葛根中异黄酮类化合物抗Ⅱ型糖尿病作用的体内外研究

发布时间：2020-11-19 12:16

　　 Ⅱ型糖尿病是炎性相关的疾病。本论文在系统研究葛根中异黄酮类化合物的抗氧化、抗炎及抗胰岛素抵抗作用基础上,选择其中前人研究较少的芒柄花黄素,对其抗小鼠Ⅱ型糖尿病作用进行了研究,为从葛根中异黄酮类化合物中筛选抗糖尿病药物奠定药学基础。在抗氧化方面,考察了葛根素、大豆苷元、3’-甲氧基葛根素、染料木素、鸢尾黄素、芒柄花黄素、芒柄花苷、鹰嘴豆芽素A、染料木苷、葛根素芹菜糖苷和黄豆黄素等11种葛根中异黄酮类化合物对DPPH自由基、羟自由基、过氧亚硝酸离子和超氧阴离子自由基的直接清除作用,来考察这些异黄酮类化合物的抗氧化作用。研究发现,上述11种葛根中异黄酮类化合物均具有一定的直接清除上述自由基的能力,其中以染料木素和鸢尾黄素为最强。在抗胰岛素抵抗方面,采用葡萄糖试剂盒(葡萄糖氧化酶法)检测培养基的葡萄糖消耗量,观察了葛根素、染料木素、鸢尾黄素、芒柄花黄素、鹰嘴豆芽素A和黄豆黄素等6种葛根中异黄酮类化合物对于HePG2细胞胰岛素抵抗的影响。研究发现,上述6种葛根中异黄酮类化合物均表现出一定的抑制肝细胞胰岛素抵抗的能力。在抗炎方面,通过Griess法对葛根素、染料木素、鸢尾黄素、芒柄花黄素、鹰嘴豆芽素A和黄豆黄素等6种葛根中异黄酮类化合物抑制LPS激活巨噬细胞的NO释放作用进行了检测,并采用ELISA法考察了鸢尾黄素、鹰嘴豆芽素A和芒柄花黄素等三种葛根中异黄酮化合物对LPS激活的巨噬细胞表达TNF-α和IL-1β程度的影响。研究发现,在较高浓度下上述6种葛根中异黄酮类化合物表现出一定的抑制细胞活化的能力;上述三种葛根中异黄酮化合物还表现出一定的降低细胞炎性因子TNF-α和IL-1β含量的能力,只是作用较弱。在抗Ⅱ型糖尿病研究方面,采用高糖高脂饲料饲喂和STZ注射复制小鼠Ⅱ型糖尿病模型,选用葛根中异黄酮之一的芒柄花黄素作为研究对象,并以格列本脲作为阳性药。造模成功后随机平行均分为糖尿病对照组、阳性药组,高、中、低剂量组,另设10只小鼠为正常对照组。采用腹腔注射给药,连续4周,每周记录各组小鼠的平均体重、饮食量、饮水量三种生理指标和空腹血糖值、甘油三酯、总胆固醇、低、高密度脂蛋白胆固醇和血肌酐五种生化指标。通过检测血肌酐了解改善肾功能的状况。数据通过SPSS 20.0进行统计分析。研究发现,芒柄花黄素可改善糖代谢紊乱和脂代谢素乱,降低糖尿病模型小鼠的血糖,降低模型小鼠的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,升高高密度脂蛋白胆固醇含量,同时能缓解糖尿病小鼠“三多一少”的症状。研究还发现,芒柄花黄素高剂量组还可以减缓血肌酐含量上升,具有一定的肾保护功能。结论:葛根中异黄酮类化合物具有一定的抗氧化、抗炎及抗胰岛素抵抗作用。葛根中异黄酮类化合物芒柄花黄素可以缓解Ⅱ型糖尿病的症状,可以有效的缓解糖脂代谢紊乱,改善肾功能。
【学位单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

葛根中异黄酮抑制 LPS 激活的巨噬细胞活化及对巨噬细胞中炎症因子μl细胞培养上清液用于ELISA检测分析。根据ELISA法清液中TNF-α和IL-1β含量。标准品液的配制液（Wash Solution ）：环境温度较低时，清洗液的浓用之前需要将其平衡至室温，轻晃使晶体完全溶解。，用蒸馏水或去离子水配置成500 mL的清洗液。溶液（Substrate Solution ）：使用前的15 min内，将底。注意避光。释液（Diluent 1×）：吸取20 mL 5×浓缩稀释液，加入L 的1×稀释液。品（Standard）：根据所购试剂盒说明书，用一定量的置15 min充分混匀，此时TNF-α浓度为7000 pg/mL，IL按照下图进行倍比稀释。

葛根中异黄酮抑制 LPS 激活的巨噬细胞活化及对巨噬细胞中炎症因子，0.3-30 μmol/L 的鸢尾黄素对激活的 RAW 264.7 细 3-3），其余 5 种化合物在 0.3-30 μmol/L 浓度范围内响，表明这 6 种葛根中异黄酮在 0.3-30 μmol/L 浓度 LPS 激活的 RAW 264.7 细胞 NO 释放的药效学研究7 细胞毒性的影响，可用于进一步的实验研究。

第 2 章 葛根中异黄酮抑制 LPS 激活的巨噬细胞活化及对巨噬细胞中炎症因子的影响3.3 葛根中异黄酮对 LPS 激活的 RAW 264.7 细胞基础 NO 释放的影响6 种葛根中异黄酮与 LPS 联合作用于 RAW264.7 细胞 24h 后，考察W264.7 细胞 NO 释放的影响。在 0.3-30 μmol/L 浓度范围内，6 种葛根中一定程度的抑制活化巨噬细胞 NO 的释放，当浓度达到 10 μmol/L 时，外 5 种葛根中异黄酮均能够达到显著抑制的作用（图 2-4）。其中鸢尾黄豆芽素 A、芒柄花黄素抑制效果较好。
【参考文献】

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本文编号：2889995