“鲜人参膏”质量分析、标准制定及其对药源性肝肾损伤的保护作用
发布时间：2020-11-10 02:53
人参(Panax ginseng)为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根茎,收载于历版《中国药典》,最早的药物学专著《神农本草经》将人参列为上品,四环三萜达玛烷型人参皂苷为其主要活性成分,具有显著的抗肿瘤,抗炎症,抗肥胖等多种功效。为了综合开发人参的药用价值,本实验旨对一种人参加工食品“鲜人参膏”(Fresh Ginseng Paste,FGP)的制作工艺进行了探讨并对FGP成分中多种人参皂苷进行含量测定,制定了FGP的质量标准草案。文章通过构建对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠肝损伤模型,和顺铂(CDDP)致急性肾损伤动物模型,从细胞凋亡及氧化应激等方面进一步研究了FGP对肝、肾的保护活性,同时阐释了可能的分子机制,对深入开发人参加工产品的药用价值具有深远意义。1.FGP成分分析及质量标准制定。取FGP样品通过HPLC进行分析,并进行方法学验证。显示出FGP中人参总皂苷的含量约为23mg/g,FGP中含有14种人参皂苷,分别为1.Rg1、2.Re、3.Rb1、4.Rc、5.Rb2、6.Rd、7.Rg6、8.F4、9.Rk3、10.Rh4、11.(S)-Rg3、12.(R)-Rg3、13.Rk1、14.Rg5,其中含量较高的为(S,R)Rg3、Rg5和Rk1等次级皂苷组分,经方法学考察14种人参皂苷的标准曲线及其重复率,精密度和稳定性RSD值在0.39-0.54%,14种人参皂苷对照品加样回收率集中在98.7-99.3%之间,RSD值1.85%,已充分证明此方法可以用于FGP中人参皂苷含量测定,且稳定性较为良好。并通对FGP的原料、辅料,使用水及环境进行标准定制规范其生产质量;2.FGP对对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠肝损伤的缓解作用。将32只小鼠随机分为:空白组、模型组、低剂量及高剂量给药组。实验取用血清和小鼠肝组织,分别用在检测各项生理指标及组织病理学染色。研究表明:FGP可调节小鼠的器官指数并改善血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平。还可改善肝组织中谷胱甘肽转移酶(GSH)的耗竭和丙二醛(MDA)水平的异常变化;3.FGP对顺铂(CDDP)致小鼠急性肾损伤的缓解作用,研究取用小鼠血清测定其生理指标同时通过HE、TUNEL、Hoechst 33258和免疫组织化学染色法观察肾脏组织病理学变化,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞凋亡情况。结果表明:小鼠血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)和丙二醛(MDA)水平有明显降低,肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)显著升高;组织糖原沉积减少,肾小管上皮细胞凋亡明显减少,同时改善了肾组织坏死和凋亡程度。Western blot分析结果表明,FGP能明显抑制Bax和cleaved caspase-3等的过表达和降低Bcl-2的水平。综上所述,本研究结果清晰地表明,FGP中富含多种人参皂苷,且次级皂苷含量较高。FGP能够通过缓解氧化应激损伤和抗凋亡作用来减少APAP引起的小鼠急性肝损伤。同时对CDDP诱导小鼠体内的氧化应激和细胞凋亡具有很好的保护活性,其可能的分子机制是通过抑制了体内Bax/Bcl-2以及caspase-3等一系列信号通路的激活,继而进一步缓解了CDDP诱导的急性肾损伤。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：
第二篇 研究内容第一章 “鲜人参膏”的制备、成分分析及质量标准研究“鲜人参膏”（以下简称“FGP”）是以鲜人参为主要原料，并配伍具有补中益气、养神、调和脾胃功能等作用的大枣，在不添加任何化学成分的前提下，对其进行组方配最大限度保留鲜人参特有香气及天然成分。通过大量的实验研究发现，采用参须水不仅可以作为良好的提取溶剂，同时创新性发用参须水作为溶剂，在提取和保留天然原生皂苷的同时，最大限度的增加稀有皂苷的，可有效增强鲜人参膏的生物活性，充分发挥鲜人参和大枣的药效。本部分主要进行了FGP的制备研究，分析了其中主要的药效成分，同时制定了FGP的标准，为人参及加工品的质量控制提供参考依据。
