苦参碱对大肠杆菌体外生物被膜形成影响因素的研究
发布时间：2020-12-10 17:09
第一部分苦参碱对大肠杆菌生物膜形成的影响:Omp A的调控作用目的:探讨在大肠杆菌生物膜中、晚期,不同浓度的苦参碱对大肠杆菌外膜蛋白A（Omp A）表达量的影响。方法:以大肠杆菌标准菌（ATCC25922）为研究对象,采用连续二倍稀释法分别测量苦参碱和左氧氟沙星对大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）。使用经过高压蒸汽灭菌的腹膜透析管为载体建立大肠杆菌生物膜（Biofilm,BF）模型,将载体置入24孔板中并随机分为5组:空白对照组（阴性对照组）、1MIC苦参碱组、2MIC苦参碱组、4MIC苦参碱组和1MIC左氧氟沙星组（阳性对照组）。于大肠杆菌生物膜形成的中（3天）、晚（7天）期进行药物干预,取出药物作用oh、4h、8h、24h后载体上生物膜中的大肠杆菌进行实验。分别通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR法（q RT-PCR）检测载体生物膜中大肠杆菌外膜蛋白A在蛋白水平和m RNA水平的表达量。结果:1MIC苦参碱组、2MIC苦参碱组、4MIC苦参碱组、1MIC左氧氟沙星组与空白对照组相比较,在药物作用时间达到8h时,无论在生物膜形成的中（3天）、晚（7天）期,...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苦参碱（Matrine）的分子式Fig.1Themolecularformulaofmatrine
图 1-1 加样板示意图（加样板中配有分离胶、浓缩胶等，无需配置）.5 OmpARNA 表达量的检测①细菌总 RNA 的提取：按照总 RNA 提取试剂盒的说明书进行操建模和菌体制备步骤中所得大肠杆菌菌体，轻弹 EP 管底部，使大肠体沉淀松散，加入 100μl 含有溶菌酶的 TE 缓冲液，旋涡震荡 3 分钟静置 5 分钟，使细菌彻底重悬并与溶菌酶充分接触。随后加入 350μl RL，旋涡震荡混合均匀，在室温下 12000rpm 离心 2 分钟，用移液枪清液移至新的 EP 管中，做好标记。随后加入 250μl 无水乙醇，混合将 EP 管中的溶液和沉淀一同转移至吸附柱 CR3 中，室温下 12000rp 1 分钟，弃废液；再依次向吸附柱中加入 350μl 去蛋白液 RW1，1200心 1 分钟，弃废液；加入 80μl DNase I 工作液，静置 15 分钟；加入 3蛋白液 RW1，12000rpm 离心 1 分钟，弃废液；加 500μl 漂洗液 RW
斯亮蓝法显示总蛋白含量和转膜情况。（1）：生物膜构建 3 天后加药作用 0果；（2）：生物膜构建后 7 天加药作用 8h、24h 后的结果。ession of protein in E.coli using the Coomassie brilliant blue method. (1):Addin after 3 days induced of BF; (2):Adding drugs for 8h and 24h after 7 days induc中可知细菌总蛋白提取成功，但蛋白表达量较少，组间蛋同，需要进行浓度调整后进入下一步实验。菌 OmpA 蛋白表达量的检测（1）
【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈蛋白质印迹法操作过程中的实验技巧[J]. 宋亮,陈丹丹. 科技资讯. 2015(21)
[2]苦参联合左氧氟沙星对腹膜透析管大肠杆菌生物被膜的影响[J]. 梁俐,廖蕴华,王成玉,邹龙涛. 实用医学杂志. 2012(10)
[3]实时荧光定量PCR技术原理与应用[J]. 周晓丽,朱国坡,李雪华,王艳玲,刘兴友. 中国畜牧兽医. 2010(02)
[4]苦参碱对白色念珠菌生物膜的体外抑制作用[J]. 吴岚,周曾同,周永梅,王海燕,施琳俊. 上海口腔医学. 2009(04)
