骨松强骨方含药血清对大鼠BMSCs增殖与成骨分化的影响

发布时间：2020-12-21 13:57

　　研究目的:本次主要以骨松强骨方对于肾阳虚血瘀型原发性骨质疏松症的疗效为基础,结合干细胞实验的研究成果,探索骨松强骨方对骨质疏松症治疗的作用机理。为临床新药的开发提供依据。研究方法:（1）采用全骨髓贴壁培养法分离出BMSCs。（2）制骨松强骨方含药血清和生理盐水对照血清,检测骨松强骨方含药血清对BMSCs增殖、成骨分化的影响（3）通过Real-Time PCR,检测骨松强骨方含药血清对BMSCs Runx-2、OPG细胞因子表达情况。研究结果:（1）采用全骨髓贴壁培养法,可以获得大量的具有较高活性的BMSCs（2）细胞增殖能力检测结果显示:骨松强骨方含药血清各组与生理盐水组相比,骨松强骨方含药血清可明显促进BMSCs增殖（P<0.05）。（3）进行成骨诱导后,骨松强骨方中、高剂量组对BMSCs成骨诱导的促进作用优于生理盐水组（P均<0.05）。高剂量组对SD大鼠BMSCs成骨分化的促进作用最好。骨松强骨方中、高剂量组的Runx-2、OP细胞因子的表达明显高于生理盐水组（P均<0.05）。结论:（1）骨松强骨方含药血清具有促进BMSCs的增殖和向成骨方向分化的作用。（2）... 

【文章来源】：安徽中医药大学安徽省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩写词表
文献研究
    1.1 现代医学对骨质疏松症的认识
        1.1.1 骨质疏松症的危害
        1.1.2 骨质疏松症的诊断
        1.1.3 骨质疏松症的治疗
    1.2 传统中医对骨质疏松症认识
    1.3 骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松症的理论依据
        1.3.1 骨髓间充质干细胞与骨质疏松症关系
        1.3.2 中医诱导骨髓间充质干细胞诱导为成骨细胞进展
    1.4 骨松强骨方
实验一 骨髓间充质干细胞分离、培养与鉴定
    2.1. 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 试剂配制
        2.1.3 仪器设备与耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的分离培养
        2.2.2 细胞鉴定
    2.3 实验结果
        2.3.1 BMSCs细胞形态
        2.3.2 BMSCs细胞成骨分化
        2.3.3 BMSCs细胞成脂分化
    2.4 小结
实验二 含药血清对BMSCs增殖与成骨分化的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要实验药物和试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2.实验方法
        3.2.1 骨松强骨方煎剂的制备
        3.2.2 含药血清的制备
        3.2.3 骨松强骨方含药血清对BMSCs增殖能力的影响
        3.2.4 骨松强骨方含药血清对BMSCs成骨分化的影响
        3.2.5 细胞内ALP活性测定
        3.2.6 碱性磷酸酶组织染色
        3.2.7 钙化结节染色（茜素红染色）
        3.2.8 实时定量PCR
        3.2.9 数据处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 BMSCs生长曲线
        3.3.2 BMSCs成骨诱导后形态特征
        3.3.3 细胞内ALP活性测定结果
        3.3.4 茜素红染色结果
        3.3.5 Runx-2 和OPG扩增情况
    3.4 小结
讨论
    4.1“益肾活血法”治疗骨质疏松症
        4.1.1“益肾活血法”理论基础
        4.1.2“益肾活血法”治疗
    4.2 中药血清药理学研究方法
        4.2.0 血清药理学的概念
        4.2.1 实验动物的选择
        4.2.2 给药剂量和方法
        4.2.3 服药和采血的时间
        4.2.4 实验中其他问题
    4.3 BMSCs体外分离、培养和鉴定
        4.3.1 骨髓间充质干细胞的体外细胞系的建立
        4.3.2 骨髓间充质干细胞的鉴定
        4.3.3 骨髓间充质干细胞成骨方向分化
    4.4 中药的研究
        4.4.1 中药对BMSCs的成骨分化的影响
        4.4.2 中药对BMSCs细胞Runx2表达的影响
        4.4.3 中药对BMSCs细胞OPG表达的影响
实验结论
参考文献
实验附图
综述 传统中药对原发性骨质疏松症治疗现代化的研究进展
    参考文献
致谢
个人简历
攻读学位期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨松强骨方治疗肾阳虚血瘀型原发性骨质疏松症疗效观察[J]. 朱静栋,孔西建,吴丹,李盈盈,叶进,毛春焕,王咪娜,王璘琳.  现代中西医结合杂志. 2017(04)
[2]骨髓间充质干细胞对继发性骨质疏松大鼠骨缺损愈合的影响[J]. 高翔,陈广谋,黄成硕,刘志军,曾荣,楚佳奇,李鹏.  海南医学. 2016(20)
[3]2型糖尿病、骨质疏松症、2型糖尿病并发骨质疏松症患者血清胰岛素样生长因子-1的检测及意义[J]. 康燕蓉,顾佩莉.  海南医学院学报. 2016(18)
[4]淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程BMP-2/RunX2/OSX通路的影响[J]. 梁广胜,陈伟才,殷嫦嫦,殷明,曹雪琴.  中国中西医结合杂志. 2016(05)
[5]中药血清药理学研究进展[J]. 陈健媚,郭姣.  广东药学院学报. 2016(03)
[6]补肾活血方对骨质疏松症模型大鼠骨密度及BMP-2蛋白表达影响实验研究[J]. 姜坤,周强,尚德阳,孙鑫,邢克欣,林庶茹,邓洋洋.  辽宁中医药大学学报. 2016(05)
[7]巴戟天水提取物对间充质干细胞成骨分化中OPG/RANKL表达的影响[J]. 吴国志,欧积壮,吴昌新.  海南医学. 2016(03)
[8]Micro-CT评价Runx2基因修饰的骨髓间充质干细胞静脉移植促进缺血性股骨头坏死兔坏死股骨头修复效果[J]. 许海甲,李章华,侯煜东,方卫军,唐欢.  生物技术通讯. 2015(06)
[9]骨质疏松症的中医治疗研究进展[J]. 杨志鹏,魏成建,龚双全.  中国骨质疏松杂志. 2015(11)
[10]锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的改善作用[J]. 史平,朱薇,李晓鸣.  第三军医大学学报. 2015(23)

博士论文
[1]鹿角盘提取物的体外抗骨质疏松作用[D]. 吴菲菲.大连理工大学 2013

硕士论文
[1]骨松强骨颗粒制备工艺及质量标准的研究[D]. 牛琼琼.河南中医学院 2014
[2]补肾中药有效成分对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[D]. 陈谊敬.辽宁中医药大学 2013
[3]鹿角冒对大鼠骨质疏松症治疗作用的研究[D]. 陆燕.大连理工大学 2010



本文编号：2929944