桃叶珊瑚苷基于NF-κB通路抑制LPS/IFN-γ诱导的BV2小胶质细胞炎症作用的研究
发布时间：2021-01-02 00:40
小胶质细胞是中枢神经系统中重要的免疫细胞。激活的小胶质细胞会促进多种促炎细胞因子、趋化因子及作用酶的转录和翻译,并分泌到细胞外部,作用于其他小胶质细胞与神经元,引起小胶质细胞进一步激活,神经元损伤死亡,进而诱发神经炎症发生,损伤中枢神经系统,这也是常见的神经退行性疾病阿尔兹海默症、帕金森病的引发因素之一。抑制小胶质细胞激活是目前研究开发治疗神经退行性疾病的重要方向之一,有效的抑制小胶质细胞激活的药物的发现,对于治疗和减缓神经退行性疾病具有重要作用。桃叶珊瑚苷（AU）是一种中草药中提取出的天然活性物质,广泛存在于杜仲、车前草、党参、黄芪等常见重要中药。本课题中利用LPS/IFN-g诱导BV2细胞发生激活,并使用桃叶珊瑚苷作用,研究AU对BV2细胞激活的抑制情况及作用机制。本课题研究内容及结果如下:（1）BV2细胞模型构建及AU细胞毒性分析:MTT法检测未发现AU明显具有细胞毒性。并确定最终构建BV2细胞炎症模型的给药浓度为0.1mg/mL LPS+10 U/mL IFN-γ。（2）AU对BV2细胞炎症模型的作用研究:通过检测细胞活力、一氧化氮释放量及一氧化氮合酶的活性、细胞培养上清中的白...
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
1.1 神经炎症
1.2 小胶质细胞
1.2.1 小胶质细胞与神经炎症
1.2.2 小胶质细胞可能的激活机制
1.2.3 小胶质细胞产生的神经毒性物质
1.3 小胶质细胞激活引发的神经退行性疾病
1.3.1 阿尔兹海默症
1.3.2 帕金森病
1.3.3 肌萎缩性脊髓侧索硬化症
1.4 桃叶珊瑚苷
1.4.1 抗炎作用
1.4.2 神经保护作用
1.4.3 抗氧化作用
1.4.4 保肝作用
1.4.5 抗糖尿病作用
1.4.6 促进骨形成
1.5 本课题的研究目的、内容及意义
1.5.1 本课题研究目的及意义
1.5.2 本课题的研究内容
2 BV2 细胞炎症模型构建及桃叶珊瑚苷对其作用研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验细胞株
2.2.2 主要实验试剂
2.2.3 主要试剂及配方
2.2.4 主要仪器
2.3 实验方法
2.3.1 MTT法检测细胞活力
2.3.2 Griess法检测NO
2.3.3 ROS活性氧检测
2.3.4 DAPI染色
2.3.5 苏木素-伊红染色
2.4 统计学分析
2.5 实验结果与分析
2.5.1 AU对 BV2 细胞毒性作用
2.5.2 AU对 H9C2及SH-SY5Y细胞毒性作用
2.5.3 BV2 细胞炎症模型构建
2.5.4 AU对 BV2 细胞炎症模型细胞活力影响
2.5.5 AU对 BV2 细胞炎症模型ROS水平影响
2.5.6 AU对 BV2 细胞炎症模型的形态学影响
2.6 讨论
2.7 小结
3 桃叶珊瑚苷对炎症模型中促炎细胞因子及介质的抑制作用
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验细胞株
3.2.2 主要实验试剂
3.2.3 主要试剂及配方
3.2.4 主要仪器
3.3 实验方法
3.3.1 Griess法检测NO
3.3.2 ELISA法检测炎症因子
3.3.3 细胞蛋白提取
3.3.4 蛋白定量
3.3.5 NOS含量检测
3.3.6 实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）
3.4 统计学分析
3.5 实验结果与分析
3.5.1 AU对 BV2 细胞炎症模型NO释放量的影响
3.5.2 AU对 BV2 细胞炎症模型促炎细胞因子释放的影响
3.5.3 AU对 BV2 细胞炎症模型NOS的影响
3.5.4 AU对 BV2 细胞炎症模型的促炎细胞因子mRNA水平的影响
3.6 讨论
3.7 小结
4 桃叶珊瑚苷对BV2 细胞炎症抑制作用机制研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验细胞株
4.2.2 主要实验试剂
4.2.3 主要试剂及配方
4.2.4 主要仪器
4.3 实验方法
4.3.1 细胞核蛋白与细胞浆蛋白提取
4.3.2 免疫印迹法
4.3.3 分子对接
4.4 统计学分析
