黄芪甲苷对高糖环境下人肾小球系膜细胞损伤保护作用及其机制研究
发布时间：2021-06-07 04:11
目的探讨黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对高糖（HG）环境下人肾小球系膜细胞（HMCs）增殖和氧化应激损伤保护作用及其可能机制。方法采用MTT方法检测高糖作用不同时间点时及不同浓度AS-Ⅳ干预后HMCs增殖情况;采用实时荧光定量PCR（qPCR）、Western blot方法分别检测不同浓度AS-Ⅳ干预高糖环境下HMCs 48 h后核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶1（HO-1）、诱导型一氧化氮合酶（iN-OS）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA及其蛋白表达;采用过氧化氢（H2O2）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒分别检测不同浓度AS-Ⅳ干预高糖环境下HMCs 48 h后细胞上清液中H2O2、T-SOD、GSH-Px、MDA含量变化。结果 MTT法结果显示,与正常（NG）组比较,高糖环境下HMCs呈过度增殖趋势（P<0.05）,不同浓度AS-Ⅳ干预48 h后,与HG组比较,各用药组明显地抑制了高糖环境下HMCs过度增殖且呈剂...
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(07)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同时间点时及不同浓度AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs增殖影响
图2高糖作用不同时间点时对HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白水平的影响A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG组;2:HG6h组;3:HG12h组;4:HG24h组;5:HG36h组;6:HG48h组;与NG组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01表2AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs上清液中H2O2、MDA、T-SOD、GSH-Px含量变化影响组别H2O2(mmol/L)MDA(nmol/ml)T-SOD(U/ml)GSH-Px(U)NG2．804±0．9651．349±0．48522．910±1．69841．377±14．189HG27．116±7．766＊＊4．606±0．459＊＊16．055±2．430＊＊9．359±5．065＊＊HG+AS-Ⅳ10μmol/L23．909±4．7323．609±0．211#19．353±1．3537．797±0．176HG+AS-Ⅳ25μmol/L22．451±5．1633．179±0．320##20．176±1．110##19．712±1．445HG+AS-Ⅳ50μmol/L12．702±4．349#2．737±0．421##20．711±1．175##36．058±12．980##HG+AS-Ⅳ100μmol/L11．577±1．560#1．968±0．419##22．190±1．538##53．366±14．903##与NG组比较:＊＊P＜0.01;与HG组比较:#P＜0.05，##P＜0.013讨论DN是糖尿病中最常见且最严重的慢性微血管并发症，现已经发展成为终末期肾脏疾病的首要原因［4］。研究［5］表明，MCs异常增殖、肾小球肥大和细胞外基质过多蓄积是DN病理变化的主要特征，最终导致肾脏纤维化。本实验研究显示，高糖能够促进HMCs过度增殖，与之前的研究［2］结论相一致。课题组前期研究［2］显示，高糖培养的MCs内出现了ROS过度生成的现象。而ROS的大量生成与细胞内氧化/抗氧化系统失衡有密切关系。本研究结果显示，高糖刺激HMCs后，细胞上清液中H2O2和
图3不同浓度AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白表达水平的影响A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG组;2:HG组;3:HG+AS-Ⅳ10μmol/L组;4:HG+AS-Ⅳ25μmol/L组;5:HG+AS-Ⅳ50μmol/L组;6:HG+AS-Ⅳ100μmol/L组;与NG组比较:＊＊P＜0.01;与HG组比较:#P＜0.05，##P＜0.01H2O2、MDA的含量;增加了HMCs上清液中T-SOD、GSH-Px的活性。提示AS-Ⅳ可能通过抗氧化作用，抑制了HMCs过度增殖。研究［6－8］表明，肾脏中过多表达的ROS不仅能够造成持续的氧化应激和降低有关抗氧化酶的表达，如降低SOD、GSH-Px等的表达，还能够活化许多细胞因子并且促进ICAM-1的产生，最终启动和参与糖尿病患者肾脏纤维化的发展。另外，肾小球系膜细胞作为肾小球固有细胞，过多分泌的ICAM-1能够引起肾小球和管状基底膜增厚，加快肾小球硬化和肾小管间质纤维化，进一步加速DN的进程［9－10］。有研究［11－12］已经证实，iNOS是肾脏中一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的主要亚型，作为氧化应激中的关键酶，一旦被诱导表达将在早期DN的发展中起到至关重要的作用，造成肾脏损伤。本研究显示，高糖能够上调HMCs中的iNOS和ICAM-1的表达，而AS-Ⅳ干预48h后则抑制了iNOS和ICAM-1的上调表达，提示AS-Ⅳ可能是通过下调iNOS和ICAM-1的表达，进一步抑制HMCs过度增殖减缓DN的进程。Nrf2是细胞氧化应激反应中的关键因子之一，也是细胞抗氧化还原的中枢调节者，通过调节抗氧化基因的表达实现对细胞免遭氧化应激的损伤［13］。当细胞遭受到氧化应激刺激后，结合在胞质内无转录活性的Nrf2与环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)相解离，使得大量
