熊果酸经FXR调控OATP1B3的表达及其机制研究

发布时间：2021-01-05 02:29

　　背景:熊果酸（Ursolic acid,UA）是存在于天然植物中的一种三萜类化合物,具有镇静、抗炎、调血脂和抗菌等多种药理作用。有机阴离子转运多肽1B3（OATP1B3）属于溶质载体家族型转运体,其转录翻译受FXR、PXR、CAR、HNF-1α等核受体调控。课题组前期研究表明,UA可以增加OATP1B1的转运功能且能上调其mRNA和蛋白的表达,而转运体OATP1B3和OATP1B1有80%氨基酸同源性,且这两种转运体有很多相同的底物,那么UA是否也能改变OATP1B3表达从而影响其底物的摄取转运?作用机制如何呢?这值得我们深入探讨。目的:1、研究UA对转运体OATP1B3 mRNA及蛋白表达的影响。2、研究UA对核受体FXR介导OATP1B3调控通路的影响及其机制。方法:1、使用RT-qPCR和Western blot等实验技术,分别考察UA对OATP1B3、FXR、CAR、PXR和HNF-1αmRNA和蛋白表达的影响。2、采用LC-MS/MS法测定替米沙坦的浓度,探究在HepG2细胞中UA对OATP1B3转运功能的影响。3、运用双荧光素酶报告基因法,考察UA对FXR作用于OATP1B... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 mRNA和蛋白表达的影响
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要药品
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 主要工作液的配置
        2.2.2 HepG2 细胞的培养及其生长曲线的绘制
        2.2.3 UA 对 HepG2 细胞的毒性实验
        2.2.4 细胞蛋白含量测定
        2.2.5 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 mRNA表达的影响
        2.2.6 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 蛋白表达的影响
        2.2.7 数据处理与统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 HepG2 细胞形态学及生长曲线
        2.3.2 UA对 HepG2 细胞的细胞毒性
        2.3.3 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 mRNA表达的影响
        2.3.4 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第3章 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 转运功能的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要药品
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器和设备
    3.2 方法
        3.2.1 主要工作液的配制
        3.2.2 HepG2 细胞的培养
        3.2.3 TMST 对 HepG2 细胞的毒性实验
        3.2.4 细胞蛋白含量测定
        3.2.5 细胞样品中TMST的含量及方法学测定
        3.2.6 TMST在 HepG2 细胞中摄取条件的探索
        3.2.7 UA对 HepG2 转运TMST的影响
        3.2.8 数据处理与统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 HepG2 细胞形态学及生长曲线
        3.3.2 TMST对 HepG2 细胞的细胞毒性
        3.3.3 细胞样品中TMST浓度测定的方法学评价结果
        3.3.4 TMST在 HepG2 细胞中摄取条件的探索结果
        3.3.5 UA对 HepG2 细胞转运替米沙坦的影响
    3.4 讨论
第4章 UA对 HepG2 细胞中OATP1B3 调控影响的机制
    4.1 材料
        4.1.1 细胞株和质粒
        4.1.2 主要药品
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 细胞的培养
        4.2.3 核受体的筛选
        4.2.4 UA对 FXR mRNA和蛋白表达的影响
        4.2.5 质粒的构建、提取及转染
        4.2.6 双荧光素酶报告基因活性的检测
        4.2.7 HepG2 细胞质粒转染条件的摸索
        4.2.8 HepG2 细胞中基于FXR-OATP1B3 双荧光素酶报告基因模型的验证
        4.2.9 UA对HepG2 细胞中FXR转录调控OATP1B3 报告基因的影响
        4.2.10 构建沉默FXR的 HepG2 细胞模型
        4.2.11 UA对沉默FXR的 HepG2 细胞中OATP1B3 mRNA和蛋白表达的影响
        4.2.12 数据处理与统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 UA对 HepG2 细胞中FXR、PXR、HNF-1α与 CAR mRNA表达的影响
        4.3.2 UA对 HepG2 细胞中FXR、PXR、HNF-1α与 CAR蛋白表达的影响
        4.3.3 利福平和GW4064对OATP1B3 mRNA和蛋白表达的影响
        4.3.4 UA对 HepG2 细胞中FXR mRNA和蛋白表达的影响
        4.3.5 基于FXR-OATP1B3 双荧光素酶报告基因模型的鉴定
        4.3.6 UA对瞬时共转染FXR的 HepG2 细胞中OATP1B3 报告基因的的影响
        4.3.7 沉默FXR的 HepG2 细胞模型的鉴定
        4.3.8 UA对沉默FXR的 HepG2 细胞中OATP1B3 mRNA表达的影响
        4.3.9 UA对沉默FXR的 HepG2 细胞中OATP1B3 蛋白表达的影响
    4.4 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：2957838