青蒿琥酯调节肺癌患者细胞毒性T淋巴细胞CD39与PD-1分子表达及其抗肿瘤作用

发布时间：2021-05-10 04:41

　　目的:研究青蒿素的衍生物一青蒿琥酯（Artesunate,ARS）对淋巴细胞的抗肺癌细胞作用的影响,观察ARS作用后的淋巴细胞表面CD39和PD-1分子的表达量是否有变化,尤其杀伤性T淋巴细胞即细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic20lymphocyte，CTL）表面CD39和PD-1分子表达水平改变是否有统计学意义。将ARS作用诱导后的淋巴细胞与肺癌细胞共培养,观察分析肺癌细胞的增殖是否发生显著抑制或增加、肺癌细胞的凋亡水平是否出现明显增加或降低。方法:通过流式细胞术（Flow20cytometry,FCM）检测不同浓度ARS对淋巴细胞的抑制率,得到ARS作用淋巴细胞的最适宜作用浓度;通过FCM检测正常人与肺癌患者体内杀伤性T淋巴细胞表面CD39和PD-1分子的表达含量百分比,对比ARS诱导与否这一因素对其表面分子表达水平的影响;通过FCM检测ARS诱导与否的淋巴细胞与肺癌细胞共培养后肺癌细胞的增殖与凋亡情况;通过FCM检测ARS诱导后的肺癌患者CTL胞内GrzB和PerF分子,以及Fas和FasL分子量。结果:1.根据流式所得数据绘制ARS处理PBMC细胞的时间依赖性和药物浓度依... 

【文章来源】：安徽理工大学安徽省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
注释说明清单
引言
1 ARS对PBMC的细胞抑制率
    1.1 材料
        1.1.1 材料和主要试剂
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 配制试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞采集与分离提取
        1.2.2 PBMC荷药
        1.2.3 FCM检测PBMC凋亡率
        1.2.4 药物浓度筛选实验
        1.2.5 统计学分析
    1.3 结果
    1.4 讨论
2 ARS影响CTL细胞表面CD39、PD-1分子表达
    2.1 材料
        2.1.1 材料和主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 配制试剂
    2.2 方法
        2.2.1 细胞采集与分离提取
        2.2.2 PBMC荷药
        2.2.3 抗体孵育
        2.2.4 FCM检测分子水平
    2.3 结果
        2.3.1 ARS影响健康捐献者CTL表面CD39、PD-1分子表达
        2.3.2 ARS影响肺癌患者CTL表面CD39、PD-1分子表达
        2.3.3 ARS影响肺癌患者Th细胞表面CD39、PD-1分子表达
    2.4 讨论
3 共培养的验证实验
    3.1 材料
        3.1.1 材料和主要试剂
        3.1.2 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 细胞采集与分离提取
        3.2.2 PBMC荷药
        3.2.3 肺癌细胞标记
        3.2.4 共培养
        3.2.5 抗体孵育
        3.2.6 FCM检测共培养后肺癌细胞CFSE与Annexin V的表达情况
    3.3 结果
    3.4 讨论
4 CTL作用肺癌细胞机制的初步探究
    4.1 材料
        4.1.1 材料和主要试剂
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 配制试剂
    4.2 方法
        4.2.1 细胞采集与分离提取
        4.2.2 PBMC荷药
        4.2.3 抗体孵育
        4.2.4 FCM检测GrzB/ PerF、Fas/FasL分子水平
    4.3 结果
        4.3.1 ARS诱导前后CTL GrzB/ PerF的表达水平
        4.3.2 ARS诱导前后CTL Fas/FasL的表达水平
    4.4 讨论
结论
参考文献
附录A 补充材料
附录B 补充材料
后记或致谢
作者简介及读研期间主要科研成果



本文编号：3178698