补肾活血方对高龄卵巢储备功能下降小鼠卵泡发育和卵巢ERK信号的作用研究

发布时间：2020-11-22 09:14

　　 目的本研究通过观察补肾活血方预治疗对高龄卵巢储备功能下降小鼠促排卵后卵泡发育以及ERK信号的作用,为中医药改善高龄不孕患者的卵泡发育和生殖功能等方面提供理论依据。方法本研究随机抽取30只年轻小鼠(40日龄),作为年轻空白对照组,将实验的60只老龄小鼠(11月龄)再随机分为两组:老龄空白对照组与补肾活血方组,每组各30只。根据人、小鼠的体表面积换算法,补肾活血方组将方药的每日成人服用剂量转算为小鼠的每日给药剂量,其灌胃药量为每10g体重予0.2ml药液量,每日下午1次。年轻空白对照组与老龄空白对照组分别灌等体积的自来水入胃,共给药14天。灌胃结束后予注射用尿促性腺激素10U/只,36h后各组小鼠随机取其中20只小鼠的卵巢,经HE染色后镜下观察小鼠卵母细胞的发育情况;免疫荧光染色检测小鼠卵泡颗粒细胞Ki67表达水平来观察颗粒细胞增殖以及通过免疫印迹法检测小鼠卵巢的ERK及p-ERK蛋白水平。注射尿促性腺激素48h后,给予每组剩余10只小鼠注射人绒毛膜促性腺激素20U/只,14 h后断颈处死小鼠,于输卵管壶腹部取出卵巢所排出的卵子,计算比较各组小鼠排卵的数目差异并经免疫荧光染色检测小鼠卵丘复合物颗粒细胞Ki67表达水平来观察颗粒细胞增殖。结果(1)补肾活血方对高龄卵巢储备功能下降小鼠促排后排卵的影响年轻空白对照组小鼠促排后排出卵子的平均数目为28.20±2.92(??±s);老龄空白对照组小鼠促排后排出卵子的平均数目为4.45±1.94;补肾活血方组小鼠促排后排出卵子的平均数目为11.3±3.13。其中老龄空白对照组与年轻空白对照组比较,小鼠促排后排出的卵子数目明显减少,差异有统计学意义(P0.01);而补肾活血方组与老龄空白对照组比较,排出的卵子数目增加,差异有统计学意义(P0.01)。(2)补肾活血方对高龄卵巢储备功能下降小鼠卵泡发育的影响老龄空白对照组与年轻空白对照组比较,促排后镜下可见小鼠卵巢内窦卵泡数及正常次级卵泡数明显减少(P0.01);而补肾活血方组与老龄空白对照组比较,窦卵泡数及正常次级卵泡数增加明显(P0.05)。(3)补肾活血方对高龄卵巢储备功能下降小鼠卵泡颗粒细胞及卵丘复合物颗粒细胞增殖的影响年轻空白对照组小鼠卵泡颗粒细胞Ki67平均阳性率为90.11±3.55(??±s),卵丘复合物颗粒细胞Ki67的平均阳性率为93.19±2.16;老龄空白对照组小鼠卵泡颗粒细胞Ki67平均阳性率为35.30±3.03,卵丘复合物颗粒细胞Ki67的平均阳性率为33.07±3.76;补肾活血方组小鼠卵泡颗粒细胞Ki67平均阳性率为64.01±3.35,卵丘复合物颗粒细胞Ki67的平均阳性率为66.84±3.09。老龄空白对照组与年轻空白对照组比较,小鼠卵泡颗粒细胞及卵丘复合物颗粒细胞Ki67蛋白表达水平明显降低(P0.01);而补肾活血方组与老龄空白对照组比较,Ki67蛋白表达水平增加明显(P0.01)。(4)补肾活血方对高龄卵巢储备功能下降小鼠卵母细胞ERK1/2的激活作用三组实验小鼠卵巢均有ERK1/2蛋白的表达,且表达的水平差异无统计学意义(P0.05)。三组亦均有磷酸化ERK1/2蛋白的表达,其中老龄空白对照组与年轻空白对照组比较,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相对表达量降低明显(P0.01);而补肾活血方组与老龄空白对照组比较,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相对表达量增加明显(P0.05)。结论(1)高龄卵巢储备功能下降小鼠卵母细胞发育障碍,卵泡颗粒细胞及卵丘复合物颗粒细胞的增殖能力下降。(2)补肾活血方可改善高龄卵巢储备功能下降小鼠卵泡发育,提高卵泡颗粒细胞及卵丘复合物颗粒细胞的增殖能力。(3)补肾活血方能使老年小鼠卵巢组织p-ERK1/2蛋白水平增高,提示该中药方能够促进高龄卵巢储备功能下降小鼠卵巢ERK1/2蛋白的激活。(4)补肾活血方改善年龄相关卵巢储备功能下降小鼠卵泡发育的作用机制可能与促进小鼠卵泡颗粒细胞的增殖和ERK1/2磷酸化的激活有关。
【学位单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

A.年轻空白对照组 B.老龄空白对照组 C.补肾活血方组图 1. 三组小鼠促排后卵巢排出的卵子Fig 1 Eggs of three groups that were excreted by ovaries after ovulation

A.年轻空白对照组 B.老龄空白对照组 C.补肾活血方组图 3. 三组小鼠卵巢细胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining

<0.01）；而补肾活血方组与老龄空白对照组比较，排出的卵子数目增加，差异有统计学意义（P <0.01）。3.2 HE 染色观察各组小鼠各级卵泡的形态学改变A.年轻空白对照组 B.老龄空白对照组 C.补肾活血方组图 3. 三组小鼠卵巢细胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining
【引证文献】

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1 佟雅婧;补肾活血法治疗排卵障碍性不孕系统评价再评价及子代发育临床研究[D];中国中医科学院;2018年

本文编号：2894468