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪总苷对实验性糖尿病小鼠心肌保护作用的研究[J]. 韩佳,李卫平,栾家杰,李维祖. 安徽医科大学学报. 2012(03)
本文编号：3215830
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(07)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同时间点时及不同浓度AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs增殖影响
图2高糖作用不同时间点时对HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白水平的影响A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG组;2:HG6h组;3:HG12h组;4:HG24h组;5:HG36h组;6:HG48h组;与NG组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01表2AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs上清液中H2O2、MDA、T-SOD、GSH-Px含量变化影响组别H2O2(mmol/L)MDA(nmol/ml)T-SOD(U/ml)GSH-Px(U)NG2．804±0．9651．349±0．48522．910±1．69841．377±14．189HG27．116±7．766＊＊4．606±0．459＊＊16．055±2．430＊＊9．359±5．065＊＊HG+AS-Ⅳ10μmol/L23．909±4．7323．609±0．211#19．353±1．3537．797±0．176HG+AS-Ⅳ25μmol/L22．451±5．1633．179±0．320##20．176±1．110##19．712±1．445HG+AS-Ⅳ50μmol/L12．702±4．349#2．737±0．421##20．711±1．175##36．058±12．980##HG+AS-Ⅳ100μmol/L11．577±1．560#1．968±0．419##22．190±1．538##53．366±14．903##与NG组比较:＊＊P＜0.01;与HG组比较:#P＜0.05，##P＜0.013讨论DN是糖尿病中最常见且最严重的慢性微血管并发症，现已经发展成为终末期肾脏疾病的首要原因［4］。研究［5］表明，MCs异常增殖、肾小球肥大和细胞外基质过多蓄积是DN病理变化的主要特征，最终导致肾脏纤维化。本实验研究显示，高糖能够促进HMCs过度增殖，与之前的研究［2］结论相一致。课题组前期研究［2］显示，高糖培养的MCs内出现了ROS过度生成的现象。而ROS的大量生成与细胞内氧化/抗氧化系统失衡有密切关系。本研究结果显示，高糖刺激HMCs后，细胞上清液中H2O2和
图3不同浓度AS-Ⅳ对高糖环境下HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白表达水平的影响A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG组;2:HG组;3:HG+AS-Ⅳ10μmol/L组;4:HG+AS-Ⅳ25μmol/L组;5:HG+AS-Ⅳ50μmol/L组;6:HG+AS-Ⅳ100μmol/L组;与NG组比较:＊＊P＜0.01;与HG组比较:#P＜0.05，##P＜0.01H2O2、MDA的含量;增加了HMCs上清液中T-SOD、GSH-Px的活性。提示AS-Ⅳ可能通过抗氧化作用，抑制了HMCs过度增殖。研究［6－8］表明，肾脏中过多表达的ROS不仅能够造成持续的氧化应激和降低有关抗氧化酶的表达，如降低SOD、GSH-Px等的表达，还能够活化许多细胞因子并且促进ICAM-1的产生，最终启动和参与糖尿病患者肾脏纤维化的发展。另外，肾小球系膜细胞作为肾小球固有细胞，过多分泌的ICAM-1能够引起肾小球和管状基底膜增厚，加快肾小球硬化和肾小管间质纤维化，进一步加速DN的进程［9－10］。有研究［11－12］已经证实，iNOS是肾脏中一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的主要亚型，作为氧化应激中的关键酶，一旦被诱导表达将在早期DN的发展中起到至关重要的作用，造成肾脏损伤。本研究显示，高糖能够上调HMCs中的iNOS和ICAM-1的表达，而AS-Ⅳ干预48h后则抑制了iNOS和ICAM-1的上调表达，提示AS-Ⅳ可能是通过下调iNOS和ICAM-1的表达，进一步抑制HMCs过度增殖减缓DN的进程。Nrf2是细胞氧化应激反应中的关键因子之一，也是细胞抗氧化还原的中枢调节者，通过调节抗氧化基因的表达实现对细胞免遭氧化应激的损伤［13］。当细胞遭受到氧化应激刺激后，结合在胞质内无转录活性的Nrf2与环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)相解离，使得大量
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪总苷对实验性糖尿病小鼠心肌保护作用的研究[J]. 韩佳,李卫平,栾家杰,李维祖. 安徽医科大学学报. 2012(03)
本文编号：3215830
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