原苏木素A对C5b-9介导下足细胞损伤的保护作用及其蛋白质组学研究

发布时间：2021-03-18 18:07

　　目的:补体系统介导的细胞损伤是肾小球疾病发生发展的重要机制之一。苏木作为一种传统中药,具抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌和免疫抑制等多种功效。课题组前期研究首次发现原苏木素A对C5b-9介导的足细胞损伤具有保护作用,但其分子机制尚不明确。本研究通过体外构建C5b-9攻击足细胞损伤模型,基于蛋白质组学技术,评价原苏木素A对C5b-9介导的足细胞损伤保护作用及潜在分子机制。方法:构建C5b-9膜攻击复合物足细胞损伤模型,用不同浓度的原苏木素A处理,CCK-8法检测原苏木素A对足细胞增殖的影响,免疫荧光法检测原苏木素A对足细胞标志蛋白Nephrin的表达和细胞定位的影响,流式检测原苏木素A对足细胞凋亡的影响,iTRAQ蛋白质组学方法检测原苏木素A作用后的蛋白质组变化,筛选差异表达蛋白,进行GO功能富集分析和KEGG Pathway富集分析,并对差异表达蛋白进行PPI互作网络分析,揭示原苏木素A对足细胞损伤保护作用的潜在分子机制,同时Western blot方法验证相关差异蛋白的表达变化。结果:（1）足细胞在原苏木素20、40、80、160μmol/L处理组增殖明显,在浓度为80μmol/L时足细胞... 

【文章来源】：黑龙江省中医药科学院黑龙江省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原苏木素A对足细胞增殖的影响

图 2 原苏 木 素 A 对足 细 胞 Ne p h r in 蛋白 表达 的 影响 。图 （ A ） 空 白 对照 组 ，图 （ B ） 原苏 木 素 A 处理 组 ，图 （C ） C 5b - 9 模型 组 Ne p h r in 是足 细 胞特 异 性蛋 白 ，一 种 跨 膜蛋 白 ，免 疫荧 光 结 果 显示 （ 如 图 2） ，正 常 情况 下 （图 2 A ），N e p h r in 表 达于 足 细胞 的胞 膜 和胞 质 ，弥 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 击下 ， 足细 胞 数量 和密 度 减小 ，细 胞 核萎 缩 ，N e p h r in 表达 明显 减 少（ 图 2 C） ，提 示足 细 胞 损 伤严 重 ；在 原苏 木 素 A 作用 下 （ 图 2 B ），N e p h r in 表达 明 显高 于模 型 组， 足 细胞 形 态 和 结构 更接 近 空白 对 照 组， 说 明 原 苏木 素 对 C5 b - 9 介导 的 足 细 胞损 伤 有 保 护作 用 。 3. 3 原 苏木 素 A 对足 细 胞 凋 亡的 影 响

2 原苏 木 素 A 对足 细 胞 Ne p h r in 蛋白 表达 的 影响 。图 （ A ） 空 白 对照 组 ，图 （ 原苏 木 素 A 处理 组 ，图 （C ） C 5b - 9 模型 组 e p h r in 是足 细 胞特 异 性蛋 白 ，一 种 跨 膜蛋 白 ，免 疫荧 光 结 果 显示 （ 如 图 2） ，正 （图 2 A ），N e p h r in 表 达于 足 细胞 的胞 膜 和胞 质 ，弥 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 击下 数量 和密 度 减小 ，细 胞 核萎 缩 ，N e p h r in 表达 明显 减 少（ 图 2 C） ，提 示足 细 胞 ；在 原苏 木 素 A 作用 下 （ 图 2 B ），N e p h r in 表达 明 显高 于模 型 组， 足 细胞 形 态 接 近 空白 对 照 组， 说 明 原 苏木 素 对 C5 b - 9 介导 的 足 细 胞损 伤 有 保 护作 用 。 3 原 苏木 素 A 对足 细 胞 凋 亡的 影 响

【参考文献】：
期刊论文
[1]虫草素对补体复合物介导的足细胞损伤的保护作用[J]. 洪涛,崔路可,文集,张明华,樊均明.  四川大学学报(医学版). 2015(02)
[2]足细胞靶向治疗蛋白尿性肾脏病的新时代[J]. 王建中.  中华肾病研究电子杂志. 2014(01)
[3]亚溶量C5b-9与足细胞损伤及其信号传导的研究进展[J]. 卢宏柱,周建华.  临床儿科杂志. 2008(01)



本文编号：3088704