复合中药提取液对雄激素源性脱发影响的研究及应用

发布时间：2020-11-20 03:44

　　本论文运用中药复方结合现代雄激素源性脱发发生的机制,针对雄激素源性脱发的多靶点性,对复合中药提取液进行体外药效研究,将此复合中药提取液制备成清爽、安全有效的防脱育发精华液,方便雄激素源性脱发者坚持使用而取得满意的效果。本论文以紫外分光光光度法,建立体外抑制5α-还原酶活性的方法。在340 nm处,以反应液反应10 min吸光度的变化值为指标,根据公式计算出抑制率。在此实验中,优化了5α-还原酶反应条件,在2 mL的反应体系中,确定了最佳睾酮20μM、NADPH 40μM、酶提取量300μg。在此基础上,设置空白对照组、一系列浓度阳性对照组、实验组。得复合中药提取液的浓度为30 mg/mL时,其抑制率为63.35%,与非那雄胺浓度为0.2 mg/mL时相当。实验结果表明该复合中药提取液能有效抑制5α-还原酶活性。采用试管连续稀释法测定防脱复合中药提取液对金黄色葡萄球菌等三种菌株的MIC值,以提取液浓度稀释倍数倒数计。实验结果得出该复合中药提取液对金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、糠秕马拉色菌的MIC范围分别为提取液浓度的1/8~1/5、1/5~1/4、1/5~1/4,对应的药物浓度为3.75~6.0mg/mL、6.0~7.5mg/mL、6.0~7.5mg/m L,比其他一些研究者利用中药单体或复方对这三种菌的体外抑制效果好。在以上实验结果的基础上,将复合中药提取液制备成防脱育发精华液,委托广东省保化检测中心对该防脱育发精华液的卫生指标进行检测及安全性进行评价,该制剂达到了《化妆品卫生规范》的要求。在研究防脱育发精华液促进小鼠皮肤微循环的实验中,选取昆明种小鼠40只,雌雄各半,随机分成4组,分别涂抹高、中、低剂量的防脱育发精华液作为实验组,以及中剂量的15%乙醇作为空白对照组,实验采用红外测温仪测量实验前各组小鼠的皮肤温度及实验后不同时间点(5、30、45、60、90 min)的皮肤温度,实验结果以不同时间点的温度与实验前的温度差值表示。研究发现,涂抹防脱育发精华液5 min后,各组小鼠皮肤温度均低于实验前温度,且均有统计学意义;30 min后,空白对照组小鼠皮肤温度仍低于实验前水平,各实验组小鼠皮肤温度均高于实验前水平,且具有统计学意义;45 min后,空白对照组小鼠皮肤温度呈上升趋势,防脱育发精华液高、中剂量组小鼠皮肤温度高于30 min时的温度,低剂量组小鼠皮肤温度呈下降趋势,均有统计学意义;60 min后,防脱育发精华液高剂量组皮肤温度依旧呈上升趋势,中剂量组皮肤温度呈下降趋势,均具有统计学意义;90 min后,空白对照组皮肤温度依旧低于实验前水平,防脱育发精华液高剂量组也呈下降趋势,但高、中剂量组均高于实验前水平,低剂量组基本恢复实验前水平,且均有统计学意义。由此实验结果可推论:该防脱育发精华液能提高小鼠皮肤温度,维持皮肤温度升高的时间与该精华液的剂量呈正比,表明复合中药提取液能提高皮肤温度,促进皮肤微循环以C57BL/6J小鼠为实验模型,研究防脱育发精华液对小鼠毛发生长的影响。实验分3组,即空白对照组(不含防脱复合中药提取物的精华液基方)、阳性对照组(5%的米诺地尔酊)和实验组(防脱育发精华液,A组)。采用小鼠毛发长出前,实验通过肉眼观察其背部皮肤变黑的快慢;毛发长出后,则测量毛发长度判断毛发的生长速度,并在第7天和第18天计数毛囊数和第18天通过光镜观察毛囊形态的方案。研究发现:毛发长出前,肉眼观察到A组和阳性对照组小鼠背部皮肤最先转黑;毛发长出后,A组与阳性对照组毛发有接近的生长速度,但毛发的最终长度为阳性对照组长,A组和阳性对照组与空白对照组比较皆有明显的显著性差异(P0.01);染色后用光镜观察统计小鼠毛囊数,发现第7天和第18天,阳性对照和A组的毛囊数比空白组多(P0.01);第18天,光镜观察显示,与空白对照组比较,阳性对照组和A组毛囊更为密集,完全被毛乳头包围,毛球内有很多的黑色素,表明毛囊仍处于生长期。实验结果表明该防脱育发精华液能加快小鼠毛发的生长速度和延长生产期及增加毛囊个数,促进毛发的生长,进一步表明复合中药提取液能加快小鼠毛发的生长速度和延长生产期及增加毛囊个数,促进毛发的生长。在人体功效性试验中,选取符合试验要求的30名志愿者,每天在头皮指定的部位涂抹防脱育发精华液,通过检测皮脂的含量,计数脱发的数量,在单位面积内,计数毛囊个数,计算毛发生长速度和脱发面积。84天后,志愿者各试验指标都有所改善,表现为皮脂含量分泌下降,脱发数量、脱发面积有所减少,毛囊个数增多等等。实验结果说明该防脱育发精华液能有效改善雄激素源性脱发者的脱发症状。综上所述,本论文研究的复合中药提取液能同时作用于抑制5α-还原酶活性,抑制引发头皮炎症的微生物生长,促进皮肤微循环,将其制备成的防脱育发精华液能有效改善雄激素源性脱发者的脱发症状。
【学位单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
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广东药科大学硕士研究生毕业论文第一章绪论性脱发的研究进展脱发(androgenic alopecia，AGA)，又称男性型脱发脂溢性脱发(sebrrheic alopecia，SA)，是常见的一种右的男性，但随着现代生活节奏的加快，脱发者越性的过程，其特征是前额两侧头发慢慢变纤细而稀疏，“高额”，但枕及两颞头发仍正常。根据 Norwood-Ham重将脱发分为 7 级，其中，1～3 级属于轻度脱发，4～于重度脱发[1]-[4](图 1.1)。

标准曲线,标准曲线,睾酮,最适浓度

图 2.1 蛋白质的标准曲线上是蛋白质的标准曲线，测得大鼠肝脏粗微粒体提取液蛋白质的含量为 4.86 mg/mL，5α-还原酶提取物的含量以总蛋白质含量计。4 5α-还原酶反应条件的优化) 睾酮浓度对酶活性的影响先确定底物睾酮的最适浓度。在 2 mL 的反应体系中，固定酶溶液浓度 4.85 的前提下，取酶量 100 μg 和 NADPH30 μM，设置 T 一系列梯度：0 μM、50 μM、20 μM、40 μM、80 μM，加反应液定容至 2 mL，37℃孵育，在 340定 10 min 内吸光度变化值(△A：即第 0 min 的吸光度值减去第 10 min 的吸)，见图 2.2。) NADPH 浓度对酶活性的影响定 NADPH的最适浓度，在 2 mL 的反应体系中，取(1)中最适的睾酮浓度，固取量，设置 NADPH 一系列梯度：0 μM、10 μM、20 μM、30 μM、40 μM、

睾酮,酶活性,浓度