联合用药对热毒宁注射液体内过程影响研究

发布时间：2020-11-14 11:15

　　 热毒宁注射液由金银花、青蒿和桅子三味中药组成,主要用于治疗外感风热所致流感、高热不退、咳嗽及上呼吸道感染等症。热毒宁注射液常与头孢呋辛钠联合治疗支原体肺炎和小儿支气管炎等疾病;与利巴韦林联合治疗儿童手足口病,且效果确切,疗程缩短。临床联用情况屡见不鲜,但对于联合用药后药物体内过程研究甚少。本文从药动学参数、分布、代谢和排泄方面,系统、全面地探讨热毒宁注射液与头孢呋辛钠、与利巴韦林联合用药对体内过程的影响。一、文献研究系统地综述了联合用药对药物代谢动力学过程影响的研究进展,为设计实验方案,研究热毒宁注射液联合用药体内过程提供理论基础。二、热毒宁注射液与头孢呋辛钠联合用药对体内过程影响研究(一)热毒宁注射液在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中代谢产物的鉴定建立超高效液相色谱-线性离子阱-静电轨道阱串联质谱联用方法(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对大鼠尾静脉注射热毒宁后血浆、胆汁、尿液和粪便中京尼平苷、京尼平苷酸、断氧化马钱子苷和绿原酸的代谢产物进行分析,推测出大鼠体内京尼平苷氧化、脱水、去甲氧基、水解、开环、半胱氨酸结合和苷元葡萄糖醛酸结合等14个代谢产物;京尼平苷酸脱水、开环、双键还原和半胱氨酸结合等9个代谢产物;断氧化马钱子苷水解、去甲氧基、羟基化和乙基化等6个代谢产物;绿原酸脱羧、水解、甲基化、乙酰化、半胱氨酰甘氨酸结合和谷胱甘肽结合等12个代谢产物。(二)与头孢呋辛钠联合用药对药动学过程影响1.单次联合用药对药动学过程影响为研究热毒宁注射液与头孢呋辛钠联合对药动学的影响,建立血浆样品中4种环烯醚萜苷类(京尼平苷、山栀苷、京尼平-1-β-龙胆双糖苷、断氧化马钱子苷)、3种有机酸类(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸)和头孢呋辛的含量测定UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS方法,同时在前期代谢产物鉴定的基础上,建立血浆中热毒宁注射液代谢物半定量方法。单次联合导致环烯醚萜苷类成分AUC(o-t)和Cmax降低。京尼平苷苷元开环代谢产物峰浓度增高,曲线下面积显著增加。京尼平苷半胱氨酸结合产物和氧化产物峰浓度略增加。断氧化马钱子苷羟基化乙基化结合产物和去甲氧基产物相对含量降低。有机酸类AUC(0-t)和Cmax显著增加,T1/2无明显变化。绿原酸甲基化产物和乙酰化产物相对含量降低。头孢呋辛AUC(0-t)降低,T1/2和Cmax无显著差异。2.多次联合用药对药动学过程影响采用己建立检测的方法,进一步研究热毒宁注射液与头孢呋辛钠联合用药5天后对药动学的影响。多次联合后,山栀苷、京尼平-1-β-龙胆双糖苷和断氧化马钱子苷的AUC(0-t)和Cmax显著下降,京尼平苷AUC(0-t)表现出下降的趋势,但无显著性差异。京尼平苷和断氧化马钱子苷的代谢产物,相对含量均降低,以葡萄糖醛酸化产物最显著。有机酸类Cmax、AUC(0-t)降低,T1/2无显著变化,绿原酸甲基化产物和乙酰化产物血浆中相对含量减少。头孢呋辛AUC(0-t)、Cmax、T1/2和CL均无明显改变。(三)与头孢呋辛钠联合用药对组织分布的影响为研究热毒宁注射液与头孢呋辛钠联用对组织分布的影响,建立小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中4种环烯醚萜苷类、3种有机酸类和头孢呋辛含量测定UPLC-MS/MS方法。注射热毒宁注射液组织中,各成分以肝脏和肾脏分布为主,10 min分布最多,随后逐渐减少。小鼠注射头孢呋辛钠,各组织含量依次为肾脏肝脏心脏肺脏脾脏,10 min时含量最高,随后降低。联合后环烯醚萜苷和有机酸类成分在肾脏内分布最多,分布量逐渐升高,于30 min达到峰值后逐渐降低。各成分在不同组织中分布量同单独给药比减少。联合后头孢呋辛仍以肾脏和肝脏分布为主,30 min达到峰值,分布量较单独使用减少。(四)与头孢呋辛钠联合用药对代谢的影响采用荧光定量PCR技术对联合用药后大鼠CYP同工酶(CYP450)mRNA表达进行检测,从基因表达层面研究联合用药对药物代谢亚型酶的影响。热毒宁注射液对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19在mRNA表达上具有诱导作用,对CYP2A6有抑制作用,头孢呋辛对这七种代谢酶作用不明显。联合用药后,表现为对CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19和CYP2E1有诱导作用,且较单独使用热毒宁注射液诱导作用增强,对CYP2A6有抑制作用,但抑制作用减弱。(五)与头孢呋辛钠联合用药对排泄的影响为研究热毒宁注射液与头孢呋辛钠联用对排泄的影响,建立大鼠尿液和胆汁中4种环烯醚萜苷类、3种有机酸类和头孢呋辛含量测定UPLC-MS/MS方法。热毒宁注射液中断氧化马钱子苷以胆汁排泄为主,其余成分以尿液排泄为主,尿液排泄均集中在0-4h,胆汁集中在0-2h;头孢呋辛以尿液排泄为主。联合用后,尿液中京尼平-1-β-龙胆双糖苷和山栀苷尿液累计排泄增加,其他成分降低;头孢呋辛在尿液中排泄量增加。所测成分在胆汁中的排泄均降低。三、热毒宁注射液与利巴韦林联合用药对体内过程影响研究(一)与利巴韦林联合用药对药物动力学过程的影响1.单次联合用药对药动学过程的影响单次联合,环烯醚萜苷和有机酸AUC(0-t)和Cmax显著降低。除京尼平苷半胱氨酸结合产物和绿原酸甲基化产物峰值降低,其余产物峰值增加。京尼平苷元去甲氧基产物和绿原酸甲基化产物Tmax延迟,并出现双峰。利巴韦林AUC(0-t)和Cmax较单独使用显著增加,T1/2延长近一倍。2.多次联合用药对药动学过程的影响多次联合,环烯醚萜苷和有机酸类成分的Cmax明显降低。京尼平苷半胱氨酸结合物、京尼平苷苷元氧化产物;断氧化马钱子苷的苷元水解产物、羟基化乙基化结合产物和去甲氧基产物;绿原酸甲基化产物相对含量均降低,代谢减缓。同时,京尼平苷半胱氨酸结合物、京尼平苷脱水产物和去甲氧基产物;断氧化马钱子苷羟基化乙基化结合产物和苷元水解产物达峰时间延长。利巴韦林的Cmax、AUC(0-t)和T1/2显著升高。(二)与利巴韦林联合用药对组织分布的影响注射热毒宁注射液组织中,各成分以肝脏和肾脏分布为主,10min分布最多,随后逐渐减少。注射利巴韦林组织中,分布量顺序为肝脏脾脏肾脏肺脏心脏,肝脏达峰时间较其他脏器有迟滞性。联合用药后,环烯醚萜苷在心脏中分布增加,有机酸类在肾脏中分布量增加;利巴韦林分布量增加,肝脏仍分布最多,达峰时间较单独给药更具迟滞性。(三)与利巴韦林联合用药对代谢的影响热毒宁注射液对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19在mRNA表达上具有诱导作用,对CYP2A6有抑制作用。利巴韦林对这七种代谢酶基因表达无显著影响。联合给药后,抑制大鼠CYP1A2、CYP2A6和CYP2B6的基因表达,对其他基因无影响。(四)与利巴韦林联合用药对排泄的影响环烯醚萜苷和有机酸类成分以尿液、胆汁排泄,利巴韦林在尿液中累积排泄率高于胆汁。联合用药后,京尼平苷在尿液中累积排泄量减少,其他成分累积排泄量增加。热毒宁注射液在胆汁中排泄呈现下降趋势,以京尼平苷累积排泄量下降最为显著。与单独用药相比,利巴韦林在尿液和胆汁排泄量减少。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

