眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及细胞毒素-1选择性抑制HSC-LX2细胞的研究
发布时间：2020-12-14 03:27
目的:通过层析法从眼镜蛇毒中分离高纯度高生物活性的细胞毒素-1（CTX-1）和细胞毒素-2（CTX-2）,以人肝正常细胞（HL7702）为对照探索CTX-1和CTX-2对人肝星状细胞（HSC-LX2）是否有选择性抑制作用及CTX-1对HSC-LX2细胞周期、细胞形态及超微结构、PI3K/AKT信号通路的影响,从而阐明CTX-1通过阻滞细胞周期抑制HSC-LX2细胞增殖并通过PI3K/AKT信号通路诱导HSC-LX2细胞凋亡的机制。方法:依次应用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析来对眼镜蛇毒细胞毒素进行分离纯化。用SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度并采用NanoLC-ESI-MS/MS蛋白质谱法鉴定蛋白质成分及其分子量大小。采用CCK-8法检测不同浓度的CTX-1和CTX-2对HSC-LX2和HL7702细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测CTX-1干预后HSC-LX2细胞周期的变化与CTX-1对HSC-LX2和HL7702细胞凋亡的影响。通过透射电镜观察CTX-1干预后HSC-LX2细...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱分离眼镜蛇毒粗毒Fig.1-1DEAE-SepharoseCL-6Banionexchangechromatographof
图 1-2 Sephadex G-50 凝胶柱分离阴离子交换柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 预装柱阳离子交换层析将 Spehadex G-50 分子筛层析中细胞毒性最High S 预装柱阳离子交换层析进一步分离纯化后1-3 所示。经检测发现第Ⅳ峰和第Ⅴ峰细胞毒性较透析冻干，保存于-20 ℃备用。
图 1-2 Sephadex G-50 凝胶柱分离阴离子交换柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 预装柱阳离子交换层析将 Spehadex G-50 分子筛层析中细胞毒性最强的第Ⅲ峰High S 预装柱阳离子交换层析进一步分离纯化后，共有六个1-3 所示。经检测发现第Ⅳ峰和第Ⅴ峰细胞毒性较强。收集第透析冻干，保存于-20 ℃备用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝星状细胞的活化机制—探寻肝纤维化新的诊断指标和治疗靶点[J]. 姜娜,平键,徐列明. 临床肝胆病杂志. 2019(03)
[2]细胞凋亡研究进展[J]. 吴佳怡. 当代化工研究. 2018(12)
[3]白藜芦醇调控细胞周期机制和抗肿瘤活性研究进展[J]. 薛慧颖,喻兆阳. 湖北民族学院学报(医学版). 2018(04)
[4]CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选[J]. 王瑾,马肖容,张王刚. 中国医药导报. 2018(23)
[5]miR-125a-5p通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移[J]. 杨玉玲,王照岩,杨志一,李洪利,尹崇高,刘雨清. 中国药理学通报. 2018(08)
[6]PI3K/AKT信号传导通路在恶性肿瘤中的研究进展[J]. 郭威,张冲,钟先荣. 河北医科大学学报. 2018(06)
[7]PI3K/Akt信号通路及其抑制剂的研究进展[J]. 王梦华,卢均坤. 医学信息. 2018(10)
[8]靶向肝星状细胞的肝纤维化治疗研究进展[J]. 靳雪源,赵平. 世界华人消化杂志. 2017(28)
[9]眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用[J]. 孙林,张学荣,蔡凤桃,王秀男,余雷,廖明,班建东. 基因组学与应用生物学. 2017(06)
[10]肝纤维化进程中细胞外基质对肝星状细胞的作用及机制研究进展[J]. 秦雨萌,陈胜华. 实用肝脏病杂志. 2017(03)
硕士论文
[1]熊果酸对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞NADPH氧化酶的活化及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的影响[D]. 陈涛.南昌大学 2014
[2]舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1抗肿瘤作用及机制[D]. 吴敏燕.广州医学院 2011
本文编号：2915716
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱分离眼镜蛇毒粗毒Fig.1-1DEAE-SepharoseCL-6Banionexchangechromatographof
图 1-2 Sephadex G-50 凝胶柱分离阴离子交换柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 预装柱阳离子交换层析将 Spehadex G-50 分子筛层析中细胞毒性最High S 预装柱阳离子交换层析进一步分离纯化后1-3 所示。经检测发现第Ⅳ峰和第Ⅴ峰细胞毒性较透析冻干，保存于-20 ℃备用。
图 1-2 Sephadex G-50 凝胶柱分离阴离子交换柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 预装柱阳离子交换层析将 Spehadex G-50 分子筛层析中细胞毒性最强的第Ⅲ峰High S 预装柱阳离子交换层析进一步分离纯化后，共有六个1-3 所示。经检测发现第Ⅳ峰和第Ⅴ峰细胞毒性较强。收集第透析冻干，保存于-20 ℃备用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝星状细胞的活化机制—探寻肝纤维化新的诊断指标和治疗靶点[J]. 姜娜,平键,徐列明. 临床肝胆病杂志. 2019(03)
[2]细胞凋亡研究进展[J]. 吴佳怡. 当代化工研究. 2018(12)
[3]白藜芦醇调控细胞周期机制和抗肿瘤活性研究进展[J]. 薛慧颖,喻兆阳. 湖北民族学院学报(医学版). 2018(04)
[4]CCK-8法在淋巴细胞增殖检测中最佳实验条件的筛选[J]. 王瑾,马肖容,张王刚. 中国医药导报. 2018(23)
[5]miR-125a-5p通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移[J]. 杨玉玲,王照岩,杨志一,李洪利,尹崇高,刘雨清. 中国药理学通报. 2018(08)
[6]PI3K/AKT信号传导通路在恶性肿瘤中的研究进展[J]. 郭威,张冲,钟先荣. 河北医科大学学报. 2018(06)
[7]PI3K/Akt信号通路及其抑制剂的研究进展[J]. 王梦华,卢均坤. 医学信息. 2018(10)
[8]靶向肝星状细胞的肝纤维化治疗研究进展[J]. 靳雪源,赵平. 世界华人消化杂志. 2017(28)
[9]眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用[J]. 孙林,张学荣,蔡凤桃,王秀男,余雷,廖明,班建东. 基因组学与应用生物学. 2017(06)
[10]肝纤维化进程中细胞外基质对肝星状细胞的作用及机制研究进展[J]. 秦雨萌,陈胜华. 实用肝脏病杂志. 2017(03)
硕士论文
[1]熊果酸对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞NADPH氧化酶的活化及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的影响[D]. 陈涛.南昌大学 2014
[2]舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1抗肿瘤作用及机制[D]. 吴敏燕.广州医学院 2011
本文编号：2915716
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2915716.html
