黄芪注射液作用于肺癌A549细胞的初步研究

发布时间：2020-11-10 09:06

　　 目的:应用黄芪注射液作用于肿瘤细胞,观察其增殖情况,以选取实验细胞。方法:通过CCK-8法检测黄芪注射液作用肿瘤细胞后24h、48h和72h的生长抑制率。结果:计算各肿瘤细胞被黄芪注射液处理后的抑制率,发现药物处理肺癌A549细胞后,细胞在低药物浓度时被促进生长,而在高药物浓度时生长被抑制,且各时间点具有良好的一致性。对于肝癌HepG2细胞、肝癌Hep3B细胞和神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞而言,被黄芪注射液长时间(超过24h)处理后,细胞增殖明显受到抑制,且少见有促生长效应。但在作用24h时,大多数药物浓度组均显现出明显的细胞促生长效应,与其他时间点展现的效应不一致。结论:从黄芪注射液作用肿瘤细胞后所展现出来的效应一致方面考虑,选择肺癌A549细胞作为本次后续实验的实验对象。目的:利用黄芪注射液处理肺癌A549细胞以探索其对该细胞生物学行为的影响。方法:通过显微镜观察黄芪注射液作用细胞后的细胞形态变化;利用前期实验得到的细胞抑制率,通过改良寇氏法计算黄芪注射液作用A549细胞的半抑制浓度(IC50);通过划痕修复实验和Transwell迁移实验观察细胞水平和垂直迁移能力的变化;通过细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化;通过流式细胞术检测细胞凋亡观察细胞凋亡的变化;结果:A549细胞受到高浓度黄芪注射液作用后,出现细胞皱缩逐渐脱离贴壁;计算IC50得药物作用后24h,48h,72h的IC50分别为:776mg/ml,851mg/ml,616mg/ml;在划痕修复实验中,对照组、100mg/ml和200mg/ml浓度组中划痕愈合明显,但在400mg/ml、600mg/ml和800mg/ml组中,由于细胞脱离贴壁较多,无法进行划痕宽度测量;Transwell小室迁移和侵袭实验中,100mg/ml组中的细胞穿膜数量较对照组多,但随着浓度的增加,细胞数量逐渐减少;在细胞凋亡实验中,随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增多。结论:黄芪注射液在低浓度时有促进肺癌A549细胞生长的效应,随着浓度的增加,生长抑制效应才逐渐显现。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1 细胞铺 96 孔板 意图Figure 1 Schematic diagram of a 96-well cell plate对数生长期，汇合度约 70%～80%的细胞，消化重悬计数后将为 2×104/ml（人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞取细胞密度），每孔 100μl 按下图示接种至 96 孔培养板中，边缘孔均填冲液。铺好的 96 孔板置于 37℃，5%CO2恒温孵育箱中，第二天加药意：细胞悬液混匀后，由于重力作用，细胞仍会沉降，因此，需要反复多次混匀，确保各个孔的细胞密度是一致的。 加药黄芪注射液原液，根据细胞种类的不同，使用合适的培养基为 100mg/ml、200mg/ml、400mg/ml、600mg/ml 和 800mg/ml

图 2 96 孔板中细胞分组及加药 意图Figure 2 Schematic diagram of cell grouping and dosing in 96-well pla药完成后放入 37℃，5%CO2培养箱，常规培养。 加 CCK-8 检测加药后的 24h、48h、72h 分别加入 CCK-8 试剂，10μl/孔，6h（细胞种类的不同与 CCK-8 试剂反应所需的时间也不同），酶标仪测定 OD450值，试验重复 3 次，取平均值。不加细胞，只加了培养液的空白对照孔调为零，各药物浓度各药物实验组的抑制率作为纵坐标，绘制各时间点的生长趋胞增殖抑制率=[（对照-实验）/（对照-空白）]×100%。计学方法

（mg/ml）tragalus injections（mg/ml）24h 48h 72h0（对照） 0.342±0.023 0.342±0.023 0.664±0.0100 0.389±0.034a0.389±0.034a0.835±0.0200 0.369±0.025a0.369±0.025a0.782±0.0400 0.352±0.033 0.352±0.033 0.551±0.0600 0.325±0.027 0.325±0.027 0.436±0.0800 0.290±0.027a0.290±0.027a0.378±0.0a 表示与对照组相比有统计学差异（p<0.05）用统计软件分析得出：作用 24 和 48h 时，黄芪注射液 100、/ml 浓度组作用细胞效果与对照组相比差异有统计学意义；作芪注射液各组作用细胞效果与对照组相比差异均有统计学意用抑制率计算公式计算得出各浓度组及各作用时间的抑制率成折线图，如图 3：
【参考文献】

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1 杨婷;胡显良;王珊;;神经母细胞瘤治疗进展[J];中国小儿血液与肿瘤杂志;2015年06期

2 庞丹;;黄芪成分和药理活性研究进展[J];黑龙江科技信息;2015年17期

3 祝普利;尹超;冯建龙;;原发性肝癌综合治疗进展[J];临床肝胆病杂志;2015年06期

4 李蓉;章运生;谭小武;;黄芪多糖联合顺铂对人肺癌A549细胞增殖抑制作用及其机制研究[J];现代医药卫生;2015年04期

5 Min Ni;Xiao-Lei Shi;Zhi-Gang Qu;Hong Jiang;Zi-Qian Chen;Jun Hu;;Epithelial mesenchymal transition of non-small-cell lung cancer cells A549 induced by SPHK1[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年02期

6 周承;;中药黄芪药理作用及临床应用研究[J];亚太传统医药;2014年22期

7 李金男;王威亚;梁冬妮;张文燕;赵莎;李甘地;徐畅;;INSS和INRGSS分期评估神经母细胞瘤预后的临床价值[J];四川大学学报(医学版);2014年04期

8 付艳;邢卉春;;原发性肝癌的流行状况及危险因素分析[J];中国肝脏病杂志(电子版);2014年02期

9 杜虹韦;张爱华;韩德强;张妍妍;姚琳;;黄芪黄酮有效部位的抗肿瘤作用研究[J];黑龙江中医药;2014年03期

10 何敬琦;张思雅;李明;杨栋;李术;;效应面法优化CHO细胞培养基中几种主要成分的含量[J];现代生物医学进展;2014年09期

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本文编号：2877756