葛花中异黄酮类活性成分的分离及鉴定
发布时间：2021-07-22 04:23
建立了快速分离及鉴定葛花中活性化合物的方法。采用70%乙醇加热回流提取得到葛花提取物,以α-葡萄糖苷酶和乳酸脱氢酶作为生物靶分子,以超滤质谱技术筛选酶抑制剂。运用高速逆流色谱分离纯化所得酶抑制剂,以乙酸乙酯-乙醇-水（4.0∶0.5∶3.0,V/V/V）组成三元溶剂体系,从200 mg葛花粗提物中,一次性分离制备得到2.36 mg葛根素、8.57 mg鸢尾苷、5.34 mg染料木苷,经高效液相色谱分析其纯度均达到90.0%以上。该三个化合物均可与α-葡萄糖苷酶及乳酸脱氢酶亲和,具有潜在的抗糖尿病及抗脑卒中的活性。通过液-质联用技术及核磁共振波谱技术确定了每个化合物的结构。该方法简单、快速、高效,分离样品纯度高,适用于葛花中异黄酮类活性化合物的分离纯化及鉴定研究。
【文章来源】：分析科学学报. 2020,36(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
化合物染料木苷(A)、鸢尾苷(B)和葛根素(C)的结构
利用超滤色谱技术对葛花粗提物的乳酸脱氢酶(LDH)抑制活性的研究结果见图3。由图3可以看出,葛花粗提物中的化合物与1.0 U/mL LDH的结合效果最好。通过进行体外活性实验发现,葛花中6个化合物具有LDH的抑制活性。化合物的抑制活性顺序为:化合物4>化合物6>化合物3>化合物5>化合物2>化合物1。表2的数据表明,加LDH的样品中化合物的液相色谱峰面积均明显高于空白对照组。抑制率分别为28.26%、25.73%、24.54%、18.61%、16.34%和15.67%。证明葛花中的化学成分与LDH具有生物亲和能力,可以抑制LDH生物活性,具有潜在的抗脑卒中活性。图3 葛花提取物与0.2 U/mL(A)、0.5 U/mL(B)和1.0 U/mL(C)乳酸脱氢酶结合的色谱图
图2 葛花提取物与0.2 U/mL(A)、0.5 U/mL(B)和1.0 U/mL(C) α -葡萄糖苷酶结合的色谱图表2 受体结合能力通过液相色谱信号增强因子的表达Table 2 Expression of receptor binding ability by signal enhancement factor by liquid chromatography LDH(U) Inhibition rate of active ingredients in crude extract of P.Flos(%) 1 2 3 4 5 6 0.2 ND ND ND ND ND ND 0.5 ND ND ND ND ND ND 1.0 15.67 16.34 24.54 28.26 18.61 25.73 ND:not detected.
【参考文献】：
期刊论文
[1]超高效液相色谱-串联质谱技术分析人体血浆中硫酸吲哚酚及硫酸对甲酚含量[J]. 肖永华,革丽亚,朱庆,毛翔,万严建,黄常刚. 分析科学学报. 2019(02)
[2]UPLC-MS/MS同时测定银丹心脑通软胶囊中7种活性成分及药代动力学研究[J]. 贡磊磊,原会俊,王岚,殷小杰,许海玉,梁日欣,杨洪军. 中国中药杂志. 2017(23)
[3]HPLC测定显齿蛇葡萄茎中3种黄酮类成分的含量[J]. 常敬芳,覃洁萍,刁宇,黄志飘,刘鹏飞. 中国现代应用药学. 2017(08)
[4]野葛花葛根素的提取及稳定性研究[J]. 李玲,郭慧,何福林,闫旭宇. 中国食品添加剂. 2017(03)
[5]HPLC法测定葛花药材中鸢尾苷含量[J]. 陈玉兰,蒲清荣,魏嵋,赵剑,罗群,李能源. 亚太传统医药. 2016(08)
[6]山竹果中α-葡萄糖苷酶和黄嘌呤氧化酶抑制剂的超滤质谱分析[J]. 唐英,刘春明,任浚萁,张语迟,李赛男. 时珍国医国药. 2015(10)
[7]葛花总黄酮有效成分对大鼠胸主动脉血管活性影响及其构效关系[J]. 欧阳昌汉,林希,吴丹. 时珍国医国药. 2013(11)
[8]高效液相色谱法同时检测4种金线莲黄酮苷元及其在提取工艺评价中的应用[J]. 牟洋,李顺兴,陈丽惠,缪晓君,郑凤英. 分析科学学报. 2013(04)
[9]RP-HPLC测定马齿苋黄酮提取物中染料木苷的含量[J]. 雷红伟,徐丽君,董慧,邹欣,陆付耳. 中西医结合研究. 2013(04)
