掺入不同形式PEG的大黄素脂质体长循环效应及ABC现象研究

发布时间：2020-11-21 01:45

　　 目的普通脂质体作为载体递送药物时,进入体内将很快被网状内皮系统(Reticulo endothelial system,RES)摄取,使脂质体被作为异物而消除,难以在靶部位达到有效治疗浓度。本研究以大黄素作为模型药物,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)及其类脂衍生物(m PEG 2000、DSPE-PEG 2000、Chol-PEG 2000)掺入脂质体中,其亲水端在脂质体表面形成水化膜,覆盖调理蛋白结合位点,从而增加空间位阻,躲避RES的识别和摄取,延长脂质体的体内循环时间。然而,当重复注射PEG化脂质体时,会产生加速血液清除现象(accelerated blood clearance phenomenon,ABC phenomenon),使得脂质体在体内循环时间大大缩短,本研究通过大鼠体内药动学研究及抗PEG Ig M抗体的检测,优选出产生ABC现象较弱的PEG化脂质体,为深入研究PEG化脂质体提供参考。方法采用星点设计-响应面法,以药物包封率作为评价指标,药脂质量比、胆固醇与卵磷脂质量比、PEG化分子与卵磷脂摩尔比作为考察因素,优化大黄素脂质体的最佳制备工艺。采用薄膜分散-超声法制备掺入不同形式PEG的大黄素脂质体,分别为甲氧基聚乙二醇化大黄素脂质体(m PEG-Emo-Lip)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇化大黄素脂质体(DSPE-Emo-Lip)、胆固醇-聚乙二醇化大黄素脂质体(Chol-Emo-Lip)以及普通大黄素脂质体(Emo-Lip),并采用动态激光散射法测定粒径,透射电镜扫描法观察形态,微柱离心法考察包封率(Entrapped efficiency,EE%)、载药量(Loading capacity,LC)与泄漏率(Leakage,LK%)等制剂学性质。采用动态透析法考察各脂质体在p H7.4、p H5.8以及含5%FBS的PBS释放介质中的释放性能。经大鼠尾静脉注射给药,眼眶后静脉丛取血,HPLC法测定大黄素的血药浓度,拟合药物动力学方程,比较3种掺入不同形式PEG的大黄素脂质体的长循环效果。通过药动学试验求算药动学参数,以及酶联免疫分析试剂盒(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠体内抗PEG Ig M抗体的水平,比较重复注射3种掺入不同形式PEG的大黄素脂质体所产生ABC现象的强弱。结果确定了大黄素脂质体的最优处方:药脂质量比1:20,胆固醇与卵磷脂质量比1:5,PEG化分子与卵磷脂摩尔比1:20。普通大黄素脂质体和3种掺入不同形式PEG的大黄素脂质体粒径在123~143 nm之间,分布较均匀,其中Emo-Lip和m PEG-Emo-Lip的粒径稍大;各大黄素脂质体包封率大于88.25%,载药量为32.21~35.75 mg/g,泄漏率较低;在p H7.4、p H5.8以及含5%FBS的PBS释放介质中的释放度均为Emo-LipDSPE-Emo-Lipm PEG-Emo-LipChol-Emo-Lip。药动学试验中,与Emo-Lip相比,m PEG-Emo-Lip、DSPE-Emo-Lip、Chol-Emo-Lip的平均滞留时间(MRT)分别为1.72、3.52、2.42倍,药时曲线下面积(AUC)分别为2.23、5.30、3.83倍,血浆清除率(CL)分别为0.44、0.19、0.26倍。ABC现象研究中,与首次给药时各组对应药动学参数相比,m PEG-Emo-Lip、DSPE-Emo-Lip、Chol-Emo-Lip第3次给药时MRT分别为0.87、0.69、0.91倍,AUC分别为0.69、0.53、0.82倍,CL分别为1.45、1.82、1.20倍。首次给药后第3天,大鼠体内开始大量产生抗PEG Ig M抗体;第2次给药,体内抗体数量急剧下降,第2次给药后第3天,仍有少量抗PEG Ig M抗体产生;第3次给药,体内抗体消耗至普通脂质体组水平,且不再增加。结论采用星点设计-响应面法确定了大黄素脂质体的制备工艺,该方法简便易行,精密度高、重现性好;薄膜分散-超声法制备Emo-Lip、m PEG-Emo-Lip、DSPE-Emo-Lip、Chol-Emo-Lip,均具有较好的制剂学性质,其中Chol-Emo-Lip具有较强的缓释性能。药动学试验表明经PEG修饰的大黄素脂质体均能够延长大鼠体内平均滞留时间,显示体内长循环效应,其中DSPE-Emo-Lip的长循环效果更为显著。ABC现象试验表明重复注射m PEG-Emo-Lip、DSPE-Emo-Lip、Chol-Emo-Lip后,平均滞留时间、生物利用度降低,血浆清除率加快,抗PEG Ig M抗体的表达量增加,均表现出一定程度的ABC现象,其中Chol-Emo-Lip表现的ABC现象较弱。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R283.6
【文章目录】：
中文论著摘要
英文论著摘要
英文缩略语表
前言
第一章 长循环分子的合成与表征及大黄素脂质体的处方前研究
    实验材料与方法
    实验结果
    讨论
    结论
第二章 掺入不同形式PEG的大黄素脂质体的制备及其制剂学评价
    实验材料与方法
    实验结果
    讨论
    结论
第三章 掺入不同形式PEG的大黄素脂质体的长循环效应
    实验材料与方法
    实验结果
    讨论
    结论
第四章 掺入不同形式PEG的大黄素脂质体对ABC现象的影响
    实验材料与方法
    实验结果
    讨论
    结论
全文结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
附录 文献综述
    参考文献
在学期间科研成绩
致谢
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本文编号：2892329