中药关节腔灌注对激素型股骨头坏死MSCs调控机制的研究

发布时间：2020-12-29 15:50

　　目的:通过建立SANFH兔模型,观察和评价中药活骨注射液对MSCs增殖分化的影响,以及中药灌注配合MSCs移植对早期SANFH兔股骨头的修复作用,并探讨其作用机理。方法:①选用成年雄性新西兰大白兔,马血清加激素造模,造模成功后双下肢股骨和胫骨,提取间充质干细胞。将传代所得细胞分为三组:实验组（活骨注射液+诱导剂诱导组）,对照组（诱导组剂,）和空白组（继续适用原培养基培养）。描绘MTT增殖曲线,计算碱性磷酸酶活性、Von Kossa法计算钙化结节。检测三组转染MSCs的迁移能力,RT—PCR检测MMP-2mRNA,观察活骨灌注液含药血清对体外MSCs增殖、迁移和成骨分化的影响。②将新西兰大白兔随机分为四组:空白组、模型组、对照组及实验组。对照组单纯向坏死区移植MSCs,实验组采用活骨注射液髋关节灌注治疗联合MSCs移植。免疫组织化学SABC法检测坏死股骨头样本中MMP-2、VEGF、TGF-β 1 表达;RT—PCR 检测 MMP-2mRNA、VEGFmRNA、TGF-β1mRNA表达。Von Kossa染色观察钙结节出现时间和数量;HE染色显微镜下观察股骨头修复情况。观察活骨灌注液股骨... 

【文章来源】：黑龙江中医药大学黑龙江省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：博士

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中英文缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    1. 现代医学对股骨头缺血性坏死的认识
        1.1 流行病学研究
        1.2 现代医学对SANFH发病机理的研究
        1.3 现代医学防治SANFH的研究进展
    2. 祖国医学对股骨头坏死的认识
        2.1 祖国医学对股骨头缺血性坏死病名的认识
        2.2 祖国医学对股骨头坏死病因病机的认识
        2.3 辩证论治
        2.4 中医药防治SANFH的研究进展
实验研究
    实验1 活骨注射液体外诱导SANFH兔MSCs增殖、迁移及成骨分化能力影响的研究
        1. 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验试剂
            1.3 实验仪器
        2. 研究方法
            2.1 SANFH兔模型的建立
            2.2 细胞诱导MSCs增殖及成骨分化
            2.3 活骨注射液对MSCs迁移能力的影响
            2.4 统计学分析
        3. 结果
            3.1 形态观察
            3.2 影像学检查
            3.3 细胞表面标记物检测结果
            3.4 细胞形态学观察
            3.5 细胞增殖结果
            3.6 碱性磷酸酶检测结果
            3.7 钙化结节的计算
            3.8 MMP-2 mRNA检测结果
    实验2 活骨注射液体关节腔灌注结合MSCS移植对SANFH兔VEGF/TGF-β1/MMP-2影响的研究
        1. 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验试剂
            1.3 实验仪器
        2. 研究方法
            2.1 实验分组及造模方法
            2.2 MSCs制备
            2.3 各组处理措施方法
            2.4 细胞移植
            2.5 标本取材及处理方法
        3. 实验结果
            3.1 体重及形态观察
            3.2 形态观察
            3.3 影像学检查
            3.4 股骨头病理组织学变化
            3.5 VEGF、TGF-β1、MMP-2 mRNA的表达
            3.6 免疫组化检测结果
讨论
    1. 中医药对SANFH的防治理论
    2. 动物模型的建立
    3. 活骨注射液对SANFH的防治作用的探讨
    4. 活骨注射液对MSCs增殖、成骨分化、及迁移能力影响的结果分析
        4.1 活骨注射液对MSCs增殖的影响
        4.2 活骨注射液对MSCs成骨分化的影响
        4.3 活骨注射液对MSCs迁移能力的影响
    5. 活骨注射液联合MSCs移植对SANFH治疗作用的分析
        5.1 活骨注射液配合MSCs移植对VEGF的影响
        5.2 活骨注射液配合MSCs移植对TGF-β1的影响
        5.3 活骨注射液配合MSCs移植对MMP-2的影响
结论
致谢
参考文献
个人简介



本文编号：2945895