[5]黄芩水煎液联合左氧氟沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J]. 孔晋亮,刘晓岚,陈一强,王立赞,闫萍,覃雪军,朱莲娜. 天津医药. 2008(05)
[6]腹膜透析相关感染性腹膜炎致病菌及菌谱变化——单个腹膜透析中心15年回顾分析[J]. 郭群英,陈林,阳晓,杨念生,冯敏,姜宗培,毛海萍,陈崴,余学清. 中华肾脏病杂志. 2006(12)
博士论文
[1]绿原酸对铜绿假单胞菌生物膜抑制作用及其机制的体内外研究[D]. 陈一强.广西医科大学 2010
本文编号：2909061
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
苦参碱（Matrine）的分子式Fig.1Themolecularformulaofmatrine
图 1-1 加样板示意图（加样板中配有分离胶、浓缩胶等，无需配置）.5 OmpARNA 表达量的检测①细菌总 RNA 的提取：按照总 RNA 提取试剂盒的说明书进行操建模和菌体制备步骤中所得大肠杆菌菌体，轻弹 EP 管底部，使大肠体沉淀松散，加入 100μl 含有溶菌酶的 TE 缓冲液，旋涡震荡 3 分钟静置 5 分钟，使细菌彻底重悬并与溶菌酶充分接触。随后加入 350μl RL，旋涡震荡混合均匀，在室温下 12000rpm 离心 2 分钟，用移液枪清液移至新的 EP 管中，做好标记。随后加入 250μl 无水乙醇，混合将 EP 管中的溶液和沉淀一同转移至吸附柱 CR3 中，室温下 12000rp 1 分钟，弃废液；再依次向吸附柱中加入 350μl 去蛋白液 RW1，1200心 1 分钟，弃废液；加入 80μl DNase I 工作液，静置 15 分钟；加入 3蛋白液 RW1，12000rpm 离心 1 分钟，弃废液；加 500μl 漂洗液 RW
斯亮蓝法显示总蛋白含量和转膜情况。（1）：生物膜构建 3 天后加药作用 0果；（2）：生物膜构建后 7 天加药作用 8h、24h 后的结果。ession of protein in E.coli using the Coomassie brilliant blue method. (1):Addin after 3 days induced of BF; (2):Adding drugs for 8h and 24h after 7 days induc中可知细菌总蛋白提取成功，但蛋白表达量较少，组间蛋同，需要进行浓度调整后进入下一步实验。菌 OmpA 蛋白表达量的检测（1）
【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈蛋白质印迹法操作过程中的实验技巧[J]. 宋亮,陈丹丹. 科技资讯. 2015(21)
[2]苦参联合左氧氟沙星对腹膜透析管大肠杆菌生物被膜的影响[J]. 梁俐,廖蕴华,王成玉,邹龙涛. 实用医学杂志. 2012(10)
[3]实时荧光定量PCR技术原理与应用[J]. 周晓丽,朱国坡,李雪华,王艳玲,刘兴友. 中国畜牧兽医. 2010(02)
[4]苦参碱对白色念珠菌生物膜的体外抑制作用[J]. 吴岚,周曾同,周永梅,王海燕,施琳俊. 上海口腔医学. 2009(04)
[5]黄芩水煎液联合左氧氟沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J]. 孔晋亮,刘晓岚,陈一强,王立赞,闫萍,覃雪军,朱莲娜. 天津医药. 2008(05)
[6]腹膜透析相关感染性腹膜炎致病菌及菌谱变化——单个腹膜透析中心15年回顾分析[J]. 郭群英,陈林,阳晓,杨念生,冯敏,姜宗培,毛海萍,陈崴,余学清. 中华肾脏病杂志. 2006(12)
博士论文
[1]绿原酸对铜绿假单胞菌生物膜抑制作用及其机制的体内外研究[D]. 陈一强.广西医科大学 2010
本文编号：2909061
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2909061.html
