4-甲基瑞香素对原代神经元损伤与慢性应激性抑郁的调节作用
发布时间：2021-06-17 14:16
抑郁症（major depressive disorder,MDD）是一种以情绪压抑、悲观和失意为典型特征,在当今社会中比较常见的精神疾病。抑郁症不仅威胁着患者的健康与生活质量,还给患者家属带来了巨大的精神与经济负担。抑郁症发病原因复杂,目前已知的致病因素包括环境、遗传、神经生化等。海马是边缘系统中的一个重要脑区,是负责机体学习与短暂记忆的主要部位,也是目前抑郁症研究中涉及最多的脑区。当机体受到各种类型的应激或刺激时,海马会在结构和功能方面表现出高度的可塑性。持续大量地给予皮质酮会损坏海马神经元的结构,进而对学习记忆和认知功能造成损伤。虽然国内外学者已对抑郁症的发病机制做了大量研究,但其准确机理仍有待进一步探究。本研究建立皮质酮（corticosterone,CORT）诱导的原代神经元损伤模型,体外模拟抑郁症发生时体内糖皮质激素水平增高导致的海马受损过程,研究4-甲基瑞香素（7,8-dihydroxy-4-methylcoumarin,Dhmc）体外条件下对损伤神经元的保护作用。通过禁水禁食、冰泳、热泳、潮湿垫料、笼倾斜、夹尾、闪烁灯、拥挤合笼、摇晃、昼夜颠倒等每天随机1～2种应激方式...
【文章来源】：陕西师范大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图５：免疫荧光染色（２０Ｘ）??Ｆｉｇ．５．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（２０Ｘ）??
完全形成神经元网络结构。１５天左右，神经元开始退化，胞体出现圆形空泡导致??胞体膨胀，逐渐萎缩死亡。一般情况原代培养的神经元最多可以在体外培养２８天。??本实验我们采用第７天己经成熟且生长状况健康的神经元进行后续的实验（图４）。??２．３．２神经元鉴定??由于本实验采用怀孕１９？２０天的ＳＤ大鼠胚胎海马区作为神经元原代培养的来??源，所以在提取神经元的过程中会不可避免的混入一些杂质细胞，如血管内皮细??胞、胶质细胞等。为了鉴定第７天培养的细胞中神经元的纯度及神经元生长状态，??我们使用神经元树突特异性标记物ＭＡＰ－２对神经元进行免疫荧光染色。结果显示：??免疫荧光检测与形态学检测结果相吻合。培养至第７天的神经元胞体饱满，轴突??交联充分，神经元纯度较高，进一步说明神经元培养至第７天即可进行后续的实??验（图５）。??２．３．３?Ｄｈｍｃ细胞毒性结果??２、４、８、１６、３２和６４?ｐＭ的Ｄｈｍｃ与神经元共培养２４?ｈ后，形态学结果显??示各个浓度的Ｄｈｍｃ对神经元的生长无明显影响，细胞立体感明显，胞体透亮饱??满且神经元之间交联形成的神经元网络结构完整。ＭＴＴ法检测细胞活性，不同浓??度Ｄｈｍｃ处理的细胞与正常组细胞相比
