田螺硫酸多糖的制备、表征及稳定动脉粥样硬化斑块作用研究
发布时间：2021-04-23 10:52
动脉粥样硬化（AS）易损斑块作为所有心脑血管疾病的共同病理基础,为冠心病、脑梗死及外周血管病的主要诱因,其进一步累及心脏而引起的冠状AS性心脏病排名全球死亡原因中的首位。针对易损斑块形成及破裂机制,研发有效治疗药物及方法,促使斑块向稳定方向转变,不仅是预防AS及继发疾病的重要方法,而且是国内外心血管学界面临的重点课题。“降脂化痰、扶正化瘀”为中医目前治疗AS斑块的主要治则之一。硫酸多糖在免疫调节和抗凝血方面具有的显著作用,满足了 AS斑块“降脂化痰、扶正化瘀”治疗的功效和理论需求。其已在AS斑块防治方面显示出巨大潜能。水产动物所处的特殊环境造就了其多糖高硫酸基含量的结构基础,其为目前天然硫酸多糖获取的主要来源之一。田螺为圆田螺属一种贝类软体动物。田螺肉自古就是我国城乡居民十分喜欢的一种美味佳肴,同时还是历代医家的一味除疾良药。作为一种习见的药食同源水产动物,其生长环境满足了其体内硫酸多糖合成的天然条件。因此,基于该资源,制备开发硫酸多糖,并深入研究该硫酸多糖对AS斑块的作用及机制,是一个非常有理论价值和现实意义的课题。目的:本课题旨在通过对田螺硫酸多糖（Sulfated polysac...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献研究
第一节 水产动物多糖的研究进展
一、水产动物多糖的提取
二、水产动物多糖的分离纯化
三、水产动物多糖的结构表征
四、水产动物多糖的药理活性
五、小结
第二节 田螺多糖的研究进展
第三节 AS斑块内血管新生与斑块稳定性的研究进展
第四节 PI3K/Akt/mTOR信号转导通路血管新生调控中的研究进展
第五节 硫酸多糖抗AS的研究进展
一、硫酸多糖抑制血管内皮细胞损伤
二、硫酸多糖调节血管平滑肌细胞增殖和迁移
三、硫酸多糖减少炎性细胞、淋巴细胞、血小板等粘附和聚集到血管内膜
四、小结
第二章 CCPSs制备方法的构建
第一节 CCPSs粗多糖超声同步耦合酶解提取法的构建
一、实验材料、试剂及主要仪器
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第二节 CCPSs粗多糖中蛋白杂质循环冻融脱除法的构建
一、实验材料、主要仪器及试剂
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第三节 CCPSs粗多糖离子交换与分子筛凝胶柱色谱联合分级纯化法的构建
一、实验试剂及主要仪器
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第四节 本章小结
第三章 CCPSs理化性质及结构鉴定研究
一、实验主要仪器及试剂
（一） 主要仪器
（二） 实验试剂
二、实验方法
（一） CCPSs的制备
（二） CCPSs的脱硫
（三） CCPSs外观性状观察和溶解度的测定
（四） CCPSs总糖含量的测定
（五） CCPSs蛋白质含量的测定[14]
（六） CCPSs中硫酸基含量的测定
（七） CCPSs糖醛酸含量的测定
（八） CCPSs的UV-vis光谱分析
（九） CCPSs及其甲基化样品的IR光谱分析
（十） CCPSs单糖组成的测定
（十一） CCPSs分子量测定及均质性的评价
（十二） 高碘酸氧化和Smith降解分析
（十三） 甲基化分析
（十四） 核磁共振波谱分析
三、实验结果与分析
（一） CCPSs性状观察和溶解度测定结果与分析
（二） 总糖、硫酸基、蛋白质和糖醛酸含量测定结果与分析
（三） CCPSs的UV-vis和IR光谱分析结果与分析
（四） CCPSs的单糖组成测定结果与分析
（五） CCPSs的分子量测定及均质性评价结果与分析
（六） CCPSs和dsCCPSs的高碘酸氧化和Smith降解结果与分析
（七） CCPSs和dsCCPSs的甲基化结果与分析
（八） CCPSs的NMR波谱结果与分析
四、本章小结与讨论
第四章 CCPSs稳定动脉粥样硬化斑块的作用研究
一、实验动物、材料、主要试剂及仪器
（一） 实验动物
（二） 实验原料
（三） 主要试剂
（四） 主要仪器
二、实验方法
（一） 给药剂量的选择
（二） 动物饲养及伦理
（三） 动物模型复制及给药方案
（四） 病理取材
（五） 药效评价
（六） 数据统计学分析与处理
三、实验结果与分析
（一） 分组给药前的模型确认
（二） 药物干预过程中各组小鼠体重的变化情况
（三） CCPSs对AS小鼠血脂水平及AI的影响
（四） CCPSs对小鼠主动脉和斑块形态及斑块与管腔面积比例的影响
（五） CCPSs对小鼠主动脉斑块内脂质含量的影响
（六） CCPSs对小鼠主动脉斑块内巨噬细胞含量的影响
