSS 23.0软件处理探针底物的主要药代动力学参数,以此评价真武汤对各组大鼠CYP450s酶活性的影响;此外,检测真武汤对CHF大鼠血流动力学主要参数,通过相关性分析药代动力学主要参数-血流动力学主要参数及其变化的相关系数来评价CYP450s酶活性和慢性心力衰竭之间的关系。(3)与此同时,27只相同批次的SD大鼠分为正常状态(n=12)和疾病状态(n=15),造模和分组方法与上述酶活性测定实验相同,同样地,在连续灌胃4周后,采用RT-q PCR技术测定各组大鼠肝脏中7种CYP450亚型酶m RNA表达。结果:(1)所建立的UPLC-MS/MS分析方法能够同时测定大鼠血浆样品7种探针底物非那西丁、安非他酮、双氯芬酸、阿莫地喹、奥美拉唑、右美沙芬、咪达唑仑。(2)在正常状态大鼠中,真武汤可以诱导CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1酶活性,对CYP1A2、CYP2B1、CYP2C7、CYP2D2酶活性无影响;CHF疾病状态下,大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1活性显著性降低,低、中、高剂量的真武汤可以不同程度逆转CHF疾病状态下各CYP450亚型酶活性变化,与此同时,非那西丁、双氯酚酸、奥美拉唑和咪达唑仑AUC及其变化与LVEDP呈现显著性正相关(P0.05)。(3)在正常状态大鼠中,真武汤给药组可以不同程度上调CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1 m RNA表达水平,对CYP1A2、CYP2B1、CYP2C7、CYP2D2 m RNA表达水平无影响;CHF疾病状态下,大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2C6、CYP2C11、CYP3A1 m RNA表达水平显著性降低,而CYP2C7、CYP2D2 m RNA表达无显著变化,灌胃真武汤后,CYP1A2、CYP2C6、CYP2C11和CYP3A1 m RNA的表达量得到不同程度的逆转。CYP1A2、CYP2C6、CYP2C11和CYP3A1 m RNA表达与血流动力学主要参数LVEDP呈现显著性负相关(P0.05)。结论:CHF疾病状态可以改变大鼠体内5种CYP450酶活性和m RNA的表达,真武汤可以相应地逆转其中4种CYP450酶的变化,使得CYP450酶趋向正常,同时通过相关性分析得出酶活性与血流动力学之间存在一定的相关性,以此改善慢性心力衰竭病理状态。提示CYP450酶变化在慢性心衰发生发展中具有参考意义,在慢性心力衰竭治疗时,应充分考虑这种由代谢酶所介导的潜在药物-药物相互作用,本研究为临床合理安全用药及真武汤进一步开发提供了理论指导。
【学位单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1-1 探针药物及内标 UPLC-MS/MS 色谱图 空白血浆色谱图；B 探针底物及内标溶液色谱图；C 空白血浆加探针底物及内标溶液色；D 大鼠尾静脉注射探针底物后探针底物及内标色谱图。（1.非那西丁、2.安非他酮、3.双芬酸、4. 阿莫地喹、5. 奥美拉唑、6.右美沙芬、7.咪达唑仑、8.格列本脲）Fig 3-1 UPLC-MS/MS chromatograms of probes and the internal standard in SD rats plasma.(1.phenacetin; 2.bupropion; 3.diclofenac; 4. amodiaquine; 5. omeprazole; 6.dextromethorphan7.midazolam; 8.glibenclamide. )14

LC-4016 型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；XW-80A 微型涡旋混合器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；-80℃/-20℃冰箱（日本 Sanyo/合肥美菱公司）。1.2 材料与试剂格列苯脲（纯度≧98%，批号：10238-21-8）：上海源叶生物科技有限公司；色谱级甲醇、乙腈：瑞典 OCEANPAK 公司；肝素钠注射液：上海信可有限公司。1.3 实验动物同第一章“1.3”2 实验方法与结果真武汤对慢性心力衰竭状态下大鼠 CYP450 酶活性影响实验方案，见图 2-1。

图 2-2 正常状态大鼠体内非那西丁的平均血药浓度-时间曲线（ng/mL）Fig 2-2 The mean concentration-time curve of phenacetin in normal rat plasma (ng/mL)
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本文编号：2876489