ａ：京尼平苷；ｂ：京尼平苷酸；ｃ：断氧化马钱子苷；ｄ：绿原酸??图２－１－２测定成分体内代谢途径??Ｆｉｇ．２－１－２?Ｔｈｅ?ｐｏｓｓｉｂｌｅ?ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ?（ａ）；?ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃ?ａｃｉｄ?（ｂ）；?ｓｅｃｏｘｙｌｏｇａｉｎ?（ｃ）；??ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ?ａｃｉｄ?（ｄ）?ｉｎ?ｒａｔｓ??４讨论??桅子药材中主要活性成分为环烯醚萜类，代表性成分为含量达３．０６％？４．１２％的京尼平??昔，而其苷元京尼平的含量却只有０．００５％？０．０１％＿。本文的研宄结果显示，热毒宁注射??液中京尼平的含量低于检测限，但在大鼠注射给药热毒宁注射液后的血浆与尿液中却检测??到京尼平，由此可确定此注射液中京尼平苷代谢为其苷元京尼平的这一代谢途径，并可进??行共存成分对这一代谢的影响研宄。有文献分别研究京尼平苷在人体和大鼠中的代谢途径，??发现羟基化是人类特有的代谢途径ｔ１３，１４］，在本研宄同样未在大鼠体内检测到京尼平苷羟基??化产物。??大鼠静脉注射绿原酸后，胆汁中存在大量其与氨基酸、谷胱甘肽结合的产物，这是由??于绿原酸的烯酮双键具有很强的亲电性，可与谷胱甘肽结合［１５，１６］。热毒宁注射液中的绿原??酸在静脉注射给药后亦有如此的代谢途径。但口服给药却未见检测到其与氨基酸、谷胱甘??