（七） CCPSs对小鼠主动脉斑块内胶原含量的影响
（八） CCPSs对小鼠主动脉斑块内平滑肌细胞含量的影响
（九） CCPSs对小鼠主动脉斑块内VI值的影响
四、小结与讨论
第五章 CCPSs稳定AS斑块的作用机制研究
一、实验材料、主要仪器及试剂
（一） 实验动物
（二） 实验细胞
（三） 实验材料
（四） 主要仪器
（五） 主要试剂
二、实验方法
（一） 体内动物实验
（二） 体外细胞实验
（三） 统计学方法
三、实验结果与分析
（一） CCPSs对斑块内血管新生的影响
（二） CCPSs对斑块内PI3K/Akt/mTOR通路信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（三） CCPSs对斑块内VEGF和MMP-9信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（四） CCPSs对HUVECs的细胞毒性
（五） CCPSs对HUVECs通路信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（六） CCPSs对HUVECs的Matrigel胶管腔形成情况的影响
四、小结与讨论
结语
参考文献
附录
在校期间发表论文情况
致谢
统计学审核证明
【参考文献】：
期刊论文
[1]虾夷扇贝多糖提取及纯化方法的优化[J]. 刘瑀,方志强,刘宇馨,娄亚迪. 食品科学. 2017(18)
[2]拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力[J]. 孙玉林,戴宏杰,文菁,张卫,赵娟,田丽,陈道海. 食品科学. 2017(18)
[3]响应面优化酶解法提取缢蛏多糖的工艺研究[J]. 吕凤娇. 泉州师范学院学报. 2016(06)
[4]超声波辅助提取泥鳅多糖的工艺优化[J]. 党晓妍,王茵,苏永昌,刘淑集,吴成业,陈丽娇. 渔业研究. 2016(05)
[5]紫贻贝多糖酶法制备工艺研究[J]. 韩莹,曲有乐. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2016(05)
[6]海湾扇贝多糖的纯化、分离及抗肿瘤活性研究[J]. 李雪梅,李丽梅,陈辉,冀鹏,王颉. 中国食品学报. 2016(07)
[7]海参精多糖提取工艺优化及其体外抗肿瘤活性[J]. 王婷,刘京熙,张健,刘昕,赵云苹,井月欣,王共明,王茂剑. 食品工业科技. 2016(17)
[8]超滤膜分离牡蛎多糖工艺研究[J]. 郑亚旭,石璇,李欣遥,佟长青,李伟. 安徽农业科学. 2016(19)
[9]响应面法优化近江牡蛎多糖提取工艺[J]. 牛改改,游刚,张晨晓,余振宁. 南方农业学报. 2016(06)
[10]响应面优化酶法提取泥鳅多糖工艺的研究[J]. 党晓妍,王茵,苏永昌,刘淑集,吴成业,陈丽娇. 福建农业学报. 2016(07)
博士论文
[1]舒脉胶囊干预动脉粥样硬化斑块内血管新生的作用及机理研究[D]. 乔云.山东大学 2014
[2]两种海参多糖的分离纯化、结构鉴定及其生物活性研究[D]. 董晓弟.南京农业大学 2014
[3]不同海洋生境来源微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究[D]. 陈艳丽.中国海洋大学 2013
[4]超声对麦冬多糖结构、溶液行为及生物活性影响的研究[D]. 王小梅.陕西师范大学 2013
[5]青蛤多糖分离鉴定、硫酸酯化及其生物活性研究[D]. 蒋长兴.南京农业大学 2011
[6]通脉地仙丸对动脉粥样硬化斑块内血管新生及其稳定性影响的研究[D]. 赵珊珊.广州中医药大学 2010
[7]“以脾论治，内清外柔”法对高血脂致动脉粥样硬化家兔脂质代谢及血管内皮功能影响的实验研究[D]. 李曦明.辽宁中医学院 2005
[8]泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理[D]. 张晨晓.华中科技大学 2005
硕士论文
[1]牡蛎糖原和多肽的制备及重金属的脱除[D]. 谢昕蛰.江南大学 2016
[2]冬青素A经PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管新生抗肝癌增殖[D]. 王娟.扬州大学 2016
[3]马氏珠母贝多糖的结构分析及体外抗氧化活性的研究[D]. 郭妍妍.广东海洋大学 2015
[4]近江牡蛎糖原提取、纯化及化学结构研究[D]. 张联怡.广东海洋大学 2013
[5]血管毁损术对动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块稳定性影响的研究[D]. 高雪.第四军医大学 2012