满且神经元之间交联形成的神经元网络结构完整。ＭＴＴ法检测细胞活性，不同浓??度Ｄｈｍｃ处理的细胞与正常组细胞相比，细胞活力无显著差异。ＭＴＴ结果与细胞??成像结果一致，表明Ｄｈｍｃ在安全浓度内对神经元无毒性（图６）。??２．３．４皮质酮损伤神经元实验结果??形态学结果显示，５６０?｜ｘＭ和６４０?ｐＭ浓度的皮质酮作用于神经元２４?ｈ后即可??导致细胞明显损伤，表现为胞体膨胀、包膜破损、神经网络严重受损。ＭＴＴ法检??测结果显示，５６０＃和６４０?浓度的ＣＯＲＴ作用于神经元２４?ｈ后，其细胞存活??率分别为５６．２５．１％和３８．０７％，作用于４８?ｈ后细胞存活率分别下降至４６．４４％和??２３．９０％，呈浓度和时间依赖性下降。ＭＴＴ结果与细胞成像结果表明ＣＯＲＴ对神经??元的最佳损伤条件是５６０?ｐＭ作用２４?ｈ（图７）。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Melatonin Augments the Effects of Fluoxetine on Depression-Like Behavior and Hippocampal BDNF–TrkB Signaling[J]. Kun Li,Si Shen,Yu-Tian Ji,Xu-Yun Li,Li-San Zhang,Xiao-Dong Wang. Neuroscience Bulletin. 2018(02)
[2]抗抑郁药物治疗抑郁症的研究概况[J]. 王小党,何丽云,刘艳骄. 世界最新医学信息文摘. 2018(06)
[3]抑郁症治疗靶标及其药物研发进展[J]. 冯殿伟. 中国医院药学杂志. 2018(04)
[4]皮质酮对体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1表达的影响[J]. 罗森林,薄涛,刘通,熊佳佳,里健. 中国当代儿科杂志. 2017(09)
[5]抗抑郁症药物的研究与临床应用[J]. 古丽努尔·苏力坦汗. 广东化工. 2017(15)
[6]7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用[J]. 王建民,周冬亮,谭宏伟,王岳,徐瑛,关颖. 中南药学. 2017(04)
[7]神经生长因子对糖皮质激素诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用[J]. 夏颖华,孔晓冬,雷平,张释双,张明义,赵子龙,葛歆瞳. 中国现代神经疾病杂志. 2017(03)
[8]抑郁症海马神经可塑性损伤机制探讨及丹栀逍遥散调控作用的研究进展[J]. 龚胜兰,富文俊,黄彬青,孙繁鑫,桂丹,虢周科. 辽宁中医杂志. 2016(03)
[9]抑郁症发病机制研究进展[J]. 王睿,黄树明. 医学研究生学报. 2014(12)
[10]单胺氧化酶抑制剂在临床方面的应用[J]. 孙楷,孙凡,朱亮. 现代生物医学进展. 2014(06)
博士论文
[1]慢性应激性抑郁样行为发生中眶额叶5-HT2A受体与阿片肽的作用及其对神经可塑性的调节[D]. 徐畅.陕西师范大学 2016
硕士论文
[1]7,8-二羟基-4-甲基香豆素对氧化应激损伤及脑缺血缺氧损伤的保护及机制研究[D]. 金晓梅.苏州大学 2016
[2]慢性不可预见性应激大鼠海马喹啉酸对谷氨酸及其受体的调节[D]. 陈慧彬.陕西师范大学 2013
本文编号：3235355
【文章来源】：陕西师范大学陕西省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图５：免疫荧光染色（２０Ｘ）??Ｆｉｇ．５．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（２０Ｘ）??
