酒制瑞香狼毒对S180荷瘤小鼠抑瘤作用实验研究

发布时间：2020-11-22 10:03

　　 目的:通过建立S180皮下移植瘤小鼠模型,实验研究酒制对瑞香狼毒抑瘤活性及毒性反应的影响,并初步探讨其抗肿瘤作用机制。方法:昆明种小鼠80只,随机抽取10只小鼠做空白对照,剩余70只在小鼠左上肢腋下部位,行S180肉瘤皮下移植瘤造模。将荷瘤小鼠随机分成模型组、瑞香狼毒生药低中高剂量组、酒制瑞香狼毒低中高剂量组7个实验组。以灌胃的方式给药,空白对照组和模型组给予生理盐水,生药组和酒制组分别给予瑞香狼毒生药及酒制水煎剂,低中高剂量组的药物浓度分别为5g/kg、10g/kg、20g/kg。末次给药24h后,将小鼠称重、脱颈椎处死,解剖摘取肿瘤组织、脾、胸腺,称重并留取组织样本制成石蜡切片。进行HE染色,显微镜观察肿瘤组织、脾、胸腺的形态学结构,免疫组织化学法检测肿瘤组织Ki-67、Caspase-3的表达水平。结果:1.瑞香狼毒生药组与酒制瑞香狼毒组肿瘤组织重量均低于模型组(P0.05,P0.01),生药低中高剂量组的抑瘤率分别为:34.80%、44.00%、33.18%,酒制低中高剂量组的抑瘤率分别为:46.80%、57.97%、54.95%,瑞香狼毒生药与酒制瑞香狼毒均能抑制S180肿瘤组织增长。酒制瑞香狼毒组抑瘤作用优于生药组,其中以酒制中剂量组抑瘤率最高,为57.97%。2.与空白对照组相比,酒制瑞香狼毒组小鼠的脾指数未发生明显改变(P0.05),生药组的脾指数降低,其中以高剂量组降低最为显著(P0.05);各用药组小鼠胸腺指数未发生明显改变(P0.05)。镜下观察发现,各组小鼠的脾和胸腺未发生明显的形态学改变。3.形态学观察发现:较模型组相比,瑞香狼毒生药及酒制各剂量组的肿瘤细胞排列稀疏,数量较少,多见散在浅粉色片状坏死区,坏死区内肿瘤组织的正常结构消失,细胞膜破裂,胞核碎裂或消失,周围可见间质细胞增多,伴有不同程度的白细胞浸润。4.免疫组化检测结果显示:与模型组相比,酒制瑞香狼毒能够显著下调S180荷瘤小鼠肿瘤组织中的Ki-67的表达(P0.01),其中酒制中、高剂量组的Ki-67增殖指数最低,分别为26.50%±8.90%、26.28%±7.23%;能显著上调Caspase-3的表达(P0.01),其中酒制中、高剂量组的Caspase-3阳性表达率最高,分别为50.75%±18.48%、40.40%±17.60%。结论:1.通过酒制,能增强瑞香狼毒对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤活性。2.在增强抑瘤作用的同时,酒制能降低瑞香狼毒的毒性反应,减轻生药对小鼠体质量和脾指数的影响。3.酒制瑞香狼毒的抗肿瘤作用机制可能与通过下调Ki-67的表达、上调Caspase-3的表达,从而抑制S180皮下荷瘤小鼠肿瘤细胞的增殖并促进其发生凋亡有关。
【学位单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

在实验第 7 日，各实验组小鼠的体质量差异开始明显（P<0.05），鼠体质量增长较空白对照组缓慢。结果见表 1、图 1。表 1 各组小鼠体质量情况（ x ±S，n=10）第 1 日（g） 第 3 日（g） 第 5 日（g） 第 7 日（g） 21.26±0.98 22.36±1.60 23.28±2.07 24.81±1.19 21.41±1.26 21.81±1.83 21.24±2.05 21.94±1.75* 21.34±1.24 21.17±1.93 21.89±2.38 22.92±1.30* 21.37±1.09 21.40±1.52 22.15±2.54 22.76±1.46* 21.40±0.84 21.78±1.36 22.03±2.03 23.19±1.14 21.28±1.06 21.26±1.39 22.51±2.17 24.56±1.32 21.27±1.00 21.51±1.42 22.72±1.96 24.63±1.56 21.48±1.10 21.29±2.02 22.70±2.74 25.14±2.07 白对照组比较，P <0.01；#表示与模型组比较，P <0.05；△表示与模型组

表 3 各组荷瘤小鼠肿瘤体积比较（ x s，n=10）组别 第 2 日（mm3） 第 4 日（mm3） 第 6 日（mm3） 第 8 日（m型组 32.895±12.520 56.009±6.666 238.660±109.881 269.286±4低剂量组 28.294±10.901 52.738±25.257 224.351±85.217 255.731±5中剂量组 27.179±8.517 49.255±12.967 182.554±69.120 229.198±4高剂量组 35.853±14.128 50.210±8.251 189.909±84.779 213.875±72低剂量组 28.686±5.429 40.502±17.120* 175.208±66.890 241.585±4中剂量组 26.314±5.425 41.084±14.573* 132.518±75.360*#161.403±51高剂量组 26.243±7.011 50.123±14.962 120.707±39.059*#191.468±71*表示与模型组比较，P <0.05；#表示与生药低剂量组比较，P <0.05。

A：模型组；B：生药组；C：酒制组图 3 造模第 8 日各组荷瘤小鼠肿瘤组织超声影像图2.3.3 肿瘤组织的形态学观察形态学观察发现：高倍镜下，可见模型组肿瘤细胞排列紧密，数量较多，细胞大小不等、形状不规则；可见散在的呈核分裂状的增殖细胞，细胞核较大，呈深染。生药及酒制各剂量组肿瘤细胞数量较少，排列稀疏，多见散在片状浅粉色坏死区，坏死区内正常组织结构消失，肿瘤细胞胞膜破裂，胞核碎裂或消失，周围可见间质细胞增多，伴有不同程度的白细胞浸润。结果见图 4。
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本文编号：2894529