[6]PEF结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖及其抑菌、免疫活性研究[D]. 卢晓燕.福建农林大学 2012
[7]鲍鱼脏器粗多糖的提取工艺及降血脂活性研究[D]. 余鑫.福建农林大学 2012
[8]泥螺糖胺聚糖的提取、纯化与功能活性研究[D]. 许江鹭.天津科技大学 2012
[9]鲍鱼内脏多糖的结构和活性研究[D]. 刘春燕.东北师范大学 2011
[10]福寿螺多糖的提取及抗乙肝病毒实验研究[D]. 赵东贤.安徽理工大学 2010
本文编号：3155193
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献研究
第一节 水产动物多糖的研究进展
一、水产动物多糖的提取
二、水产动物多糖的分离纯化
三、水产动物多糖的结构表征
四、水产动物多糖的药理活性
五、小结
第二节 田螺多糖的研究进展
第三节 AS斑块内血管新生与斑块稳定性的研究进展
第四节 PI3K/Akt/mTOR信号转导通路血管新生调控中的研究进展
第五节 硫酸多糖抗AS的研究进展
一、硫酸多糖抑制血管内皮细胞损伤
二、硫酸多糖调节血管平滑肌细胞增殖和迁移
三、硫酸多糖减少炎性细胞、淋巴细胞、血小板等粘附和聚集到血管内膜
四、小结
第二章 CCPSs制备方法的构建
第一节 CCPSs粗多糖超声同步耦合酶解提取法的构建
一、实验材料、试剂及主要仪器
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第二节 CCPSs粗多糖中蛋白杂质循环冻融脱除法的构建
一、实验材料、主要仪器及试剂
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第三节 CCPSs粗多糖离子交换与分子筛凝胶柱色谱联合分级纯化法的构建
一、实验试剂及主要仪器
二、实验方法
三、实验结果与分析
四、小结与讨论
第四节 本章小结
第三章 CCPSs理化性质及结构鉴定研究
一、实验主要仪器及试剂
（一） 主要仪器
（二） 实验试剂
二、实验方法
（一） CCPSs的制备
（二） CCPSs的脱硫
（三） CCPSs外观性状观察和溶解度的测定
（四） CCPSs总糖含量的测定
（五） CCPSs蛋白质含量的测定[14]
（六） CCPSs中硫酸基含量的测定
（七） CCPSs糖醛酸含量的测定
（八） CCPSs的UV-vis光谱分析
（九） CCPSs及其甲基化样品的IR光谱分析
（十） CCPSs单糖组成的测定
（十一） CCPSs分子量测定及均质性的评价
（十二） 高碘酸氧化和Smith降解分析
（十三） 甲基化分析
（十四） 核磁共振波谱分析
三、实验结果与分析
（一） CCPSs性状观察和溶解度测定结果与分析
（二） 总糖、硫酸基、蛋白质和糖醛酸含量测定结果与分析
（三） CCPSs的UV-vis和IR光谱分析结果与分析
（四） CCPSs的单糖组成测定结果与分析
（五） CCPSs的分子量测定及均质性评价结果与分析
（六） CCPSs和dsCCPSs的高碘酸氧化和Smith降解结果与分析
（七） CCPSs和dsCCPSs的甲基化结果与分析
（八） CCPSs的NMR波谱结果与分析
四、本章小结与讨论
第四章 CCPSs稳定动脉粥样硬化斑块的作用研究
一、实验动物、材料、主要试剂及仪器
（一） 实验动物
（二） 实验原料
（三） 主要试剂
（四） 主要仪器
二、实验方法
（一） 给药剂量的选择
（二） 动物饲养及伦理
（三） 动物模型复制及给药方案
（四） 病理取材
（五） 药效评价
（六） 数据统计学分析与处理
三、实验结果与分析
（一） 分组给药前的模型确认
（二） 药物干预过程中各组小鼠体重的变化情况
（三） CCPSs对AS小鼠血脂水平及AI的影响
（四） CCPSs对小鼠主动脉和斑块形态及斑块与管腔面积比例的影响
（五） CCPSs对小鼠主动脉斑块内脂质含量的影响
（六） CCPSs对小鼠主动脉斑块内巨噬细胞含量的影响
（七） CCPSs对小鼠主动脉斑块内胶原含量的影响
（八） CCPSs对小鼠主动脉斑块内平滑肌细胞含量的影响
（九） CCPSs对小鼠主动脉斑块内VI值的影响
四、小结与讨论
第五章 CCPSs稳定AS斑块的作用机制研究
一、实验材料、主要仪器及试剂
（一） 实验动物
（二） 实验细胞
（三） 实验材料
（四） 主要仪器
（五） 主要试剂
二、实验方法
（一） 体内动物实验
（二） 体外细胞实验
（三） 统计学方法
三、实验结果与分析
（一） CCPSs对斑块内血管新生的影响
