白藜芦醇基于自噬流调控的抗心肌细胞缺氧/复氧损伤研究
发布时间:2021-01-01 22:17
目的心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)涉及钙超载、炎症反应、线粒体损伤、细胞凋亡与细胞自噬等多种分子机制,其中自噬是近年来抗MIRI的研究热点。自噬是一个动态变化的过程,自噬这一完整的动态变化过程被称为自噬流。白藜芦醇是一种多酚类化合物,近年研究发现其可缓解MIRI。本课题组前期研究发现,白藜芦醇可抑制缺氧心肌细胞内乳酸脱氢酶的漏出,增加抗氧化酶GSH-Px的表达水平,减轻心肌细胞缺氧损伤;进一步研究发现,白藜芦醇缓解心肌细胞/缺氧复氧损伤可能与调控自噬有关。在此基础上,本研究以自噬流为切入点,探寻缺氧/复氧损伤心肌细胞内自噬流的状态,考察白藜芦醇对缺氧/复氧损伤心肌细胞的药效,探究其药效与调控自噬流的关系,为白藜芦醇防治MIRI的研究提供依据。方法和结果首先通过体外实验培养大鼠乳鼠心肌细胞,分别于三气培养箱与CO2培养箱中进行缺氧12 h、复氧12 h的造模处理,复制心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。1.缺氧/复氧损伤心肌细胞内的自噬流的研究借助自噬流抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)考察心肌细胞自噬流状态,细胞融合率达到80%后,将其分为如下4组:正常对照组(Control组)、正...
【文章来源】:中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】:92 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
"1自噬流示意由fuel
停留在0噻溶酶体形成前,在自噬抑制剂有或无的情况卜,通过检,可以评价细胞内自嗤流状态。氯喹(chjoroquine.?CQ)、巴弗洛霉素].?bafAl)、E64d以及胃酶抑素A均为溶_体阻断齐IJ,可抑制自噬溶体降解,它们是常用的检测自嘍流的工具药|28#M|。例如,考察药物(流的影响,选取bafAl作为自噬流抑制剂,通过Western?Blot法测LC图1-2所示的结果,则分析如下:Compound+bafAl组-1;;?Control+bafAl,表明药物可促进自哩体形成,激活自哩:Compouond组与Control则只有可能是自噬体被降解,自噬流活化,因此我们可以得到如下结自嘍,活化自噬流。??Control?Compound??
第三节实验结果??一、大鼠乳鼠心肌细胞免疫荧光鉴定结果??由抗横纹肌肌动蛋白多克隆抗体免疫荧光染色后,于倒置荧光显微镜下观察,其中横??纹肌肌动蛋白呈绿色,细胞核呈蓝色,细胞形态和轮廓较清晰,可观察到呈三角形或梭形??的心肌细胞,如图2-1所示。横纹肌肌动蛋白多克隆抗体的阳性表达细胞的比率可达95%,??表明心肌细胞纯度较高,可用于下一步实验。??FITC?DAPI?Merge??
【参考文献】:
期刊论文
[1]自噬流的检测方法[J]. 吕晓希,胡卓伟. 药学学报. 2016(01)
[2]白藜芦醇对心肌细胞缺氧性损伤的作用[J]. 周秋兰,刘丹妮,古丽丽,朱丹,黄秀兰. 中央民族大学学报(自然科学版). 2010(01)
[3]白藜芦醇对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用[J]. 黄秀兰,周秋兰,古丽丽,刘丹妮,李志勇,刘庆山,朱丹. 中国中药杂志. 2010(01)
本文编号:2952083
【文章来源】:中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】:92 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
"1自噬流示意由fuel
停留在0噻溶酶体形成前,在自噬抑制剂有或无的情况卜,通过检,可以评价细胞内自嗤流状态。氯喹(chjoroquine.?CQ)、巴弗洛霉素].?bafAl)、E64d以及胃酶抑素A均为溶_体阻断齐IJ,可抑制自噬溶体降解,它们是常用的检测自嘍流的工具药|28#M|。例如,考察药物(流的影响,选取bafAl作为自噬流抑制剂,通过Western?Blot法测LC图1-2所示的结果,则分析如下:Compound+bafAl组-1;;?Control+bafAl,表明药物可促进自哩体形成,激活自哩:Compouond组与Control则只有可能是自噬体被降解,自噬流活化,因此我们可以得到如下结自嘍,活化自噬流。??Control?Compound??
第三节实验结果??一、大鼠乳鼠心肌细胞免疫荧光鉴定结果??由抗横纹肌肌动蛋白多克隆抗体免疫荧光染色后,于倒置荧光显微镜下观察,其中横??纹肌肌动蛋白呈绿色,细胞核呈蓝色,细胞形态和轮廓较清晰,可观察到呈三角形或梭形??的心肌细胞,如图2-1所示。横纹肌肌动蛋白多克隆抗体的阳性表达细胞的比率可达95%,??表明心肌细胞纯度较高,可用于下一步实验。??FITC?DAPI?Merge??
【参考文献】:
期刊论文
[1]自噬流的检测方法[J]. 吕晓希,胡卓伟. 药学学报. 2016(01)
[2]白藜芦醇对心肌细胞缺氧性损伤的作用[J]. 周秋兰,刘丹妮,古丽丽,朱丹,黄秀兰. 中央民族大学学报(自然科学版). 2010(01)
[3]白藜芦醇对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用[J]. 黄秀兰,周秋兰,古丽丽,刘丹妮,李志勇,刘庆山,朱丹. 中国中药杂志. 2010(01)
本文编号:2952083
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