银杏双黄酮对高糖致微血管内皮细胞炎症反应的保护作用及机制研究

发布时间：2021-01-12 06:49

　　目的研究银杏双黄酮对高糖致人微血管内皮细胞（HMEC）炎症反应的干预作用及其可能的分子机制。方法 MTT比色法检测细胞活力,采用ELISA检测细胞培养上清中可溶性黏附分子ICAM-1和炎症介质（IL-6、TNF-α）的含量变化;荧光免疫法和流式细胞仪测定HMEC细胞表面ICAM-1的表达;双荧光素酶报告基因检测NF-κB p65核内转录活性;Western blot检测NF-κB p65及p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2的表达水平。结果 HMEC暴露于高糖后,NF-κB信号通路活化,NF-κB p65磷酸化及核内转录活性明显上调,HMEC表达ICAM-1和TNF-α、IL-6明显升高,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值出现上调。1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7 mol·L^-1的银杏双黄酮对上述炎症反应相关指标的上调均有明显的干预作用,且呈现一定的量效关系。结论银杏双黄酮对高糖刺激HMEC炎症反应有明显的干预作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化,从而降低炎症反应水平有关。 

【文章来源】：中国药理学通报. 2020,36(10)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 试剂
    1.2 仪器
2 方法
    2.1 HMEC细胞培养
    2.2 MTT法检测细胞活力
    2.3 高糖对HMEC细胞粘附分子和炎症介质表达的影响
    2.4 银杏双黄酮对高糖损伤HMEC细胞细胞粘附分子表达的影响
        2.4.1 ELISA检测细胞培养上清中ICAM-1的表达
        2.4.2 流式细胞仪检测HMEC表面ICAM-1的表达
        2.4.3 免疫荧光观察银杏双黄酮对HG刺激HMEC表达ICAM-1的影响
    2.5 银杏双黄酮对高糖损伤HMEC细胞炎症介质表达的影响
    2.6 NF-κB核转录活性检测
        2.6.1 质粒制备
        2.6.2 双荧光素报告基因检测
    2.7 Western blot 检测细胞凋亡、NF-κB相关蛋白的表达
    2.8 统计学分析
3 结果
    3.1 HG对HMEC细胞活力的影响
    3.2 HG对HMEC表达相关炎症反应分子的影响
        3.2.1 HG对HMEC表达ICAM-1的影响
        3.2.2 HG对HMEC表达IL-6的影响
        3.2.3 HG对HMEC表达TNF-α的影响
    3.3 银杏双黄酮对高糖损伤HMEC细胞粘附分子和炎症介质表达表达的影响
        3.3.1 银杏双黄酮对HMEC表达ICAM-1的影响
            3.3.1.1 ELISA检测细胞培养上清中ICAM-1的表达
            3.3.1.2 流式细胞仪检测HMEC细胞表面ICAM-1表达
            3.3.1.3 免疫荧光观察HMEC表面ICAM-1的表达
        3.3.2 银杏双黄酮对HMEC表达IL-6的影响
        3.3.3 银杏双黄酮对HMEC表达TNF-α的影响
    3.4 银杏双黄酮对高糖损伤HMEC细胞致NF-κB转录活性的影响
    3.5 银杏双黄酮对NF-κB、凋亡相关蛋白表达的影响
        3.5.1 银杏双黄酮对NF-κB p65蛋白表达及磷酸化的影响
        3.5.2 银杏双黄酮对凋亡相关蛋白表达的影响
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]川芎嗪对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应的干预作用[J]. 李娇,郭静,李敏,孙黔云.  中国药理学通报. 2019(01)
[2]槲皮素及其衍生物对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应的干预作用[J]. 朱芳娟,李敏,杨铭,孙黔云,杨庆雄.  中国药理学通报. 2018(11)
[3]补体旁路激活致内皮细胞纤溶凝血功能的改变及干预研究[J]. 李敏,路青瑜,李亚男,孙黔云.  中国药理学通报. 2017(10)



本文编号：2972372