甲基莲心碱通过抑制线粒体ROS保护脂多糖诱导的急性呼吸窘迫综合征内皮多糖包被损伤
发布时间：2020-12-26 04:22
目的:本实验以C57BL/6小鼠和人脐静脉内皮细胞作为研究对象,探讨甲基莲心碱（Nef）对ARDS中肺损伤的保护作用及机制。方法:1.体内实验:将健康雄性C57BL/6小鼠（周龄:8-10周）随机分为四组,分别为:Control组、LPS组、LPS+Nef组、Nef组。LPS+Nef组和Nef组小鼠每天给予Nef溶液20 mg/kg/d灌胃处理,Control组和LPS组小鼠接受同等剂量的生理盐水灌胃处理。每组小鼠均连续给予灌胃处理各7天。末次灌胃处理2 h后,给予LPS组和LPS+Nef组小鼠LPS（20 mg/kg）腹腔注射建立小鼠ARDS损伤模型,Control组和Nef组小鼠接受同等剂量的生理盐水腹腔注射。留取小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液、血清用于进一步研究。应用苏木精-伊红染色技术观察肺组织病理形态的改变;应用伊文思蓝染色技术检测肺毛细血管通透性改变;应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定肺组织中MDA、SOD水平变化:肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;应用Western blot技术测定LPS诱导下NF-KB信号通路中关键调节蛋白（NF-kB/P6...
【文章来源】：滨州医学院山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．甲基莲心碱对ＡＲＤＳ小鼠肺血管通透性的影响
加药组（Ｎｅｆ组）与正常对照组相比，内皮细胞重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１表达量无明??显改变（Ｐ＞〇．〇５）。??同时我们进一步检测了细胞培养液中脱落的多糖包被含量变化，如图５Ｅ和５Ｆ??所示，与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）脱落的ＨＳ、ＳＤＣ－１??的量显著增加（Ｐ＜〇．〇５），与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ组）??脱落的ＨＳ、ＳＤＣ－１的量明显降低（ＰＣ０．０５）。??＾?ＩＩＳ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－Ｉ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍ?■■■??■■■??ｍｍｍ：■■■??編：ＬＩｌ??＼广、⑴．＼广ｃ？＾°＇?＇ＶＳｓｃ＜＊Ｖ．＇，Ｓ??图５．甲基莲心碱对ＬＰＳ诱导的内皮细胞ＨＳ和ＳＤＣ－１表达的影响。??Ｆｉｇｕｒｅ５．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＨＵＶＥＣｓ?ｉｎｊｕｒｙ．??Ｃｏｍｍｉ：正常对照组；ＬＰＳ：模型组；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基莲心碱预处理组；Ｎｅｆ：甲基莲心碱单加??药组；＃Ｐ＜０．０５，与正常对照组相比较；ＹＣＯ．ＯＳ，与ＬＰＳ组相比较，ＷＣＯＷ，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ＬＰＳ?ｇｒｏｕｐ；??６．甲基莲心碱缓解ＬＰＳ诱导的ＡＲＤＳ小鼠多糖包被的降解??我们进一步观察了甲基莲心碱对小鼠肺多糖包被的作用。如图６Ａ和６Ｃ所示，??与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）肺内皮细胞多糖包被重要组??分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表达量显著降低
?显低于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??组）肺内皮细胞多糖包被重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表达量增加，图６Ｂ和６Ｄ荧光??半定量结果显示荧光强度高于模型组（Ｐ＜〇．〇５）。甲基莲心碱单加药组（Ｎｅｆ组）??与正常对照组相比，内皮细胞重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１表达量无明显改变，荧光半定??量结果无统计学差异（Ｐ＞〇．〇５）。??同时我们进一步检测了?ＡＲＤＳ小鼠血清中多糖包被含量变化，如图６Ｅ和６Ｆ??所示，与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、??ＳＤＣ－１的含量显著增加（尸＜０．０５），与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??组）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、ＳＤＣ－１的含量明显降低（Ｐ＜０．０５）。??Ａ?ＩＩＳ?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡ?ＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－１?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍｍｍｍｍｍｍ??■■ｈ?ｍｍｍｍ??■ｉ■■國?＿■■圓??—國??ｌｉｉｉｉｉｉｉｙＬｋ??图６．甲基莲心碱对ＡＲＤＳ小鼠肺多糖包被表达的影响。??Ｆｉｇｕｒｅ?６．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＡＲＤＳ．??Ｃｏｎｔｒｏｌ：正常对照组；ＬＰＳ：模型组；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基莲心碱预处理组；Ｎｅｆ：甲基莲心碱单加??药组；＃Ｐ＜０．０５，与正常对照组相比较；‘ＰＣＯ．ＯＳ，与ＬＰＳ组相比较，＃Ｐ＜０．０５，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５