4.5 实验结果与分析
4.5.1 AU对 BV2 细胞炎症模型的NF-κB通路的影响
4.5.2 AU抑制NF-κB通路的靶点
4.6 讨论
4.7 小结
结论
参考文献
附录A 缩略词表
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Tregs通过IL-10/STAT3诱导小胶质细胞M2型极化减轻脑出血炎症损伤[J]. 李秋萌,张文倩,谭赢,赵贯建,张翔,张鹏,程远. 第三军医大学学报. 2018(16)
本文编号：2952304
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
1.1 神经炎症
1.2 小胶质细胞
1.2.1 小胶质细胞与神经炎症
1.2.2 小胶质细胞可能的激活机制
1.2.3 小胶质细胞产生的神经毒性物质
1.3 小胶质细胞激活引发的神经退行性疾病
1.3.1 阿尔兹海默症
1.3.2 帕金森病
1.3.3 肌萎缩性脊髓侧索硬化症
1.4 桃叶珊瑚苷
1.4.1 抗炎作用
1.4.2 神经保护作用
1.4.3 抗氧化作用
1.4.4 保肝作用
1.4.5 抗糖尿病作用
1.4.6 促进骨形成
1.5 本课题的研究目的、内容及意义
1.5.1 本课题研究目的及意义
1.5.2 本课题的研究内容
2 BV2 细胞炎症模型构建及桃叶珊瑚苷对其作用研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验细胞株
2.2.2 主要实验试剂
2.2.3 主要试剂及配方
2.2.4 主要仪器
2.3 实验方法
2.3.1 MTT法检测细胞活力
2.3.2 Griess法检测NO
2.3.3 ROS活性氧检测
2.3.4 DAPI染色
2.3.5 苏木素-伊红染色
2.4 统计学分析
2.5 实验结果与分析
2.5.1 AU对 BV2 细胞毒性作用
2.5.2 AU对 H9C2及SH-SY5Y细胞毒性作用
2.5.3 BV2 细胞炎症模型构建
2.5.4 AU对 BV2 细胞炎症模型细胞活力影响
2.5.5 AU对 BV2 细胞炎症模型ROS水平影响
2.5.6 AU对 BV2 细胞炎症模型的形态学影响
2.6 讨论
2.7 小结
3 桃叶珊瑚苷对炎症模型中促炎细胞因子及介质的抑制作用
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验细胞株
3.2.2 主要实验试剂
3.2.3 主要试剂及配方
3.2.4 主要仪器
3.3 实验方法
3.3.1 Griess法检测NO
3.3.2 ELISA法检测炎症因子
3.3.3 细胞蛋白提取
3.3.4 蛋白定量
3.3.5 NOS含量检测
3.3.6 实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）
3.4 统计学分析
3.5 实验结果与分析
3.5.1 AU对 BV2 细胞炎症模型NO释放量的影响
3.5.2 AU对 BV2 细胞炎症模型促炎细胞因子释放的影响
3.5.3 AU对 BV2 细胞炎症模型NOS的影响
3.5.4 AU对 BV2 细胞炎症模型的促炎细胞因子mRNA水平的影响
3.6 讨论
3.7 小结
4 桃叶珊瑚苷对BV2 细胞炎症抑制作用机制研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验细胞株
4.2.2 主要实验试剂
4.2.3 主要试剂及配方
4.2.4 主要仪器
4.3 实验方法
4.3.1 细胞核蛋白与细胞浆蛋白提取
4.3.2 免疫印迹法
4.3.3 分子对接
4.4 统计学分析
4.5 实验结果与分析
4.5.1 AU对 BV2 细胞炎症模型的NF-κB通路的影响
4.5.2 AU抑制NF-κB通路的靶点
4.6 讨论
4.7 小结
结论
参考文献
附录A 缩略词表
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Tregs通过IL-10/STAT3诱导小胶质细胞M2型极化减轻脑出血炎症损伤[J]. 李秋萌,张文倩,谭赢,赵贯建,张翔,张鹏,程远. 第三军医大学学报. 2018(16)
本文编号：2952304
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2952304.html
