远志酸对关节炎的作用及机制研究

发布时间：2021-03-24 18:27

　　骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是一种慢性退行性关节疾病,目前已被证明与软骨细胞中基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）的过度表达密切相关。远志酸是从远志根中分离提纯的一种三萜类化合物。本课题研究了远志酸对OA的抗炎作用,同时研究了其体内外的作用机制。本研究中,我们采用白细胞介素1 β（interleukin-1beta,IL-1 β）诱导大鼠软骨细胞构建OA的体外炎症模型,用不同浓度的远志酸处理该软骨细胞,采用实时PCR和免疫印迹法（Western blotting,WB）检测 MMP-3、MMP-9、MMP-13 和 COX-2 的表达情况。此外,通过免疫印迹和免疫荧光染色分析上述表达改变是否与丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路和 Wnt/β-catenin 信号通激活相关。在大鼠体内OA模型中,我们采用经关节腔注射远志酸,通过大体形态学和组织学评分以评估远志酸是否可以修复软骨损伤。实验结果表明,远志酸可显著降低IL-1 β诱导下大鼠软骨细胞的MMPs和COX... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．远志酸分子结构式??

４．１远志酸对软骨细胞毒性的影响??采用ＣＣＫ－８法测定远志酸对大鼠软骨细胞毒性的影响。结果表明，ｌＯＯ＾Ｍ远??志酸处理４８小时后，软骨细胞活力没有受到不利影响（图２）。??４８ｈ??１２０－１??＿??Ｐｏｌｙｇａｌａｃｉｃ?ａｃｉｄ?０?２５?５０?７５?１００?（ｍＭ）??图２．?ＣＫＫ８检测软骨细胞在不同浓度远志酸（〇，?２５，?５０，７５和ＩＯＯｈＭ）处理４８??小时后的对细胞活力的影响。??４．２远志酸对大鼠软骨细胞在ＩＬ－１?０诱导下的炎症反应及ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，??ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２表达的影响??本实验采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ以测量大鼠软骨细胞在ＩＬ－１?Ｐ诱导下的??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的表达。ＲＴ－ＰＣＲ显示大鼠软骨细胞中??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表达在ＩＬ－１?０刺激下显著性增加??（ｐ＜０．０５），但远志酸可以显著性降低此类ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表达（ｐ＜〇．〇５），并且呈现剂量依赖性（图３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白质表达结果与上述ＲＴ－ＰＣＲ结果相似（ｐ＜０．０５）??（图３Ｅ－Ｉ）。此外

ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表达在ＩＬ－１?０刺激下显著性增加??（ｐ＜０．０５），但远志酸可以显著性降低此类ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表达（ｐ＜〇．〇５），并且呈现剂量依赖性（图３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白质表达结果与上述ＲＴ－ＰＣＲ结果相似（ｐ＜０．０５）??（图３Ｅ－Ｉ）。此外，糖胺聚糖是软骨细胞外基质中的代表性成分之一，可通过番红??０染色检测。我们的数据显示，远志酸修复了软骨细胞中ＩＬ－１Ｐ诱导下的番红０??２３??


本文编号：3098182