基于UPLC-HDMS代谢组学技术研究马兜铃酸肾毒性及其毒理机制

发布时间：2020-11-17 19:58

　　 马兜铃酸肾病(AAN)是一种服用含有马兜铃酸(AA)中药导致的肾脏疾病,目前AAN机理尚不明确,制约着临床上含AA中药的使用。代谢组学是主要研究生物整体内源性代谢物质变化的学科,代谢组学广泛用于疾病诊断和药物毒性研究。研究目的:基于超高效液相色谱-高清质谱(UPLC-HDMS)代谢组学方法,并结合药理学的方法,对AAN不同阶段导致内源性代谢产物的变化进行系统研究,并阐明病理机制,为含马兜铃酸的中药合理应用提供参考依据。方法:选取体重为200±10g的雄性SD大鼠60只,随机分为AAN模型组和正常对照组,每组30只。模型组大鼠按体重每天灌胃20mg/kg的AA溶液(含0.5%NaHC03),对照组大鼠按体重灌胃同等剂量的0.5%NaHCO_3溶液,连续灌胃12周,停止给AA后再观察12周,建立AAN大鼠模型。给AA分别在第4、8、12和24周收集尿液、血清和肾组织样品,用于尿液和血清生化指标、组织病理学分析以及尿液、血清和肾组织的代谢组学研究。结果:1.AAN大鼠的尿液代谢组学研究结果:在第4周、第8周和第12周分别鉴定出16、14和15个生物标示物。生物化学途径分析发现AA导致的肾损伤与柠檬酸循环、肠道微生物代谢、氨基酸代谢、嘌呤代谢和胆汁酸合成等扰乱有关。2.AAN大鼠血清代谢组学研究结果:牛磺鹅去氧胆酸、12-酮脱氧胆酸、溶血卵磷脂(15:0)和二十二碳六烯酸4个代谢产物为早期AAN的血清生物标示物;溶血卵磷脂(22:5)、硫酸吲哚酚、尿酸和肌酐为晚期AAN大鼠血清生物标示物;模型组大鼠血清中溶血磷脂酰乙醇胺(20:2)、胆酸、鹅去氧胆酸、胱硫醚亚砜和溶血卵磷脂(17:0)的含量在各时间点都发生显著改变。生化途径分析发现这些代谢产物主要与脂质、氨基酸和嘌呤的代谢有关。3.AAN大鼠肾组织代谢组学研究结果:甘油三酯、磷脂酰胆碱和溶血卵磷脂等脂质可作为AAN的能区分模型组与正常组的重要代谢产物,AAN不同阶段的发病机理主要与脂肪酸、胆汁酸、甘油脂和磷脂等脂质的代谢异常有关;肾脏的病理组织学考察证明AA肾损伤过程中伴随着炎症和促氧化的激活,导致肾纤维化的发生。结论:代谢组学方法可用于AAN病理机理的研究,在AAN不同阶段伴随着不同代谢产物的改变。AAN的发病机理主要与肠道微生物代谢、氨基酸代谢、嘌呤代谢、胆汁酸代谢和脂质代谢异常有关。
【学位单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

分别为０．４５％和２．６０％，表明ＵＰＬＣ－ＨＤＭＳ方法的精确度高、灵敏度高、重现性良??好，能够满足研宄要求。利用ＵＰＬＣ－ＨＤＭＳ方法，采用负离子模式获得对照组和模??型组在给ＡＡ后第４周、第８周和第１２周的尿液ＢＰＩ色谱图（图２）。??０．５４??，．ｖ?４ｎ〇?９＆９６０６?…??（Ａ）?１（Ｘｈ?Ｉ?１６７．０１９８?＆〇〇?６．９５?７．４３?Ｓｆ??〇＿Ｊ?ＩＪＳＵ?ｌ１＾０２４２，＾，?，?１?１５ａ〇６１８?＿?Ｊｍ１２７－ＨＬ?ｉ?Ａｘ－??１．００?ＺＯＯ?３Ｊ００?４．００?５．００?６．００?７ｉ？?８．００?９Ｊ００??０．５４?ａｏｏ?Ｒ９５?ａ〇４??（ｕ）’ｔ?二?１Ｔ??■沪?ｌｌｊ?Ｈ／１０；１６７＇０１９７?２４２０１１８?方２＾１１?．?ｉ?＾＾ｉｒ．０７７５?ｉ７＾１８７．Ｗ６３ｊｉ＿ｌ３＾３９??１．００?ＺＯＯ?３．００?４．００?５．００?６．００?７．００?ａ〇０?９Ｄ０??８．８７??ｆＱ?１〇°］?ｎｏｉ?０?９６?＆１３?＾?０９７２??ｖ?；?ｊ?９ａ°＾４１９７ｆ１ｉ１９１０１８Ｇ?２８１?４０１?侃严?＾??Ｕ?■?■?■?＇?１?１?■?？?７?１?■?１?ｒ?１?１?■?■?ｎ?ｒ?ｅｒｒ?＿ｎ．?，?、一ｐｒｖ?ｒ￣ｒ?ｐＴ?１?Ｔ＇Ｔｉ?１?．门厂１．?＿?■?．?＿?１

Ｒ２值分别为０．７２，?０．６４和０．６８，Ｑ２值分别为０．９８，?０．９１和０．９４，说明此分析方法??适应性好，可预测性强。在上述条件下获得的指纹图谱经ＰＣＡ分析所得Ｓｃｏｒｅ图显??示从第４周开始模型组沿着／／７７轴逐渐偏移对照组，第丨２周达到最大偏移（

３给出了己鉴定代谢产物的详细信息以及在ＡＡＮ大鼠尿液中的变化情况，其中一些??代谢产物如尿酸、犬尿酸、尿囊素、牛磺酸、柠檬酸盐、肌酐等，在我们以前的研究??中己报道。图４是己鉴定的代谢产物硫酸吲哚酯和苯乙酰甘氨酸的ＭＳ和ＭＳＥ信息。??图５Ａ－Ｃ是给药后第４周、第８周和第１２周以尿液代谢轮廓为研宄对象，经ＰＣＡ处??理所得的Ｓ－ｐｌｏｔ，图中每一个点代表样品尿液中检测到的一个代谢产物，荷载点离中??心越近，它所代表的代谢产物在模型组和对照组的差异就越小；反之，荷载点离中心??越远，它所代表的代谢产物在两组间的差异就越大。图５Ｄ－Ｆ是对ＡＡＮ不同阶段所??鉴定的代谢产物的相关分析，显示了不同代谢产物的相关性。??（Ａ）?１００－ＭＳ?８０?２１２．°°１２?（Ｂ）１００］?ＭＳ?，?１９２?０６６１??！?！?２１３．００３４?＾?１９３０６９３??〇ｌ職?叫■，…她??６０?８０?１００?１２０?１４０?１６０?１８０?２００?２２０?２４０?６０?８０?１００?１２０?１４０?１６０?１８０?２００?２２０??＜ｎｎ?？?２１２．０００５?１ｆｙｉ?７４ｉ）２３８??１００?＾?＿２?１ＶＥ??７９．９５５７??步?８０５６３５?菸??！?！丄?：＇?１３２＿?１＿?！??．謂、＞．１４９２?」１６０严?酬１?歷?１３１．０３７３
【参考文献】

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本文编号：2887858