完全形成神经元网络结构。１５天左右，神经元开始退化，胞体出现圆形空泡导致??胞体膨胀，逐渐萎缩死亡。一般情况原代培养的神经元最多可以在体外培养２８天。??本实验我们采用第７天己经成熟且生长状况健康的神经元进行后续的实验（图４）。??２．３．２神经元鉴定??由于本实验采用怀孕１９？２０天的ＳＤ大鼠胚胎海马区作为神经元原代培养的来??源，所以在提取神经元的过程中会不可避免的混入一些杂质细胞，如血管内皮细??胞、胶质细胞等。为了鉴定第７天培养的细胞中神经元的纯度及神经元生长状态，??我们使用神经元树突特异性标记物ＭＡＰ－２对神经元进行免疫荧光染色。结果显示：??免疫荧光检测与形态学检测结果相吻合。培养至第７天的神经元胞体饱满，轴突??交联充分，神经元纯度较高，进一步说明神经元培养至第７天即可进行后续的实??验（图５）。??２．３．３?Ｄｈｍｃ细胞毒性结果??２、４、８、１６、３２和６４?ｐＭ的Ｄｈｍｃ与神经元共培养２４?ｈ后，形态学结果显??示各个浓度的Ｄｈｍｃ对神经元的生长无明显影响，细胞立体感明显，胞体透亮饱??满且神经元之间交联形成的神经元网络结构完整。ＭＴＴ法检测细胞活性，不同浓??度Ｄｈｍｃ处理的细胞与正常组细胞相比
满且神经元之间交联形成的神经元网络结构完整。ＭＴＴ法检测细胞活性，不同浓??度Ｄｈｍｃ处理的细胞与正常组细胞相比，细胞活力无显著差异。ＭＴＴ结果与细胞??成像结果一致，表明Ｄｈｍｃ在安全浓度内对神经元无毒性（图６）。??２．３．４皮质酮损伤神经元实验结果??形态学结果显示，５６０?｜ｘＭ和６４０?ｐＭ浓度的皮质酮作用于神经元２４?ｈ后即可??导致细胞明显损伤，表现为胞体膨胀、包膜破损、神经网络严重受损。ＭＴＴ法检??测结果显示，５６０＃和６４０?浓度的ＣＯＲＴ作用于神经元２４?ｈ后，其细胞存活??率分别为５６．２５．１％和３８．０７％，作用于４８?ｈ后细胞存活率分别下降至４６．４４％和??２３．９０％，呈浓度和时间依赖性下降。ＭＴＴ结果与细胞成像结果表明ＣＯＲＴ对神经??元的最佳损伤条件是５６０?ｐＭ作用２４?ｈ（图７）。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Melatonin Augments the Effects of Fluoxetine on Depression-Like Behavior and Hippocampal BDNF–TrkB Signaling[J]. Kun Li,Si Shen,Yu-Tian Ji,Xu-Yun Li,Li-San Zhang,Xiao-Dong Wang. Neuroscience Bulletin. 2018(02)
[2]抗抑郁药物治疗抑郁症的研究概况[J]. 王小党,何丽云,刘艳骄. 世界最新医学信息文摘. 2018(06)
[3]抑郁症治疗靶标及其药物研发进展[J]. 冯殿伟. 中国医院药学杂志. 2018(04)
[4]皮质酮对体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1表达的影响[J]. 罗森林,薄涛,刘通,熊佳佳,里健. 中国当代儿科杂志. 2017(09)
[5]抗抑郁症药物的研究与临床应用[J]. 古丽努尔·苏力坦汗. 广东化工. 2017(15)
[6]7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用[J]. 王建民,周冬亮,谭宏伟,王岳,徐瑛,关颖. 中南药学. 2017(04)
[7]神经生长因子对糖皮质激素诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用[J]. 夏颖华,孔晓冬,雷平,张释双,张明义,赵子龙,葛歆瞳. 中国现代神经疾病杂志. 2017(03)
[8]抑郁症海马神经可塑性损伤机制探讨及丹栀逍遥散调控作用的研究进展[J]. 龚胜兰,富文俊,黄彬青,孙繁鑫,桂丹,虢周科. 辽宁中医杂志. 2016(03)
[9]抑郁症发病机制研究进展[J]. 王睿,黄树明. 医学研究生学报. 2014(12)
[10]单胺氧化酶抑制剂在临床方面的应用[J]. 孙楷,孙凡,朱亮. 现代生物医学进展. 2014(06)
博士论文
[1]慢性应激性抑郁样行为发生中眶额叶5-HT2A受体与阿片肽的作用及其对神经可塑性的调节[D]. 徐畅.陕西师范大学 2016
硕士论文
[1]7,8-二羟基-4-甲基香豆素对氧化应激损伤及脑缺血缺氧损伤的保护及机制研究[D]. 金晓梅.苏州大学 2016
[2]慢性不可预见性应激大鼠海马喹啉酸对谷氨酸及其受体的调节[D]. 陈慧彬.陕西师范大学 2013
本文编号：3235355
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