蝎毒抗癌多肽对肺癌干细胞样细胞特性影响的初步研究

发布时间：2021-02-15 13:57

　　研究目的本实验通过研究蝎毒抗癌多肽（PESV）对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡、干性的影响,以及对荷瘤裸鼠抗肿瘤作用的研究,探讨蝎毒抗癌多肽抑制肺癌的作用机制,为靶向治疗肺癌和开发新型治疗药物提供理论基础。研究方法1.A549细胞培养A549细胞培养于含10%FBS的RPMI1640完全培养基中,放置于37℃、5%CO₂培养箱中进行培养,等到细胞长到80%的汇合度时,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶进行消化,常规传代。2.悬浮细胞球培养和肺癌A549干细胞样细胞鉴定（1）A549细胞球培养。配制无血清培养基,DMEM/F12培养基中添加20 ng/ml EGF、20 ng/ml b-FGF和2%B27。将A549细胞种植于含无血清培养基的超低吸附培养板里,然后放置于培养箱内进行培养,每隔3 d进行半量换液,倒置显微镜下观察细胞成球情况。（2）收集普通培养和无血清条件培养的A549细胞,用流式细胞仪检测肺癌干细胞表面标记物CD133和ALDH1A1标记细胞的比例。3.实验分组将培养好的A549细胞分为空白对照组（Control）、蝎毒抗癌多肽（PESV）组和N... 

【文章来源】：济南大学山东省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
第一部分 体外分离、鉴定肺癌A549干细胞样细胞
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 主要试剂及材料
        1.1.3 主要仪器设备
    1.2 实验方法及步骤
        1.2.1 主要试剂配制方法
        1.2.2 细胞培养方法
        1.2.3 悬浮细胞的培养
        1.2.4 流式细胞仪检测无血清培养条件下CD133和ALDH1A1 标记的肺癌A549干细胞样细胞比例
        1.2.5 MTT检测无血清培养下A549 细胞的增殖能力
        1.2.6 克隆实验检测无血清培养下A549 细胞的增殖能力
        1.2.7 统计分析
    1.3 实验结果
        1.3.1 培养过程中A549 细胞形态学变化
        1.3.2 普通培养与无血清条件培养A549 细胞生长的差异
        1.3.3 无血清培养对CD133和ALDH1A1 标记的肺癌A549 干细胞样细胞比例的影响
        1.3.4 无血清培养对A549 细胞增殖能力的影响
    1.4 小结
第二部分 蝎毒抗癌多肽对肺癌A549 干细胞样细胞影响的研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验药品
        2.1.3 主要试剂及材料
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 实验方法及步骤
        2.2.1 主要试剂配制方法
        2.2.2 实验分组
        2.2.3 Notch1-mRNA表达水平的检测
        2.2.4 MTT法检测肺癌A549 干细胞样细胞的增殖能力
        2.2.5 克隆实验检测肺癌A549 干细胞样细胞的增殖能力
        2.2.6 PE Annexin V检测肺癌A549 干细胞样细胞的凋亡
        2.2.7 流式细胞仪检测CD133和ALDH1A1 肺癌干细胞样比例
        2.2.8 成球实验检测肺癌A549 干细胞样细胞的成球能力
        2.2.9 Westernblotting法检测Notch1 及其下游基因Hes-1 蛋白、增殖凋亡相关基因蛋白、干性相关基因蛋白表达
        2.2.10 统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 无血清培养对A549 细胞中Notch1 的影响
        2.3.2 不同浓度PESV对肺癌A549 干细胞样细胞增殖的影响
        2.3.3 PESV对肺癌A549 干细胞样细胞中Notch1和Hes-1 表达的影响
        2.3.4 PESV对肺癌A549 干细胞样细胞增殖、凋亡的影响
        2.3.5 PESV对肺癌干细胞样细胞干性的影响
    2.4 小结
第三部分 蝎毒抗癌多肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞影响的研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 实验药品
        3.1.3 主要仪器设备
    3.2 实验方法及步骤
        3.2.1 主要试剂配制方法
        3.2.2 实验分组
        3.2.3 荷瘤裸鼠模型的建立
        3.2.4 组织脱水、包埋处理
        3.2.5 免疫组化检测增殖相关基因PCNA蛋白表达
        3.2.6 免疫荧光检测ALDH1A1 表达
        3.2.7 Notch1 及其下游基因Hes-1 蛋白、增殖凋亡相关基因蛋白、干性相关基因蛋白表达水平的检测
        3.2.8 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 PESV对荷瘤裸鼠肿瘤的影响
        3.3.2 PESV对荷瘤裸鼠肿瘤细胞干性的影响
    3.4 小结
讨论
结论
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]2015版WHO肺癌组织学分类变化及其临床意义[J]. 杨欣,林冬梅.  中国肺癌杂志. 2016(06)
[2]肺癌干细胞研究进展[J]. 杨栋,张培彤.  中国肿瘤. 2015(07)
[3]肺癌干细胞与肺癌的发生[J]. 刘哲亮,肖高明,陈跃军,吴冠宇.  中国组织工程研究. 2014(28)
[4]肺癌的流行病学及治疗现状[J]. 姚晓军,刘伦旭.  现代肿瘤医学. 2014(08)
[5]蝎毒多肽提取物对A549细胞增殖抑制作用机制研究[J]. 王晓慧,王兆朋,张月英,贾青,王朝霞,张捷,张维东.  中国中药杂志. 2012(11)
[6]肿瘤干细胞:起源与争论[J]. 钱其军,刘佳,吴孟超.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2007(06)
[7]蝎毒抗癌多肽的研究进展[J]. 张文萍.  中草药. 2002(12)



本文编号：3034971