开口箭中甾体皂苷诱导HL-60和HepG2细胞自噬与凋亡的机制研究

发布时间：2020-12-06 10:57

　　开口箭（Tupistra chinensis Baker）是我国传统药用植物,对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用,甾体皂苷是开口箭的主要活性成分,然而其甾体皂苷类化合物的抗肿瘤作用的分子机制尚不明确。研究开口箭中甾体皂苷类化合物对肿瘤细胞的凋亡以及自噬两种程序性死亡的作用,阐明其抗肿瘤作用的分子机制,对于开口箭的进一步开发具有重要意义。本实验研究旨在阐明从开口箭中分离得到的其中一个甾体皂苷类化合物5β-spirost-25（27）-en-1β,3β-diol-1-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-β-D-xylopyranosyl-3-O-α-L-rhamnopyranoside（SPD）抑制人肝母细胞瘤HepG2细胞和人急性髓性白血病HL-60细胞增殖的分子机制。在前期研究基础上,本研究采用人肝母细胞瘤HepG2细胞和人急性髓性白血病HL-60细胞作为研究对象,用MTT法检测SPD对细胞存活率的影响（阳性对照为顺铂）,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,流式细胞术观察细胞周期分布变化,用JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化,利用Weste... 

【文章来源】：广东药科大学广东省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
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第一章 引言
    1.1 开口箭化学成分的研究进展
    1.2 开口箭药理活性的研究进展
        1.2.1 抗肿瘤作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 抗菌作用
        1.2.4 其他作用
    1.3 细胞凋亡的研究进展
    1.4 细胞自噬的研究进展
    1.5 立项依据
第二章 SPD诱导肿瘤细胞凋亡的研究
    2.1 实验材料及实验仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 溶液的配置
    2.2 实验操作
        2.2.1 细胞的培养及供试样品的配置
        2.2.2 细胞的冻存
        2.2.3 细胞的复苏
        2.2.4 细胞的传代培养
        2.2.5 体外细胞毒活性检测（MTT法）
        2.2.6 单层贴壁细胞总蛋白的提取
        2.2.7 蛋白定量（BCA法）
        2.2.8 蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        2.2.9 线粒体膜电位的测定
        2.2.10 AnnexinV/PI细胞凋亡检测
        2.2.11 细胞周期的检测
        2.2.12 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 SPD的细胞毒作用
        2.3.2 SPD阻滞细胞周期
        2.3.3 SPD诱导细胞凋亡
        2.3.4 SPD通过线粒体途径诱导细胞凋亡
    2.4 本章小结
第三章 SPD诱导细胞自噬的研究
    3.1 实验材料及实验仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验操作
        3.2.1 细胞的培养
        3.2.2 MDC染色观察细胞自噬
        3.2.3 GFP-LC3转染HepG2细胞观察LC3表达的情况
        3.2.4 蛋白免疫印迹法
        3.2.5 MTT法分析加入抑制剂后细胞存活率的变化
    3.3 实验结果
        3.3.1 SPD诱导细胞自噬
        3.3.2 SPD通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路以及AMPK信号诱导HL-60细胞自噬
        3.3.3 SPD通过Akt/mTOR/p70s6k信号通路诱导HepG2细胞自噬
        3.3.4 SPD诱导细胞自噬促进细胞凋亡
    3.4 本章小结
第四章 总结与展望
    4.1 小结
    4.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]开口箭皂苷诱导肿瘤细胞凋亡研究[J]. 谢锦艳,张东东,李玉泽,李真,宋蓓,乔蓉霞,刘海静,宋小妹.  中药药理与临床. 2014(03)
[2]开口箭抗炎镇痛作用实验研究[J]. 谭刚,杨业玉,李建军.  实用中医药杂志. 2013(07)
[3]开口箭多糖含量测定及生物学活性研究[J]. 赵桦,王慧娜,徐皓.  陕西理工学院学报(自然科学版). 2013(03)
[4]开口箭甲醇提取物抗氧化和抑菌活性研究[J]. 石宛平,张怡轩,林奇泗,王淼,王慧,赵春杰.  食品研究与开发. 2013(09)
[5]开口箭总皂苷对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用[J]. 石孟琼,金家红,黄晓飞,袁琴,白彩虹,杨文雁,陈置丰,罗涛,周继刚,卢训丛.  中药药理与临床. 2013(02)
[6]开口箭总皂苷对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用[J]. 黄文峰,晏传奇,邹坤,汪鋆植.  中国老年学杂志. 2012(22)
[7]开口箭醇提物抗慢性咽炎活性研究[J]. 邬昊洋,周园,李诺飞,贺海波,邹坤.  三峡大学学报(自然科学版). 2012(02)
[8]开口箭皂苷对高脂血症小鼠动脉粥样硬化的治疗作用[J]. 廖安妮,向一,钱振宇,余青松.  中国医院药学杂志. 2009(13)
[9]开口箭提取物对采后香蕉抗炭疽病菌活性的研究[J]. 吴光旭,杨小玲,刘爱媛,陈维信.  农业工程学报. 2007(07)
[10]开口箭提取物体外抗肿瘤实验研究[J]. 李青,邹坤,汪鋆植.  中国民族民间医药杂志. 2007(03)

硕士论文
[1]开口箭皂苷提取优化及其对关节炎小鼠的治疗研究[D]. 梁乐.河南师范大学 2015
[2]开口箭皂苷的抗肿瘤作用与其抗肿瘤机制的研究[D]. 蔡晶.第一军医大学 2007



本文编号：2901251