肠复方对肠癌肿瘤相关巨噬细胞及趋化因子2、白介素10表达的影响

发布时间：2020-11-15 05:05

　　 目的研究肠复方对裸鼠肠癌原位移植瘤不同部位肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)及相关因子的影响。方法复制裸鼠肠癌原位移植瘤模型,将模型复制成功的28只裸鼠随机分为肠复方高(72 g·kg~(-1))、中(36 g·kg~(-1))、低(18 g·kg~(-1))剂量组和蒸馏水组,每组7只。模型复制成功次日为第1天,于第14天开始给予相应药物干预,共干预3周。干预结束后处死裸鼠,剥离肿瘤标本,称质量计算抑瘤率;采用HE染色观察各组肠癌肿块不同部位标本细胞学形态;流式细胞学法检测各组标本M1型、M2型TAM含量;Western Blot及RT-PCR法检测各组标本中趋化因子2(C-C motif ligand 2,CCL2)及白介素10(Interleukin 10,IL~(-1)0)的蛋白及mRNA表达水平。结果与蒸馏水组比较,肠复方药物组肿瘤质量明显降低,差异有统计学意义(P0.05),肠复方高、中、低剂量组抑瘤率分别为36.01%、20.01%、18.00%。无药物干预的蒸馏水组中,M1型、M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAM)含量分布趋势一致:癌中心癌浸润前缘癌旁组织,与癌旁组织比,差异均具有统计学意义(P0.01)。与蒸馏水组相应部位比,肠复方高、中、低剂量组癌浸润前缘及癌中心M1型TAM含量均下降,差异有统计学意义(P0.01,P0.05);肠复方高、中剂量组M2型TAM含量明显下降,差异有统计学意义(P0.01),肠复方低剂量组M2型TAM虽有下降趋势,差异无统计学意义(P0.05)。无药物干预的蒸馏水组中:CCL2、IL~(-1)0蛋白及mRNA表达一致:癌中心癌浸润前缘癌旁组织,与癌旁组织比差异均有统计学意义(P0.01)。与蒸馏水组相应部位比较,肠复方各组癌中心CCL2、IL~(-1)0蛋白及mRNA表达均明显下降,差异有统计学意义(P0.01);肠复方各组癌浸润前缘CCL2、IL~(-1)0蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P0.01);肠复方各组癌浸润前缘CCL2 mRNA(P0.01)、IL~(-1)0 mRNA(P0.05,P0.01)表达均有所下降。结论癌组织(癌中心、癌浸润前缘)中M1、M2型TAM含量及CCL2、IL~(-1)0表达均高于癌旁组织,癌中心尤甚。肠复方可降低TAM的含量,抑制裸鼠肠癌原位移植瘤中CCL2、IL~(-1)0蛋白及mRNA的表达,可能为其抑瘤作用的机制之一。
【部分图文】：

见图1。HE染色结果显示：蒸馏水组中癌旁组织可见排列整齐的肠壁绒毛组织及均匀分布的杯状细胞，未见明显异形细胞，染色较浅；与癌旁组织相比，癌中心肿瘤细胞丰富，瘤细胞核浆比例大，染色深，核分裂象多见；癌浸润前缘组织肿瘤细胞较丰富，瘤细胞核浆比例较大，较浅，核分裂象较多。与蒸馏水组相比，各药物干预组的癌旁组织细胞学形态无明显差异；肠复方高、中剂量组的癌中心肿瘤细胞较少，瘤细胞核浆比例较小，可见部分结缔组织及空泡状组织，细胞核染色较浅；肠复方高、中剂量组的癌浸润前缘组织中可见散在肿瘤细胞，核浆比例较小，核分裂较少，染色浅，见空泡状结构及结缔组织。2.4 各组原位移植瘤裸鼠瘤体各部位M1、M2型TAM含量比较

应用蛋白印迹法检测各组CCL2、IL-10蛋白表达情况。电泳图（图2）显示，蒸馏水组中，各部位CCL2、IL-10蛋白表达为：癌中心>癌浸润前缘>癌旁组织。癌旁组织中，肠复方各组与蒸馏水组CCL2、IL-10的表达大致相同；各组癌中心及癌浸润前缘CCL2及IL-10蛋白表达含量为：高剂量组<中剂量组<低剂量组<蒸馏水组。各组各部位条带灰度值统计结果分析（图3）显示，蒸馏水组中，与癌旁组织比较，癌浸润前缘及癌中心中CCL2、IL-10蛋白含量均明显升高（P<0.01）。癌旁组织中，各药物组与蒸馏水组比较CCL2、IL-10蛋白表达趋势同电泳图，差异无统计学意义（P>0.05）；癌浸润前缘及癌中心中，与蒸馏水组比较，肠复方高、中、低剂量组CCL2、IL-10蛋白表达含量明显降低（P<0.01）。图3 各组原位移植瘤不同部位CCL2、IL-10 Western Blot灰度值比较结果（±s,n=7)

各组原位移植瘤不同部位CCL2、IL-10 Western Blot灰度值比较结果（±s,n=7)
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