[10]高速逆流色谱分离金花葵花黄酮类化合物的条件研究[J]. 刘琦,杨富民. 甘肃农业大学学报. 2013(01)
硕士论文
[1]葛根和葛花的解酒护肝作用及其机理研究[D]. 高学清.江南大学 2013
[2]高速逆流色谱分离制备大豆皂苷的研究[D]. 吴永慧.上海交通大学 2010
本文编号：3296429
【文章来源】：分析科学学报. 2020,36(03)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
化合物染料木苷(A)、鸢尾苷(B)和葛根素(C)的结构
利用超滤色谱技术对葛花粗提物的乳酸脱氢酶(LDH)抑制活性的研究结果见图3。由图3可以看出,葛花粗提物中的化合物与1.0 U/mL LDH的结合效果最好。通过进行体外活性实验发现,葛花中6个化合物具有LDH的抑制活性。化合物的抑制活性顺序为:化合物4>化合物6>化合物3>化合物5>化合物2>化合物1。表2的数据表明,加LDH的样品中化合物的液相色谱峰面积均明显高于空白对照组。抑制率分别为28.26%、25.73%、24.54%、18.61%、16.34%和15.67%。证明葛花中的化学成分与LDH具有生物亲和能力,可以抑制LDH生物活性,具有潜在的抗脑卒中活性。图3 葛花提取物与0.2 U/mL(A)、0.5 U/mL(B)和1.0 U/mL(C)乳酸脱氢酶结合的色谱图
图2 葛花提取物与0.2 U/mL(A)、0.5 U/mL(B)和1.0 U/mL(C) α -葡萄糖苷酶结合的色谱图表2 受体结合能力通过液相色谱信号增强因子的表达Table 2 Expression of receptor binding ability by signal enhancement factor by liquid chromatography LDH(U) Inhibition rate of active ingredients in crude extract of P.Flos(%) 1 2 3 4 5 6 0.2 ND ND ND ND ND ND 0.5 ND ND ND ND ND ND 1.0 15.67 16.34 24.54 28.26 18.61 25.73 ND:not detected.
【参考文献】：
期刊论文
[1]超高效液相色谱-串联质谱技术分析人体血浆中硫酸吲哚酚及硫酸对甲酚含量[J]. 肖永华,革丽亚,朱庆,毛翔,万严建,黄常刚. 分析科学学报. 2019(02)
[2]UPLC-MS/MS同时测定银丹心脑通软胶囊中7种活性成分及药代动力学研究[J]. 贡磊磊,原会俊,王岚,殷小杰,许海玉,梁日欣,杨洪军. 中国中药杂志. 2017(23)
[3]HPLC测定显齿蛇葡萄茎中3种黄酮类成分的含量[J]. 常敬芳,覃洁萍,刁宇,黄志飘,刘鹏飞. 中国现代应用药学. 2017(08)
[4]野葛花葛根素的提取及稳定性研究[J]. 李玲,郭慧,何福林,闫旭宇. 中国食品添加剂. 2017(03)
[5]HPLC法测定葛花药材中鸢尾苷含量[J]. 陈玉兰,蒲清荣,魏嵋,赵剑,罗群,李能源. 亚太传统医药. 2016(08)
[6]山竹果中α-葡萄糖苷酶和黄嘌呤氧化酶抑制剂的超滤质谱分析[J]. 唐英,刘春明,任浚萁,张语迟,李赛男. 时珍国医国药. 2015(10)
[7]葛花总黄酮有效成分对大鼠胸主动脉血管活性影响及其构效关系[J]. 欧阳昌汉,林希,吴丹. 时珍国医国药. 2013(11)
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[9]RP-HPLC测定马齿苋黄酮提取物中染料木苷的含量[J]. 雷红伟,徐丽君,董慧,邹欣,陆付耳. 中西医结合研究. 2013(04)
[10]高速逆流色谱分离金花葵花黄酮类化合物的条件研究[J]. 刘琦,杨富民. 甘肃农业大学学报. 2013(01)
硕士论文
[1]葛根和葛花的解酒护肝作用及其机理研究[D]. 高学清.江南大学 2013
[2]高速逆流色谱分离制备大豆皂苷的研究[D]. 吴永慧.上海交通大学 2010
本文编号：3296429
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