图２－２－２大鼠血浆中各成分专属性考察（Ａ）空白血浆（Ｂ）样品血浆??Ｆｉｇ．?２－２－２?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｉｏｎ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ?ｏｆ?ｅｉｇｈｔ?ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ?ａｎｄ?ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ?（ＩＳ）：?（Ａ）?ｂｌａｎｋ?ｐｌａｓｍａ??（Ｂ）?ｂｌａｎｋ?ｐｌａｓｍａ?ｓｐｉｋｅｄ?ｗｉｔｈ?ｅｉｇｈｔ?ａｎａｌｙｔｅｓ?ａｎｄ?ＩＳ??线性和定量限线性方程及定量限的结果见表２－２－１。结果表明，该方法具有足够的定??量灵敏度并在实验所需范围内，符合线性关系，满足定量要求。??表２－２－１大鼠血浆中８种成分线性方程、定量限检测限考察结果??Ｔａｂｌｅ?２－２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ?ｅｑｕａｔｉｏｎｓ，?ｌｉｎｅａｒ?ｒａｎｇｅｓ，?ａｎｄ?ＬＬＯＱｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｉｇｈｔ?ａｎａｌｙｔｅｓ．??Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ?ＬＬＯＱ?Ｒａｎｇｅ??Ａｎａｌｙｔｅ?Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅｓ??ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ?（ｎｇ／ｍＬ）?（ｎｇ／ｍＬ）??Ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ?ｙ?＝?０．０１７１ｘ?＋?０．００６２?０．９９９４?２５．４?４０．５６－６１９０４??Ｓｈａｎｚｈｉｓｉｄｅ?ｙ?－?０．０６９８ｘ?＋?０．００３９?０．９９９２?２．３?５．１０－７７８６??Ｇｅｎｉｐｉｎ?小?ｐ－ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ?ｙ?＝?０．０１７０ｘ?＋?０．０２７１?０．９９９３?６．６?１７．０４－２４９５２??Ｓｅｃｏｘｙｌｏｇａｉｎ?ｙ?＝?０．０８２７ｘ?＋?０．０１９９?０．９９９１?５．９?１７．５８－２５７５２??Ｎｅｏｃｈｌｏｒｏｇ

?南京中医药大学硕士学位论文２．２．４血浆代谢物精密度与稳定性考察??利用质控样品，对血浆代谢物进行精密度及稳定性考察，考察方法同原型化２．２．５数据处理??利用Ｔｈｅｒｍｏ?ＸＲｅｐｏｒｔ软件，对样品血浆及空白血浆进行比对分析。选取候用Ｔｈｅｒｍｏ?Ｘｃａｌｉｂｕｒ软件进行代谢产物定量分析。??２．３半定量代谢产物的指认??经筛选，选取血浆中１２个化合物研宄联合用药血浆代谢产物变化，其结构所示。代表性提取离子色谱见图２－２－５，?ＭＳ数据见表２－２－５，括号中给出各代谢产中所对应的编号。??
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本文编号：2883409