（二） CCPSs对斑块内PI3K/Akt/mTOR通路信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（三） CCPSs对斑块内VEGF和MMP-9信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（四） CCPSs对HUVECs的细胞毒性
（五） CCPSs对HUVECs通路信号分子的mRNA和蛋白表达影响
（六） CCPSs对HUVECs的Matrigel胶管腔形成情况的影响
四、小结与讨论
结语
参考文献
附录
在校期间发表论文情况
致谢
统计学审核证明
【参考文献】：
期刊论文
[1]虾夷扇贝多糖提取及纯化方法的优化[J]. 刘瑀,方志强,刘宇馨,娄亚迪. 食品科学. 2017(18)
[2]拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力[J]. 孙玉林,戴宏杰,文菁,张卫,赵娟,田丽,陈道海. 食品科学. 2017(18)
[3]响应面优化酶解法提取缢蛏多糖的工艺研究[J]. 吕凤娇. 泉州师范学院学报. 2016(06)
[4]超声波辅助提取泥鳅多糖的工艺优化[J]. 党晓妍,王茵,苏永昌,刘淑集,吴成业,陈丽娇. 渔业研究. 2016(05)
[5]紫贻贝多糖酶法制备工艺研究[J]. 韩莹,曲有乐. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2016(05)
[6]海湾扇贝多糖的纯化、分离及抗肿瘤活性研究[J]. 李雪梅,李丽梅,陈辉,冀鹏,王颉. 中国食品学报. 2016(07)
[7]海参精多糖提取工艺优化及其体外抗肿瘤活性[J]. 王婷,刘京熙,张健,刘昕,赵云苹,井月欣,王共明,王茂剑. 食品工业科技. 2016(17)
[8]超滤膜分离牡蛎多糖工艺研究[J]. 郑亚旭,石璇,李欣遥,佟长青,李伟. 安徽农业科学. 2016(19)
[9]响应面法优化近江牡蛎多糖提取工艺[J]. 牛改改,游刚,张晨晓,余振宁. 南方农业学报. 2016(06)
[10]响应面优化酶法提取泥鳅多糖工艺的研究[J]. 党晓妍,王茵,苏永昌,刘淑集,吴成业,陈丽娇. 福建农业学报. 2016(07)
博士论文
[1]舒脉胶囊干预动脉粥样硬化斑块内血管新生的作用及机理研究[D]. 乔云.山东大学 2014
[2]两种海参多糖的分离纯化、结构鉴定及其生物活性研究[D]. 董晓弟.南京农业大学 2014
[3]不同海洋生境来源微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究[D]. 陈艳丽.中国海洋大学 2013
[4]超声对麦冬多糖结构、溶液行为及生物活性影响的研究[D]. 王小梅.陕西师范大学 2013
[5]青蛤多糖分离鉴定、硫酸酯化及其生物活性研究[D]. 蒋长兴.南京农业大学 2011
[6]通脉地仙丸对动脉粥样硬化斑块内血管新生及其稳定性影响的研究[D]. 赵珊珊.广州中医药大学 2010
[7]“以脾论治，内清外柔”法对高血脂致动脉粥样硬化家兔脂质代谢及血管内皮功能影响的实验研究[D]. 李曦明.辽宁中医学院 2005
[8]泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理[D]. 张晨晓.华中科技大学 2005
硕士论文
[1]牡蛎糖原和多肽的制备及重金属的脱除[D]. 谢昕蛰.江南大学 2016
[2]冬青素A经PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管新生抗肝癌增殖[D]. 王娟.扬州大学 2016
[3]马氏珠母贝多糖的结构分析及体外抗氧化活性的研究[D]. 郭妍妍.广东海洋大学 2015
[4]近江牡蛎糖原提取、纯化及化学结构研究[D]. 张联怡.广东海洋大学 2013
[5]血管毁损术对动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块稳定性影响的研究[D]. 高雪.第四军医大学 2012
[6]PEF结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖及其抑菌、免疫活性研究[D]. 卢晓燕.福建农林大学 2012
[7]鲍鱼脏器粗多糖的提取工艺及降血脂活性研究[D]. 余鑫.福建农林大学 2012
[8]泥螺糖胺聚糖的提取、纯化与功能活性研究[D]. 许江鹭.天津科技大学 2012
[9]鲍鱼内脏多糖的结构和活性研究[D]. 刘春燕.东北师范大学 2011
[10]福寿螺多糖的提取及抗乙肝病毒实验研究[D]. 赵东贤.安徽理工大学 2010
本文编号：3155193
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