本文编号：2939027
【文章来源】：滨州医学院山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．甲基莲心碱对ＡＲＤＳ小鼠肺血管通透性的影响
加药组（Ｎｅｆ组）与正常对照组相比，内皮细胞重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１表达量无明??显改变（Ｐ＞〇．〇５）。??同时我们进一步检测了细胞培养液中脱落的多糖包被含量变化，如图５Ｅ和５Ｆ??所示，与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）脱落的ＨＳ、ＳＤＣ－１??的量显著增加（Ｐ＜〇．〇５），与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ组）??脱落的ＨＳ、ＳＤＣ－１的量明显降低（ＰＣ０．０５）。??＾?ＩＩＳ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－Ｉ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍ?■■■??■■■??ｍｍｍ：■■■??編：ＬＩｌ??＼广、⑴．＼广ｃ？＾°＇?＇ＶＳｓｃ＜＊Ｖ．＇，Ｓ??图５．甲基莲心碱对ＬＰＳ诱导的内皮细胞ＨＳ和ＳＤＣ－１表达的影响。??Ｆｉｇｕｒｅ５．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＨＵＶＥＣｓ?ｉｎｊｕｒｙ．??Ｃｏｍｍｉ：正常对照组；ＬＰＳ：模型组；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基莲心碱预处理组；Ｎｅｆ：甲基莲心碱单加??药组；＃Ｐ＜０．０５，与正常对照组相比较；ＹＣＯ．ＯＳ，与ＬＰＳ组相比较，ＷＣＯＷ，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ＬＰＳ?ｇｒｏｕｐ；??６．甲基莲心碱缓解ＬＰＳ诱导的ＡＲＤＳ小鼠多糖包被的降解??我们进一步观察了甲基莲心碱对小鼠肺多糖包被的作用。如图６Ａ和６Ｃ所示，??与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）肺内皮细胞多糖包被重要组??分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表达量显著降低
?显低于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??组）肺内皮细胞多糖包被重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表达量增加，图６Ｂ和６Ｄ荧光??半定量结果显示荧光强度高于模型组（Ｐ＜〇．〇５）。甲基莲心碱单加药组（Ｎｅｆ组）??与正常对照组相比，内皮细胞重要组分ＨＳ、ＳＤＣ－１表达量无明显改变，荧光半定??量结果无统计学差异（Ｐ＞〇．〇５）。??同时我们进一步检测了?ＡＲＤＳ小鼠血清中多糖包被含量变化，如图６Ｅ和６Ｆ??所示，与正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）相比，模型组（ＬＰＳ组）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、??ＳＤＣ－１的含量显著增加（尸＜０．０５），与ＬＰＳ组相比，甲基莲心碱预处理组（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??组）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、ＳＤＣ－１的含量明显降低（Ｐ＜０．０５）。??Ａ?ＩＩＳ?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡ?ＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－１?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍｍｍｍｍｍｍ??■■ｈ?ｍｍｍｍ??■ｉ■■國?＿■■圓??—國??ｌｉｉｉｉｉｉｉｙＬｋ??图６．甲基莲心碱对ＡＲＤＳ小鼠肺多糖包被表达的影响。??Ｆｉｇｕｒｅ?６．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＡＲＤＳ．??Ｃｏｎｔｒｏｌ：正常对照组；ＬＰＳ：模型组；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基莲心碱预处理组；Ｎｅｆ：甲基莲心碱单加??药组；＃Ｐ＜０．０５，与正常对照组相比较；‘ＰＣＯ．ＯＳ，与ＬＰＳ组相比较，＃Ｐ＜０．０５，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５
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