(mg/kg) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)Normal - 33.84±2.38 49.74±2.65 4.96±0.47 13.92±1.03APAP 20 31.57±1.96*50.90±1.36*2.39±0.15*16.00±0.77*APAP+FGP400 29.79±2.28 53.71±0.97#2.56±0.43 14.52±0.95#800 29.37±2.44 53.72±2.64#2.89±0.27#14.81±0.51#注：** p < 0.01，* p < 0.05，与空白组相比；##p < 0.01，#p < 0.05，与模型组相比Note: ** p < 0.01, * p < 0.05, compared with the normal group; # p < 0.05, compared with the model group.2.2 FGP 对小鼠血清指标的影响如图 2.1 所示，在对小鼠给予 APAP 250mg kg-1后导致了模型组血清中 ALT 和 AST升高（p＜0.01），而在低剂量组（400 mg·kg-1）和高剂量组（800 mg·kg-1）给药后可以剂量依赖性方式明显降低 APAP 导致的这 2 种转氨酶的增加。初步说明 FGP 对 APAP肝损伤具有一定的保护作用。
图2.2. FGP对氧化指标（GSH,MDA）的影响（ x ±s ，n=8,）Figure 2.2. Effect of FGP on Oxidation Index (GSH, MDA)（ x ±s ，n=8,）2.2.4 FGP 对小鼠肝组织病理变化影响如图 2.3 所示，空白组的肝组织未显示出明显变化，而在模型组中的组织中可明显观察到中央静脉周围细胞坏死变性和炎性细胞浸润。显而易见的是，用 FGP 低，高剂给药干预后的小鼠肝脏细胞有着明显改善，并清晰体现出剂量依赖性。在图 2.4 中组织理学变化的坏死评分中，也清楚地表明 FGP 进行干预后可以缓解 APAP 所致肝脏病理变化。0×010Normal APAPAPAP+FGP400mg/kg 800mg/kg&HE
【相似文献】
本文编号：2877363
【学位单位】：吉林农业大学
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【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：
第二篇 研究内容第一章 “鲜人参膏”的制备、成分分析及质量标准研究“鲜人参膏”（以下简称“FGP”）是以鲜人参为主要原料，并配伍具有补中益气、养神、调和脾胃功能等作用的大枣，在不添加任何化学成分的前提下，对其进行组方配最大限度保留鲜人参特有香气及天然成分。通过大量的实验研究发现，采用参须水不仅可以作为良好的提取溶剂，同时创新性发用参须水作为溶剂，在提取和保留天然原生皂苷的同时，最大限度的增加稀有皂苷的，可有效增强鲜人参膏的生物活性，充分发挥鲜人参和大枣的药效。本部分主要进行了FGP的制备研究，分析了其中主要的药效成分，同时制定了FGP的标准，为人参及加工品的质量控制提供参考依据。
(mg/kg) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)Normal - 33.84±2.38 49.74±2.65 4.96±0.47 13.92±1.03APAP 20 31.57±1.96*50.90±1.36*2.39±0.15*16.00±0.77*APAP+FGP400 29.79±2.28 53.71±0.97#2.56±0.43 14.52±0.95#800 29.37±2.44 53.72±2.64#2.89±0.27#14.81±0.51#注：** p < 0.01，* p < 0.05，与空白组相比；##p < 0.01，#p < 0.05，与模型组相比Note: ** p < 0.01, * p < 0.05, compared with the normal group; # p < 0.05, compared with the model group.2.2 FGP 对小鼠血清指标的影响如图 2.1 所示，在对小鼠给予 APAP 250mg kg-1后导致了模型组血清中 ALT 和 AST升高（p＜0.01），而在低剂量组（400 mg·kg-1）和高剂量组（800 mg·kg-1）给药后可以剂量依赖性方式明显降低 APAP 导致的这 2 种转氨酶的增加。初步说明 FGP 对 APAP肝损伤具有一定的保护作用。
图2.2. FGP对氧化指标（GSH,MDA）的影响（ x ±s ，n=8,）Figure 2.2. Effect of FGP on Oxidation Index (GSH, MDA)（ x ±s ，n=8,）2.2.4 FGP 对小鼠肝组织病理变化影响如图 2.3 所示，空白组的肝组织未显示出明显变化，而在模型组中的组织中可明显观察到中央静脉周围细胞坏死变性和炎性细胞浸润。显而易见的是，用 FGP 低，高剂给药干预后的小鼠肝脏细胞有着明显改善，并清晰体现出剂量依赖性。在图 2.4 中组织理学变化的坏死评分中，也清楚地表明 FGP 进行干预后可以缓解 APAP 所致肝脏病理变化。0×010Normal APAPAPAP+FGP400mg/kg 800mg/kg&HE
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本文编号：2877363
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